柴苓歸芪湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性腎病綜合征大鼠脂質(zhì)過氧化功能的影響

1、柴苓歸芪湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性腎病綜合征大鼠脂質(zhì)過氧化功能的影響【摘要】目的討論柴苓歸芪湯對(duì)脂質(zhì)過氧化損傷的保護(hù)作用。方法SD大鼠36只隨機(jī)分為模型組、辛伐他汀組、柴苓歸芪組和正常組。模型組、辛伐他汀組和柴苓歸芪組采用尾靜脈一次性注射阿霉素5g.kg復(fù)制腎病綜合征大鼠模型，正常組注射等量0.9%氯化鈉注射液。選模1周后開場(chǎng)灌胃，辛伐他汀組給予辛伐他汀1g.kgd，柴苓歸芪組給予柴苓歸芪湯煎劑27gkgd，蚓激酶每日給予1次2.5g.100g，1500U.g，共用藥5周。正常組和模型組灌服等量蒸餾水。分別用黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥法檢測(cè)血清及腎組織超氧化物歧化酶SD的活性和丙二醛DA含量。結(jié)果模型組血清及

2、腎組織中SD活性均較正常組明顯降低P0.05，P0.01，而DA含量卻較正常組升高P0.05，P0.01，提示阿霉素腎病AN大鼠去除氧自由基才能降低;柴苓歸芪組血清和腎組織SD活性明顯升高P0.05，P0.01，而DA含量明顯降低P0.05，P0.01，提示柴苓歸芪湯不僅能進(jìn)步全身氧自由基去除才能，而且能改善腎臟部分脂質(zhì)過氧化狀態(tài)。結(jié)論柴苓歸芪湯可以有效的增強(qiáng)腎病綜合征大鼠血清及腎組織SD活性，降低血清及腎組織DA含量，從而進(jìn)步機(jī)體抗氧化才能，減輕脂質(zhì)過氧化損傷?！娟P(guān)鍵詞】腎病綜合征大鼠SD脂質(zhì)過氧化超氧化物歧化酶;丙二醛【Abstrat】bjetiveTstudytheeffetfhaili

3、ngguiqidetinninjuryflipidperxidatin.ethds36ratdelfnephrtisyndreeredupliatedbyinjetinfAdriayin.Ratseredividedintdelgrup，Sivastatingrup，hailingguiqidetingrupandntrlgrup.Ratsindelsrupandntrlgruperetabkenbydistillednater.RatsinSivasfatingrupandhailigguiqigrupadinistratedseparatelySivastatin1g.kgdandhail

4、ing-guiqidetin.ThententsfSDandDAinseruandtissueeredetetedbyethdfxanthinxidaseandthi-bar-bitne.ResultsSDativityinseruandtissueindelgruperedereasedparediththseinntrlgrup.ThententfDAinseruandtissueindelgrupereinreasedparediththseinntrlgrup.TheresultsshedthatAdriayin-induednephrpathyratlssabilityfreving

5、xygenfreeradial.SDativityinseruandtis-sueinhailingguiqidetingrupereinreased.ThententfDAinseruandtissueinhailingguiqidetingruperedereased.nlusinhailingguiqidetinaneffetivelyinreaseSDativityinseruandtissueanddereasententfDAinseruandtissue，thenelevateabilityfantixygenfreeradial.【Keyrds】Nephrtisyndre;Li

6、pidperxidatin;SD;DA自由基是腎小球損傷的重要介質(zhì)1。近年來，有關(guān)氧化損傷、氧自由基對(duì)腎臟損傷的機(jī)制備受關(guān)注23。我們已從實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)了柴苓歸芪湯通過降低血脂、減少蛋白尿，保護(hù)阿霉素腎病AN大鼠的腎功能4。AN大鼠模型是經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)性腎病綜合征大鼠模型，本研究采用該型5，觀察柴苓歸芪湯對(duì)AN大鼠血清及腎組織超氧化物歧化酶SD、丙二醛DA的影響，討論其對(duì)脂質(zhì)過氧化損傷的保護(hù)作用。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與藥物1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用清潔級(jí)安康雄性SD大鼠36只，體重為18010g，由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供編號(hào)DK0311-0102。1.1.2實(shí)驗(yàn)用藥阿霉素:由汕頭經(jīng)濟(jì)特區(qū)明治醫(yī)藥

