抗纖靈沖劑對單側(cè)輸尿管梗阻及再通后大鼠尿微量蛋白的影響

1、抗纖靈沖劑對單側(cè)輸尿管梗阻及再通后大鼠尿微量蛋白的影響【摘要】目的研究單側(cè)輸尿管梗阻UU及再通后大鼠尿微量蛋白的變化和抗纖靈對尿微量蛋白變化的影響。方法建立大鼠UU模型120只和UU再通模型90只，隨機分為正常組、假手術(shù)組、模型組、抗纖靈組和科素亞組。于造模后各時間點檢測大鼠尿轉(zhuǎn)鐵蛋白TRF、尿視黃醇結(jié)合蛋白RBP、尿2-微球蛋白2-。結(jié)果在UU模型中，模型組各時間點TRF、RBP、2-較正常組和假手術(shù)組明顯升高P0.01，并隨梗阻時間的延長逐漸升高。在UU再通模型中，各時間點TRF、RBP、2-較正常組和假手術(shù)組明顯升高P0.01，并隨梗阻時間的延長逐漸降低。與模型組比擬，抗纖靈能明顯降低兩

2、模型中TRF、RBP、2-。結(jié)論抗纖靈沖劑能減少UU模型和UU再通模型中的尿微量蛋白尿，改善兩種模型中的腎損傷?！娟P(guān)鍵詞】抗纖靈沖劑；單側(cè)輸尿管梗阻；單側(cè)輸尿管梗阻后再通；尿微量蛋白Abstrat：bjetiveTexplretheeffetsf“KangXianLingDetin(KXL)nurinaryirprtEininratsafterunilateralureteralbstrutinandreanalizatin.ethds120aleSprague-DaleyratsinUUdeland90aleSprague-DaleyratsinUUreanalizatindelereran

3、dlydividedint5grups:Nralgrup,Shae-peratedgrup,delgrup,KXLgrup,andLstartangrup.Urinarytransferrin(TRF),retinl-blindingprtEIn(RBP)and2-irglbuli(2-)eretestedeekly.ResultsInUUdel,thelevelsfTRF,RBP,2-indelgrupereinreased,paredithNralgrupandShae-peratedgrup,andithadsignifiantdiffereneP0.01.InUUdel,theleve

4、lsfTRF,RBP,2-indelgrupereinreasedparedithNralgrupandShae-peratedgrupP0.01,buttheyeredereased.paredithdelgrup,TRF,RBP,2-ntentsinKXLgruperedereasedsignifiantly.nlusinKangXianLingDetinandereaseurinaryirprteininratsafterUUandUUreanalizatin,andiprverenalfibrsis.Keyrds：KangXianLingDetin;Unilateralureteral

5、bstrutin;Reanalizatinafterunilateralureteralbstrutin;Urinaryirprtein尿微量蛋白是指尿中超過正常范圍但用常規(guī)定性或定量的方法難以檢出的一些蛋白質(zhì)。目前檢測尿微量蛋白對腎臟疾病的早期診斷具有重要作用，已被認為是診斷早期腎損害的靈敏指標1。尿微量蛋白既是腎小球疾病的標志，也是腎間質(zhì)纖維化病情開展最重要的獨立危險因素2。腎纖維化是幾乎所有慢性腎臟病進展導(dǎo)致腎功能損害的共同病理過程，尤其是腎小管間質(zhì)的纖維化與慢性腎臟病的預(yù)后更親密相關(guān)。單側(cè)輸尿管梗阻UU是研究腎纖維化的經(jīng)典實驗動物模型。UU能直接導(dǎo)致腎小管間質(zhì)纖維化TIF，并且嚙齒類動

6、物的腎纖維化的特征與人類相似3。在UU模型的腎纖維化起始和開展過程中，有許多細胞、分子的變化可以被容易地檢測定量，這使得UU越來越成為一個好的實驗研究模型4。然而，目前對UU模型的腎損傷研究缺少連續(xù)動態(tài)的觀察，并且UU后的尿液不能反映梗阻腎的腎損傷。因此，我們創(chuàng)造性的應(yīng)用UU再通技術(shù)，連續(xù)動態(tài)的多個時間點觀察UU后以及UU再通后，非梗阻腎和梗阻腎的尿微量蛋白變化?？估w靈沖劑是臨床治療慢性腎衰療效肯定的經(jīng)歷方。以往的研究應(yīng)用大鼠56腎切除所致腎小球硬化模型，證實抗纖靈不僅能減少24h尿蛋白定量延緩腎小球硬化進展5，而且能改善腎臟纖維化，延緩腎功能的惡化6。我們的研究首次應(yīng)用UU模型和UU再通模型

