紫杉醇耐藥的卵巢癌細(xì)胞中PKC

1、紫杉醇耐藥的卵巢癌細(xì)胞中PKC【關(guān)鍵詞】卵巢癌,紫杉醇耐藥,PExpressinsfPKandPgpinTaxlresistantvariananerelllineA2780/Taxl【Abstrat】AI:TdetettheexpressinsfPglyprtEinPgpandprteinkinase(PK)isfrinTaxlresistantvariananerelllineA2780/Taxl.ETHDS:IunhistheialSPethdanddublelabelediunflureseneereusedtdeterinetheexpressinsfPgpandPKinA2780/

2、TaxlandA2780.esternBltaseplyedfrassessPgpexpressinafterA2780/Taxlasulturedithphrblyristateaetate(PA)rstaursprine(SP).RESULTS:ThereasaexpressinfPgpandPKinA2780/Taxl,butPgpasntexpressedinA2780.AndtheexpressinlevelfPgpinA2780/TaxlasntaffetedbythepresenefPAandSP.NLUSIN:PgpandPKplayiprtantrlesintheresist

3、anefvariananerellA2780ttaxl.【Keyrds】varianneplass;Taxlresistane,Pglyprtein;prteinkinase【摘要】目的：探究PK與Pgp在紫杉醇誘導(dǎo)的卵巢癌耐藥細(xì)胞系A(chǔ)2780/Taxl中的表達(dá).要領(lǐng)：免疫細(xì)胞化學(xué)SP法及免疫熒光雙標(biāo)檢測PK與Pgp在耐藥細(xì)胞A2780/Taxl及其親本細(xì)胞中的表達(dá)；esternBlt檢測并半定量闡發(fā)PK沖動劑佛波脂(PA)和按捺劑十字孢堿(SP)作用后Pgp在兩種細(xì)胞上的表達(dá)程度.效果：免疫細(xì)胞化學(xué)效果表白在A2780/Taxl中，Pgp與PK表達(dá)均呈陽性，而在親本細(xì)胞中，Pgp不表達(dá)，PK

4、呈陽性表達(dá).在A2780/Taxl中PK與Pgp有共表達(dá).SP及PA作用后，A2780/Taxl細(xì)胞Pgp表達(dá)無顯著差異.結(jié)論：卵巢癌對紫杉醇耐藥的產(chǎn)生與PK和Pgp有關(guān).【關(guān)鍵詞】卵巢癌，紫杉醇耐藥，P糖卵白，卵白激酶0弁言紫杉醇在卵巢癌化療中占據(jù)緊張職位，而耐藥是影響療效的緊張因素.多藥耐藥基因(dr1)編碼的P糖卵白(Pglyprtein,Pgp)的過表達(dá)是紫杉醇耐藥機(jī)制之一，而Pgp是由卵白激酶(prteinkinase,PK)磷酸化而發(fā)揮成效的，在PK浩繁同功酶中又以同功酶(PK)與多藥耐藥(ultidrugresistene,DR)干系最為嚴(yán)密.因此我們造就紫杉醇誘導(dǎo)的卵巢癌耐藥細(xì)

5、胞，研究其Pgp及PK的表達(dá)，為逆轉(zhuǎn)耐藥提供根據(jù).1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1質(zhì)料卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780及其紫杉醇耐藥孕系(A2780/Taxl)由王澤華傳授惠贈，造就于含有100L/L小牛血清的DE完全造就基，置于37，50L/L2，相對濕度90%的造就箱中造就；試劑DE購于Gib公司，鼠抗人DR1Ab及兔抗人PKpAb購于Bster公司，SP免疫組化試劑盒，羅丹明標(biāo)識表記標(biāo)幟的羊抗兔IgG及FIT標(biāo)識表記標(biāo)幟的羊抗鼠IgG購于北京中山金橋生物技能公司，十字孢堿(SP)和佛波脂(PA)購于Siga公司.1.2要領(lǐng)2效果2.1Pgp在A2780/Taxl細(xì)胞中的表達(dá)免疫細(xì)胞化學(xué)SP染色效果表白Pgp在A

6、2780/Taxl細(xì)胞中表達(dá)為陽性圖1，在A2780細(xì)胞中不表達(dá)；PK在兩種細(xì)胞中均表達(dá)，在A2780/Taxl細(xì)胞中表達(dá)呈強(qiáng)陽性(圖2)；免疫熒光雙標(biāo)效果示Pgp與PK在A2780/Taxl細(xì)胞中有共表達(dá)征象，在A2780細(xì)胞中僅有赤色熒光，即僅有PK的表達(dá)圖3.圖1圖3略2.2SP和PA作用后Pgp在A2780/Taxl細(xì)胞中的表達(dá)A2780/Taxl組在r為170103位置有顯著條帶.esternBlt半定量效果表現(xiàn)：A2780/Taxl組，A2780/Taxl+PA,A2780/Taxl+SP組Pgp與atin的灰度掃描值別離是28.93%，29.34%,28.57%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義