7、消費(fèi)批號(hào):020702，10g.支。柴苓歸芪湯由柴胡10g、黃芩10g、當(dāng)歸15g、黃芪30g、茯苓15g、豬苓12g地龍等組成按比例稱取后，水煎、過濾、濃縮，每L含生藥1.8g。鑒于地龍中主要活性成分蚓激酶在65以上酶活性開場(chǎng)下降，8530in酶活性完全喪失6，不能入煎劑，故用其提取物蚓激酶替代地龍沖服。蚓激酶:由北京百奧藥業(yè)有限責(zé)任公司消費(fèi)批號(hào):20220706，30萬單位.粒;辛伐他汀:由杭州默沙東制藥消費(fèi)批號(hào):N1027，10g.片。SD、DA試劑盒:南京建成生物工程研究所。1.2模型制備、分組與給藥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，分別置于代謝籠里取尿，檢測(cè)尿蛋白和尿紅細(xì)胞，結(jié)果全

8、部為陰性。按體重隨機(jī)分為正常組、模型組、辛伐他汀組和柴苓歸芪組。正常組為6只，其他3組均為10只。模型組、辛伐他汀組、柴苓歸芪組按5g.kg進(jìn)展一次性尾靜脈注射阿霉素，正常組注射等量0.9%氯化鈉注射液。造模1周后開場(chǎng)灌胃，辛伐他汀組給予辛伐他汀1g.kgd;柴苓歸芪組給予柴苓歸芪湯煎劑27g.kgd，用藥量為成人劑量的15倍;蚓激酶用量按文獻(xiàn)報(bào)道每日給予1次2.5g.100g，1500U.g7。共用藥5周。正常組和模型組灌服等量蒸餾水。1.3血清及組織制備1.3.1血清制備在實(shí)驗(yàn)第7周末用10%水合氯醛按30g.kg的劑量將大鼠腹腔注射麻醉，心臟采血，離心，取血清備用。1.3.2腎組織勻漿制

9、備在實(shí)驗(yàn)第7周末殺檢動(dòng)物，取部分腎組織液氮凍存。取適量?jī)龃娴哪I組織，在0用0.9%氧化鈉注射液漂洗，濾紙拭干，稱重。用0.9%氯化鈉注射液做勻漿緩沖液，制成10%組織勻漿。將玻璃勻漿器置于冰水中，上接電動(dòng)勻漿機(jī)充分研碎組織，使組織勻漿化。勻漿液于4，15000r.in，離心30in。取上清液-70冰箱凍存?zhèn)溆?，行SD、DA檢測(cè)。1.4檢測(cè)工程與方法1.4.1血清SD、DA檢測(cè)SD檢測(cè)用黃嘌呤氧化酶法，DA檢測(cè)用硫代巴比妥法，嚴(yán)格按照試劑盒操作規(guī)程進(jìn)展。1.4.2腎組織SD、DA檢測(cè)測(cè)定方法同血清。但腎組織SD、DA測(cè)定結(jié)果須用上清液中蛋白質(zhì)含量進(jìn)展校正。蛋白質(zhì)測(cè)定按福林-酚法Lry氏法進(jìn)展。1

10、.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS10.0frinds統(tǒng)計(jì)軟件，所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差xs表示，采用單因素方差分析法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)展統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2結(jié)果2.1動(dòng)物死亡情況正常組在實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡;辛伐他汀組于實(shí)驗(yàn)第6周死亡1只，模型組和柴苓歸芪組于實(shí)驗(yàn)第7周各死1只，可能是由于尾部感染所致。尾部感染與注射部位阿霉素滲漏引起部分缺血壞死有關(guān)。2.2各組大鼠血清SD、DA的測(cè)定見表1。表1各組大鼠血清SD、DA的比擬由表1可見，模型組大鼠血清SD活性明顯低于正常組P0.01，DA含量明顯高于正常組P0.01，提示AN大鼠全身抗氧化功能受損，存在脂質(zhì)過氧化損傷;辛伐他汀組與模型組相比，SD活性明顯增強(qiáng)P0.05