7、，觀察兩種模型中結(jié)合檢測尿轉(zhuǎn)鐵蛋白TRF、尿視黃醇結(jié)合蛋白RBP、尿2-微球蛋白2-的變化和抗纖靈沖劑的作用。1器材與方法1.1試劑與儀器抗纖靈沖劑組成：丹參30g，桃仁15g，全當(dāng)歸15g，牛膝15g，制大黃15g，取自上海市中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院中藥房?？扑貋喓贾菽硸|公司購自醫(yī)院藥房。尿轉(zhuǎn)鐵蛋白TRF、尿視黃醇結(jié)合蛋白RBP、尿2-微球蛋白2-測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。5多功能酶標儀。1.2動物及分組安康雄性SD清潔級大鼠,由上海中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供并飼養(yǎng)，自由飲食。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后分組。UU實驗大鼠120只，體質(zhì)量2067g,隨機分為空白組、假手術(shù)組、模型組、抗纖靈組

8、和科素亞組各24只。UU再通實驗大鼠90只，體質(zhì)量2066g，隨機分為空白組、假手術(shù)組、模型組、抗纖靈組和科素亞組各18只。1.3模型制備1.3.1UU模型制作方法先以3戊巴比妥鈉1.5l/kg腹腔注射麻醉，背部左肋脊角處做一縱行切口，游離左腎及輸尿管，在輸尿管中段兩端各用絲線結(jié)扎，不剪斷輸尿管，然后分層縫合。假手術(shù)組除不結(jié)扎輸尿管外，余步驟同上。1.3.2UU再通模型制作方法先制作UU模型，方法同上。假手術(shù)組除不結(jié)扎輸尿管外，余步驟一樣。1周后行再通術(shù)，麻醉方法和手術(shù)途徑同上，別離原結(jié)扎的左側(cè)輸尿管并去除結(jié)扎，再行右腎結(jié)扎。分層縫合。假手術(shù)組除不做再通輸尿管和結(jié)扎右腎外，余步驟同上。1.4給

9、藥方法抗纖靈組和科素亞組大鼠從造模后第1天起采用灌胃給藥。藥物溶液劑量均為成人劑量的10倍，1l/d。正常組、假手術(shù)組、模型組給予等量生理鹽水。1.5觀察指標和方法UU模型各組分別于造模后7，14，21，28d隨機選取6只大鼠置于代謝籠中搜集24h尿。UU再通模型各組分別于造模后7，14，21d隨機選取6只大鼠置于代謝籠中搜集24h尿。尿標本酶聯(lián)免疫法檢測TRF、RBP、2-。檢測方法嚴格按照試劑盒說明書。1.6統(tǒng)計學(xué)處理所有計量資料采用s表示，利用SPSS15.0軟件進展統(tǒng)計分析，采用單因素方差分析，應(yīng)用Levene檢驗進展方差齊性檢驗，組間樣本兩兩比擬用LSD-t檢驗，P0.05為差異有統(tǒng)

10、計學(xué)意義。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2結(jié)果2.1UU模型中尿微量蛋白尿變化模型組中各時間點的尿TRF、RBP、2-與正常組和假手術(shù)組比擬有顯著升高P0.01，并隨梗阻時間的延長逐漸升高?？估w靈組與模型組比擬，各時間點尿RBP、2-、TRF均有明顯下降，TRF分別下降了32.2%，46.2%，34.0%，31.9%P0.01；RBP分別下降了17.8%，31.9%，29.3%，26.7%P0.05，P0.01，P0.01，P0.01；2-分別下降了25.4%，22.9%，14.4%，13.4%P0.01，P0.01，P0.05，P0.05?？估w靈組與科素亞組比擬，TRF和RBP在14，21，28d均

11、有明顯降低P0.01。結(jié)果見表1。表1UU模型各組大鼠尿微量蛋白結(jié)果略)2.2UU再通模型中尿微量蛋白變化模型組中各時間點的尿TRF、RBP、2-與正常組和假手術(shù)組比擬有顯著升高P0.01，并隨解除梗阻時間的延長逐漸降低?？估w靈組與模型組比擬，各時間點尿RBP、2-、TRF均有明顯下降，TRF分別下降了39.4%，29.5%，23.9%P0.01或P0.05；RBP分別下降了27.5%，30.8%，30.8%P0.01；2-分別下降了13.3%，23.6%，22.5%P0.05或P0.01?？估w靈組與科素亞組比擬，僅RBP在第7天時有顯著差異，其余均無顯著差異P0.05。結(jié)果見表2。表2UU再

