微生物的培養(yǎng)與利用

1、 微生物的培養(yǎng)與利用一、與微生物有關(guān)的習(xí)題回顧1蘇州期末卷第30題：下圖甲表示某細(xì)菌的質(zhì)粒中相關(guān)限制酶的切割位點(diǎn)，圖乙表示目的基因所在的DNA中相關(guān)限制酶的切割位點(diǎn)。請分析并回答下列問題：質(zhì)粒SmH誠m伽|質(zhì)粒SmH誠m伽|F京I丨！I$目的基閔塔動(dòng)子P9環(huán)薰t抗性基因刼竝甲SmaI/氯霉董P抗性基因用Smal限制酶處理圖甲所示的質(zhì)粒會(huì)得到個(gè)DNA片段，用AluI處理圖乙所示的外源DNA會(huì)增加個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。為了避免目的基因和質(zhì)粒在酶切后產(chǎn)生的片段發(fā)生自身環(huán)化或任意連接，以及便于篩選需要，在實(shí)際操作中，一般應(yīng)選用（填限制酶名稱）同時(shí)酶切質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA。再用DNA連接酶處理。如果

2、是用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，設(shè)計(jì)引物是關(guān)鍵，但在擴(kuò)增時(shí)退火溫度一般為55C60C，對于（A+T）%50%,般用55C；（A+T）%W50%時(shí)一般用60C，原因是。為了篩選獲得含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌，實(shí)驗(yàn)人員首先將經(jīng)轉(zhuǎn)化處理過的大腸桿菌接種在含（抗生素）的培養(yǎng)基中，然后用影印法將該培養(yǎng)基上的菌落按原來的方向印在含（抗生素）培養(yǎng)基上，以篩選獲得含重組質(zhì)粒的細(xì)菌。在含四環(huán)素培養(yǎng)基中能生長繁殖，而在含氯霉素培養(yǎng)基中不能生長繁殖的是導(dǎo)人了的大腸桿菌。含氯霉耒的培養(yǎng)基含四環(huán)耒的培養(yǎng)基圖例含氯霉耒的培養(yǎng)基含四環(huán)耒的培養(yǎng)基圖例不能正常生長繁殖O能正常生長繁殖經(jīng)檢測：在上述導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中，目的基

3、因正常轉(zhuǎn)錄形成了mRNA，但其所控制合成的蛋白質(zhì)卻并不具有生物活性，最可能的原因是。2期末卷第25題改編下圖表示運(yùn)用影印培養(yǎng)法（使在一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法），檢測重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入大腸桿菌。下列相關(guān)敘述中正確的是35256培養(yǎng)基A56232S培養(yǎng)皿丙培養(yǎng)基E質(zhì)粒35256培養(yǎng)基A56232S培養(yǎng)皿丙培養(yǎng)基E質(zhì)粒大腸桿菌培養(yǎng)皿甲培養(yǎng)皿乙培養(yǎng)基A與培養(yǎng)基B的基本成份相同培養(yǎng)基A與B都為固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基B中含有的特殊成分能抑制某種微生物生長該實(shí)驗(yàn)可能還要進(jìn)一步分離純化培養(yǎng)皿丙中的菌落4和6二、微生物的培養(yǎng)與利用實(shí)驗(yàn)工作單任務(wù)：太陽光有殺菌作用嗎？請利用所給材料定量地加

4、以探究。材料：一個(gè)有多個(gè)菌落的培養(yǎng)皿、接種工具“印章”、空培養(yǎng)皿、牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、天平、高壓蒸汽滅菌鍋、酒精燈等設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟：設(shè)計(jì)表格，并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果：根據(jù)實(shí)驗(yàn)，記錄相關(guān)問題操作中遇到的問題其它你的實(shí)驗(yàn)結(jié)論是：拓展應(yīng)用：防紫外線太陽傘、太陽鏡、防曬霜的防紫外線效果如何？能通過類似的方法進(jìn)行探究嗎？如果能請寫出設(shè)計(jì)思路。實(shí)驗(yàn)評價(jià)學(xué)生自評（你認(rèn)為實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期是否相符）：（滿分5分）;教師評價(jià)：項(xiàng)目步驟設(shè)計(jì)表格設(shè)計(jì)問題記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)論拓展應(yīng)用總分得分任務(wù)：分離出大腸桿菌。材料：含多種細(xì)菌（有大腸桿菌、枯草芽胞桿菌、醋酸桿菌等多種細(xì)菌）的試管、接種環(huán)、滅過菌的平板培養(yǎng)基、酒精燈等大腸桿菌的

