高效液相色譜法測定地黃寡糖中水蘇糖含量

1、高效液相色譜法測定地黃寡糖中水蘇糖含量【摘要】目的建立高效液相色譜法測定地黃寡糖中水蘇糖含量方法。方法采用菲羅門RezexRP-nsaharidePb+8%7.8300色譜柱，以水為流動(dòng)相，流速0.8l/in，示差檢測器測定地黃寡糖中水蘇糖含量。結(jié)果在該色譜條件下，水蘇糖在0.203.20g/l范圍內(nèi)峰面積和進(jìn)樣質(zhì)量有良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)為0.9995。樣品平均回收率為99.9%，RSD為1.2%n=6。結(jié)論該方法靈敏可靠，專屬性強(qiáng)，且具有快速、簡便、重復(fù)性好的特點(diǎn)?！娟P(guān)鍵詞】地黃寡糖；水蘇糖；高效液相色譜Abstrat：bjetiveTestablishanHPLethdfrdeter

2、inatinfstahysententsinRehanniaGlutinsaligsaharides(RS).ethdsStahyseasdeterinedithRezexRP-nsaharidePb+8%7.8300lun,aterasbilephaseanddifferentialrefrativeindexdetetr.ResultsTherrelatineffiientbeteentheareafstahyseandstahysententas0.9995.Thesapleaveragereveryas99.9%,theRSDas1.2%(n=6).nlusinThisethdissi

3、ple,rapid,speifi,aurateandreprduible.Keyrds：RehanniaGlutinsaligsaharides(RS);Stahyse;HPL地黃首載于?神農(nóng)本草經(jīng)?，為玄科多年生草本植物RehanniaglutinseLibsh的根。地黃常被作為益智藥物使用。地黃飲子治療血管性癡呆39例，總有效率可達(dá)66.67%1。地黃飲子證明對中風(fēng)患者的神經(jīng)功能恢復(fù)具有良好的治療效果2。熟地黃水煎劑可以改善All3導(dǎo)致癡呆小鼠和大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能3。盡管地黃的藥理作用得到人們認(rèn)可，但地黃發(fā)揮作用的詳細(xì)成分并不清楚。由于以上地黃制劑在使用時(shí)均為其水溶性成分，因此，推斷其發(fā)揮

4、作用的應(yīng)為水溶性成分。在此推論的根底上制備了地黃寡糖4(Rehanniaglutinsaligsaharides，RS)，研究說明，RS對缺血再灌導(dǎo)致的大鼠學(xué)習(xí)記憶損傷具有保護(hù)作用4；對谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用5。為進(jìn)一步討論RS發(fā)揮藥理學(xué)作用的物質(zhì)根底，對RS中的水蘇糖含量進(jìn)展了測定。1儀器與試劑日本島津液相色譜儀一套，包括L-20ATVP色譜泵、RID-10A示差檢測器、柱溫箱、Lslutin1.03色譜工作站；KQ-250B超聲波清洗器，昆山市超聲儀器消費(fèi)；SYS-550型石英亞沸高純水蒸餾器，由金壇市丹陽門石英玻璃廠消費(fèi)；水蘇糖對照品，購于北京慧德易科技有限責(zé)任公司，純度9

5、9.8%。RS，自制，批號為20220301，20220302，20220303，20220304，20220401，20220402。2方法與結(jié)果2.1溶液的制備2.1.1對照品溶液的制備精細(xì)稱取水蘇糖對照品適量，加水制成每毫升含1.0g的溶液，即得。2.1.2供試品溶液的制備即自制RS，稀釋10倍，用0.45的膜濾過，作為供試品溶液。2.2色譜條件色譜柱：菲羅門RezexRP-nsaharidePb+8%7.8300；流動(dòng)相：水；流速：0.8l/in；柱溫：80，示差檢測器，進(jìn)樣量：10l。結(jié)果說明供試品溶液在水蘇糖位置上有相應(yīng)的峰存在，且與其它色譜峰可以基線別離。說明水蘇糖在此色譜條件下

6、別離良好。理論塔板數(shù)按水蘇糖計(jì)，應(yīng)不低于3000。色譜圖見圖1。2.3線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)分別精細(xì)稱取水蘇糖對照品，加水配制濃度分別為0.20，0.40，0.80，1.60，3.2g/l的溶液，按色譜條件分別進(jìn)樣10l，測得峰面積，以對照品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程為：Y=100409X-3340.9，r=0.9995。結(jié)果說明水蘇糖在0.203.20g/l時(shí)，濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.4精細(xì)度和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，10l/次，測定水蘇糖峰面積，其RSD為1.2，說明此法的精細(xì)度良好。取同一供試品溶液，并分別于0，3

7、，6，9，12，24h，按上述色譜條件，進(jìn)樣10l，測定水蘇糖含量，RSD為1.9%，說明水蘇糖在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.5加樣回收率實(shí)驗(yàn)取供試品6批，分別參加水蘇糖對照品1或2g，按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，進(jìn)樣，計(jì)算回收率，見表1，平均回收率為99.91%，RSD為1.20%。表1回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果略2.6樣品的測定取批號為20220301，20220302，20220303，20220304，20220401，20220402，20220101，20220102，20220103的RS，按上述方法測定水蘇糖含量，結(jié)果其水蘇糖含量均在9.012.0g/l之間。3討論水蘇糖在192n處有吸收

8、，但由于在此波長下干擾大，靈敏度差，因此選用了示差折光檢測器，雖然靈敏度低受溫度影響大，但由于樣品水蘇糖的含量高，故靈敏度低的缺乏得到補(bǔ)償。作者也嘗試了利用18柱及NH2柱，對流動(dòng)相進(jìn)展了挑選，但樣品均未能進(jìn)展基線別離。在選用專用別離糖的RezexRP-nsaharidePb+8%色譜柱后分析效果良好?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1謝靜紅.地黃飲子治療血管性癡呆39例J.福建中醫(yī)藥,2022,37(1):38.2何華，王桂香，鐘士江，等.地黃飲子對中風(fēng)恢復(fù)期患者神經(jīng)功能及體感誘發(fā)電位的影響J.山東醫(yī)藥,2022,4534:45.3崔瑛，顏正華，侯士良，等.熟地黃對動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶障礙及中樞氨基酸遞質(zhì)、受體的影響J.中國中藥雜志,2022,28(9):862.4楊菁，石