12、通模型各組大鼠尿微量蛋白結(jié)果略)3討論近年來尿液中的生物標志物的檢測引起關(guān)注，有學(xué)者認為可以替代腎活檢術(shù)判斷疾病的進展、監(jiān)測治療反響及判斷預(yù)后7。RBP、2-和TRF就是常用的尿液生物標志物。正常情況下，血漿相對分子質(zhì)量60000的蛋白質(zhì)較容易通過腎小球濾過膜，并幾乎被近端腎小管完全吸收和降解，而TRF由于分子質(zhì)量較大，相對分子質(zhì)量約為77000，加之由于膜電荷的選擇屏障作用，一般不從腎小球濾過膜濾出。但當(dāng)腎小球的濾過屏障受損時，尿中的TRF可明顯升高。TRF被認為是更早更敏感地反映腎小球濾過膜損傷的標志性蛋白8。2-屬于小分子蛋白，分子量約11800，在正常血中幾乎全部從腎小球濾過，約99.

13、9%被近曲小管重吸收，并在細胞內(nèi)被溶酶體系統(tǒng)分解。在近曲小管受損和腎小管間質(zhì)病變時，尿2-顯著增加。2-是經(jīng)典腎小管標記蛋白，可直接反映腎小管功能9。RBP是體內(nèi)正常存在的小分子蛋白，相對分子質(zhì)量21200，血漿中90以上的RBP與甲狀腺素前蛋白結(jié)合，形成大分子蛋白復(fù)合物，不能從腎小球自由濾過。血清中少量游離的RBP自由通過腎小球濾過膜，濾過的RBP在腎小管幾乎被全部重吸收降解。當(dāng)近端小管受損時，因重吸收功能下降，尿RBP可明顯升高。尿RBP穩(wěn)定性比2-好，檢測方法相對簡單，RBP作為判斷腎近端小管功能受損的指標較2-更理想10。目前研究認為，對腎臟損傷的檢測指標，結(jié)合檢測的陽性率要高于各指標

14、的單獨檢測11?？估w靈沖劑以活血化瘀、扶正降濁為原那么組方，藥味組成精簡，對慢性腎衰臨床療效顯著。以往的實驗研究證明，在大鼠腎缺血一再灌注模型中，抗纖靈能減輕腎內(nèi)血流動力學(xué)的紊亂，起到改善腎臟損傷和保護腎功能的作用12。而UU和UU再通后，首先是血流動力學(xué)的變化。我們的研究采用結(jié)合檢測尿微量蛋白方法應(yīng)用于UU和UU再通模型。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在UU模型中，模型組中各時間點的尿TRF、RBP和2-與正常組和假手術(shù)組相比有顯著性升高P0.01，并且隨梗阻時間的延長而更加明顯。提示在UU后，大鼠梗阻對側(cè)的“健腎出現(xiàn)了持續(xù)性的腎損傷。并且這種損傷隨梗阻時間的延長而加劇?！敖∧I的腎損傷可能與梗阻后，“健腎代償導(dǎo)

15、致腎單位高流量、高壓力、高濾過和重吸收增加有關(guān)。另外，在UU再通模型中，模型組中各時間點尿TRF、RBP和2-與正常組和假手術(shù)組相比同樣有顯著性升高P0.01，并且隨著解除梗阻的時間延長而趨于下降。提示在梗阻解除后，原來的梗阻腎仍存在腎損傷，這種損傷在梗阻解除21天時仍存在，但趨向逐步好轉(zhuǎn)。其損傷的原因可能與UU后腎小管間質(zhì)的纖維化及UU再通后血液動力學(xué)改變所致的再灌注損傷有關(guān)。但是，與UU模型不同，再通模型中的腎損傷隨梗阻時間的延長而逐步好轉(zhuǎn)。這兩種相反的趨勢是否與UU后梗阻腎纖維化的逐步加重，而再通后對側(cè)腎完全結(jié)扎后導(dǎo)致原來的梗阻腎成為獨腎的纖維化逐步好轉(zhuǎn)有關(guān)目前還不清楚。本實驗顯示，抗纖

16、靈沖劑能明顯減少UU后及UU再通后的尿微量蛋白，改善UU后及UU再通后的腎損傷。在兩種模型中，與模型組比擬，抗纖靈組能明顯減少尿TRF、RBP和2-，有統(tǒng)計學(xué)意義。在UU模型中，抗纖靈的療效要優(yōu)于目前臨床降蛋白尿作用明確的科素亞，尿TRF和RBP在14，21，28d均有明顯降低P0.01。【參考文獻】1SeguraJ，RuilpeL，RdiiJLiralbuinuriaJlinExpHypertens，2022，26：7012KeaneFPrtEinuria：itslinialiprtantandrleinprgressiverenaldiseaseJAJKidneyDis，2000，35(4

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