11、，DA含量顯著降低P0.01，說明柴苓歸芪湯和辛伐他汀有抗氧化損傷作用。辛伐他汀組與柴苓歸芪組比擬差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0.05。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3各組大鼠腎組織SD、DA測(cè)定見表2。表2各組大鼠腎組織SD、DA的比擬由表2可見，模型組大鼠腎組織SD活性明顯低于正常組P0.01，DA含量明顯高于正常組P0.05，提示AN大鼠腎組織中抗氧化功能受損，存在過氧化損傷;柴苓歸芪組和模型組相比，腎組織中SD活性明顯增強(qiáng)P0.05，DA含量顯著降低P0.05;而辛伐他汀組和模型組相比，雖然SD數(shù)值有所升高，DA數(shù)值有所降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示在腎組織中柴苓歸芪湯抗氧化損傷作用優(yōu)于辛伐他停3討論N

12、S屬于中醫(yī)學(xué)水腫范疇。其形成機(jī)理與正氣缺乏，氣滯、血瘀、水停等有關(guān)。治宜行氣利水，益氣活血，化瘀通絡(luò)。柴苓歸芪湯就是在此法指導(dǎo)下，結(jié)合現(xiàn)代中藥藥理，由柴苓湯治療NS水腫、蛋白尿的效方和補(bǔ)陽(yáng)還五湯抗凝、降脂的效方加減化裁而成，旨在從多方位、多靶點(diǎn)治療NS。本實(shí)驗(yàn)中，我們用柴苓歸芪湯進(jìn)展干預(yù)性治療，結(jié)果說明:柴苓歸芪湯可以有效的增強(qiáng)AN大鼠血清及腎組織SD活性，降低血清及腎組織DA含量，從而進(jìn)步機(jī)體抗氧化才能，減輕脂質(zhì)過氧化損傷。自由基及其所引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反響，在腎臟疾病中發(fā)揮著重要作用。在正常情況下，機(jī)體內(nèi)有低分子去除劑如維生素E和復(fù)合酶系統(tǒng)如SD，其抗氧化才能與不斷產(chǎn)生的氧自由基的氧化才能之

13、間保持著動(dòng)態(tài)平衡，不會(huì)引起組織損傷8。假設(shè)自由基產(chǎn)生異常增多或腎臟的抗氧化才能下降，出現(xiàn)脂質(zhì)過氧化反響，將導(dǎo)致腎組織細(xì)胞損傷，出現(xiàn)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，上皮細(xì)胞足突交融，腎小球基底膜降解一系列病變9，從而加重蛋白尿。腎病綜合征時(shí)，過量脂質(zhì)沉積于腎臟系膜區(qū)，內(nèi)皮細(xì)胞、腎小球系膜細(xì)胞均能通過活性氧分子修飾低密度脂蛋白，使氧化的低密度脂蛋白X-LDL更具腎毒性。這種過氧化的脂質(zhì)及其過氧化產(chǎn)物如DA能從多方面加重腎小球硬化和間質(zhì)纖維化的進(jìn)程。同時(shí)X-LDL能使引起腎損傷的氧自由基增加，形成腎損傷的惡性循環(huán)。自由基和不飽和脂肪酸作用而引發(fā)脂質(zhì)過氧化反響，由于脂質(zhì)過氧化物的形成使膜受體、膜蛋白酶和離子通道的

14、脂質(zhì)微環(huán)境改變，從而也使其功能改變10。DA是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物之一，其生成與脂質(zhì)過氧化平行，DA的含量可代表脂質(zhì)過氧化程度，并能從多方面加重腎小球硬化的進(jìn)程。SD是高效去除劑，可專一去除超氧陰離子，減少DA的形成，維持機(jī)體正常生理功能，SD濃度及活性降低必將引起自由基所致的細(xì)胞損傷。本實(shí)驗(yàn)中，我們不僅對(duì)血清SD活性、DA的含量進(jìn)展了測(cè)定，而且對(duì)腎組織部分SD的活性、DA的含量進(jìn)展了定量分析。結(jié)果說明:AN大鼠血清及腎組織中SD活性均較正常組明顯降低，而DA含量卻較正常組升高，提示AN大鼠去除氧自由基才能降低，脂質(zhì)過氧化可能參與腎臟疾病進(jìn)展，與國(guó)外學(xué)者研究結(jié)果一致11。柴苓歸芪組血清和腎組織SD活性明顯升高，而DA含量明顯降低，