5、菌落特征：邊緣光滑，濕潤，透明，粘稠的圓形。菌落如右圖設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟如下：將劃好線的培養(yǎng)皿置于37C條件下培養(yǎng)24小時(shí)從培養(yǎng)皿中的菌落中找到與描述及圖形一致的菌落沾取上述菌落中細(xì)菌再進(jìn)行平板劃線并培養(yǎng)觀察操作步驟中的注意點(diǎn)有哪些？操作中的注意點(diǎn)目的保證尢菌使“線”上的菌種越來越少結(jié)果分析如何判斷你是否得到純化的大腸桿菌？若未得到請分析原因。問題分析：用接種環(huán)劃線時(shí)經(jīng)常出現(xiàn)培養(yǎng)基表面被劃破的現(xiàn)象，分析可能的原因并提出解決方案。實(shí)驗(yàn)評價(jià)學(xué)生自評（你認(rèn)為實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期是否相符）：（滿分5分）;教師評價(jià)：項(xiàng)目步驟設(shè)計(jì)y注意點(diǎn)結(jié)果分析問題分析總分得分二、微生物的培養(yǎng)與利用實(shí)驗(yàn)工作單參考答案任務(wù)：太陽光有殺

6、菌作用嗎？請利用所給材料定量地加以探究。材料：一個(gè)有多個(gè)菌落的培養(yǎng)皿、接種工具“印章”、空培養(yǎng)皿、牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、天平、高壓蒸汽滅菌鍋、酒精燈等設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟：配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、滅菌、倒平板；影印有相同菌落的平板分兩組，每組3只，分別編號A1、A2、A3,B1、B2、B3;將A組平板置于陽光下B組處于同溫暗處；相同時(shí)間（如8小時(shí)），觀察記錄兩組平板上菌落數(shù)。設(shè)計(jì)表格，并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果：各培養(yǎng)皿中菌落數(shù)A組（陽光直射）B組（同溫暗處）1號皿2號皿3號皿平均值根據(jù)實(shí)驗(yàn)記錄相關(guān)問題操作中遇想）到的問題影印后兩個(gè)平板上細(xì)菌（菌落）數(shù)一樣多嗎？其它你的實(shí)驗(yàn)結(jié)論是：太陽光（不能）能殺菌拓展

7、：防紫外線太陽傘、太陽鏡、防曬霜的防紫外線效果如何？能通過類似的方法進(jìn)行探究嗎？如果能請寫出設(shè)計(jì)思路。太陽傘：影印兩組培養(yǎng)基并編號，陽光下，一組用太陽傘遮住，另一組不遮。相同時(shí)間后比較兩組平板上的菌落數(shù)。其它探究類似。實(shí)驗(yàn)評價(jià)學(xué)生自評（你認(rèn)為實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期是否相符）：（滿分3分）;教師評價(jià)：項(xiàng)目步驟設(shè)計(jì)、，、.一sVy注意點(diǎn)結(jié)果分析問題分析總分得分任務(wù)：分離出大腸桿菌。材料：含多種細(xì)菌（有大腸桿菌、枯草芽胞桿菌醋酸桿菌等多種細(xì)菌）的試管、接種環(huán)、滅過菌的平板培養(yǎng)基、酒精燈等大腸桿菌的菌落特征：邊緣光滑，濕潤，透明，粘稠的圓形。菌落如右圖設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟如下：平板劃線法分離試管中的細(xì)菌將劃好線的培養(yǎng)

8、皿置于37C條件下培養(yǎng)24小時(shí)從培養(yǎng)皿中的菌落中找到與描述及圖形一致的菌落沾取上述菌落中細(xì)菌再進(jìn)行平板劃線并培養(yǎng)觀察，直到得到純化的大腸桿菌操作步驟中的注意點(diǎn)有哪些？操作中的注意點(diǎn)目的接種環(huán)灼燒火菌、皿蓋打開一條縫隙而不是直接打保證無其它微生物開、操作在火焰上方進(jìn)行、培養(yǎng)基先火菌從每區(qū)域線的后端開始劃線、最后區(qū)域不與第使“線”上的菌種越來越少區(qū)域相連、每一次劃后都灼燒火菌環(huán)結(jié)果分析如何判斷你是否得到純化的大腸桿菌？若未得到請分析原因。與所給菌落圖及文字說明部分進(jìn)行對照，如果只有一種且完全一樣說明得到了純化的大腸桿菌；反之則沒有。問題分析：用接種環(huán)劃線時(shí)經(jīng)常出現(xiàn)培養(yǎng)基表面被劃破的現(xiàn)象，分析可能的

9、原因并提出解決方案?？赡茉颍簞澗€時(shí)用力過大、培養(yǎng)基配制時(shí)所加瓊脂太少。解決方案：劃線時(shí)控制力度、配制硬度合適的培養(yǎng)基（瓊脂加到配方中的上限或更多一點(diǎn)）選擇細(xì)合金絲的接種環(huán)等。實(shí)驗(yàn)評價(jià)學(xué)生自評（你認(rèn)為實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期是否相符）：（滿分3分）；教師評價(jià)：項(xiàng)目步驟設(shè)計(jì)、，、.一sVy注意點(diǎn)結(jié)果分析問題分析總分得分相關(guān)資料：附:牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方及配5omL用量成份名稱配制lOOOmL用量配制50mL用量牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5g瓊脂20gpH7.0-7.2影印法：用一小塊滅菌的絲絨固定在直徑較平板略小的圓柱形木塊上，構(gòu)成印章（即接種工具）；然后把長有菌落的母平板倒置在絲絨的印章上，輕輕印一下；再把此印章在另一含有選擇培養(yǎng)基的平板上輕輕印一下，經(jīng)