7、(P0.05)，說明3,4組，與2組比擬Pgp表達(dá)量并無顯著增長或淘汰圖4.圖4略3討論紫杉醇耐藥的機(jī)制許多，如今比力確定的有Pgp表達(dá)的升高，微管亞基的改變，微管亞基的改變及凋亡途徑改變.DR1基因編碼的Pgp是一種跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)卵白，具有ATP酶活性，能將化療藥物從細(xì)胞內(nèi)泵出，低落細(xì)胞內(nèi)的有用藥物濃度而致多藥耐藥2.PK是一種普及存在的磷脂依靠性酶，與細(xì)胞增殖，分化，凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)痛癢相干,也到場了多DR形成歷程的調(diào)控3.Gttesan等4在早期的研究中證明Pgp是由PK磷酸化的，磷酸化后的Pgp活化而具有跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)成效，而且這種磷酸化歷程可以或許被verapail按捺，而被PK激活劑加強(qiáng)5，PA

8、就與PK具有高親和力,可以激活PK.而現(xiàn)已證明PK存在至少11種差異亞型，它們都是由差異基因編碼的成效相似的同功酶，普及漫衍在各器官構(gòu)造和細(xì)胞，它們在布局，生化性子，構(gòu)造漫衍，亞細(xì)胞定位和底物特異性方面都有差異6.韓英等7檢測了PK,在胃癌及其長春新堿耐藥株中的表達(dá)，效果表白胃癌細(xì)胞SG7901/VR的耐藥機(jī)制大概與PK有關(guān),而與PK無顯著相干性，相干實(shí)行還表白PK大概通過調(diào)治Pgp的成效與表達(dá)而到場胃癌細(xì)胞多藥耐藥的形成.這說明在PK的浩繁亞型中，尤以亞型與Pgp磷酸化干系最為嚴(yán)密8.本實(shí)行我們接納esternBlt檢測Pgp的表達(dá)，效果表現(xiàn)A2780細(xì)胞表達(dá)呈陰性，而A2780/Taxl細(xì)

9、胞中Pgp的表達(dá)呈陽性，表白卵巢癌細(xì)胞對紫杉醇的耐藥性產(chǎn)生與Pgp過表達(dá)有關(guān).該實(shí)行還通過免疫組化檢測到在A2780/Taxl細(xì)胞中PK表達(dá)強(qiáng)于其在A2780細(xì)胞中的表達(dá)，這個效果說明Pgp通過PK活化而發(fā)揮成效，與上述理論符合，因此在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)行中可以很清楚地看到Pgp與PK的共表達(dá).本試驗(yàn)我們還利用PK沖動劑PA和按捺劑SP別離作用于A2780/Taxl細(xì)胞，通過esternBlt檢測和半定量闡發(fā)并未創(chuàng)造個組間Pgp表達(dá)有差異，這說明PK活性的加強(qiáng)或削弱在短時間作用后并不克不及使Pgp表達(dá)量增長.然而，差異亞型同功酶在卵巢癌對紫杉醇耐藥中起什么樣的作用，對Pgp的表達(dá)和成效有什么影響，

10、以及SP和PA長時間作用后可否影響Pgp的表達(dá)量，另有待進(jìn)一步實(shí)行.這些研究將對卵巢癌患者的化療具有緊張意義.【參考文獻(xiàn)】1SabiukJ,FritshEF,aniatisT分子克隆金冬雁，黎盂楓.譯2版北京：科學(xué)出書社1996:889-890.2AualiN,EddabraL,aadrJ,etal.IunsuppressrsandreversinfultidrugresistaneJ.ritRevnalHeaat,2022,56(1):61-70.3KitazakiT,ka,NakauraY,etal.Gefitinib,anEGFRtyrsinekinaseinhibitr,diretly

11、inhibitsthefuntinfPglyprtEininultidrugresistantanerellsJ.Lunganer,2022,49(3):337-343.4Gttesan,LingV.Theleularbasisfultidrugresistaneinaner:TheearlyyearsfPglyprteinresearhJ.FEBSLett,2022,580(4):998-1009.5inkT,BatrakvaEV,Lis,etal.PlurniblkplyersalterappttisignaltransdutinfdxrubiinindrugresistantanerellsJ.JntrlRelease,2022,105(3):269-278.6VaraV,AshkrajY,DeyS,etal.Pglyprteininhibitrsandtheirsreening:AperspetivefrbiavailabilityenhaneentJ.PharalRes,2022,48(4):347359.7韓英,時永全,鄭悅,等.胃