ABI7500熒光定量PCR儀標準操作規(guī)程

1、ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程目的為規(guī)范使用人正確和正常的使用ABI 7500析的標準化、規(guī)范化，特制定本規(guī)程。適用范圍適用于本公司 ABI7500 熒光定量 PCR 儀的操作。職責使用人員負責本規(guī)程的實施。設備使用人負責設備維護保養(yǎng)工作；設備責任人負責設備的定期維護保養(yǎng)工作。質量監(jiān)督員負責監(jiān)督本規(guī)程的實施。內容程序設置power綠色狀態(tài)。7500 software V2.3 OK，待軟件連接儀（USB 線接口Design Wizard選項，紅色箭頭指示位置有個下拉菜單，如下圖所示。下拉菜單中有一個 Advanced Setup（高級設置）選項，如箭頭所示：第 1 頁 共 1

2、0 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程點擊這個選項，可以進入下面這個界面，儀器型號和反應程序類型。（帶*號 的必需填）第 2 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程此圖是上面圖的延續(xù)（自己電腦顯示不完全，紅色箭頭從上到下指示的分別是Plate Setup 選項、探針類型和TaqMan 探針，速度類型選擇默認就可以了（7500fast 的話則有快速模式可以選擇Plate Setup 選項，點擊這個選項，就可以進入下一個設置界面。 紅色箭頭和指的是設定反應探針和反應樣品名稱，箭頭處可以填寫反應探針名稱（P1,HB,HCFATAMRA BHQ，在這個儀器中無

3、此選擇none。箭頭處可以填寫樣品名稱。點擊箭頭和箭頭處可以添加反應探和箭頭（另：探針跟樣品設定后可保存，方便以后實驗調用，具體是點擊箭頭下面第 3 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程的 Saved Taeget，下次調用則點擊 Add Saved 就可調出。）1 DAAN 1 HBV1成之后，我們點擊紅色箭頭所指的選項，進入下個界面。48 個反應孔空余。藍色箭頭和分別是放大這個孔板界面的按鈕，藍色箭頭顯示大小還原默認設置按鈕。A1 紅色箭頭U指示的框里第 4 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程是個指示的參比熒光，儀器默認是ROX，但

4、是產品一般沒有添加ROX None4567 升序或7654 降序的排列，單擊可彈出以下界面，具體如下。表示起始的濃度，表示 10的話則為升序，按照 4567 的濃度；1:10 的話則為降序，按照 7654 的濃度。4 1 個（即沒有做復孔10000，選擇10，選擇箭頭Apply10 4567 排列。此外也可以選擇鼠標雙擊類似反應孔板的那個界面，會出現(xiàn)下面這個界面：第 5 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程如上圖所示，選定反應孔雙擊后會出現(xiàn)這樣一個界面，紅色箭頭指示的 樣品反應類型，紅色箭頭反應探針，紅色箭頭Sample樣品名稱。指示的Run Method 選項進入

5、下個界面。上圖的箭頭和（1 2 第 6 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程會有出現(xiàn)藍色的錯誤提示）設定好循環(huán)條件就可以進行模板保存以便下次實驗時調用程序點擊位于軟件中間右方的（注這個鍵是由于本人電腦不是寬屏（14 寸acer。如果是AB配的電腦則可以在軟件上全部顯示，不會出現(xiàn)鍵或是那些滑動條，但是。字體會小點，選擇保存運行的模板，命名。下次實驗使用的時候就不用再在設條件，直接點擊open method，調出你所需要做的實驗的擴增條件。reaction setup（反應體系設置）materials list（耗材清單）去設置。點擊箭頭所指的 run 進入運行界面。S

6、TART START按鈕右方可出現(xiàn)實驗的預計剩余時間。箭頭件。實驗結束后按箭頭所指的分析，出現(xiàn)以下界面。第 7 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標準操作規(guī)程做完實驗后，曲線會出現(xiàn)在上圖，以對數(shù)圖譜的形式出現(xiàn)，若想換為線性圖譜，可點擊箭頭log linear，其次，再點擊箭頭的分析按鈕（有實驗數(shù)據(jù)的話會出現(xiàn)analysiCT 96 孔面板中出現(xiàn)，上面的顯示不完全，曲線的baseline threshold 設置是在上圖數(shù)字（不是箭頭所指的地方進行設置。箭頭表示的是實驗標準曲線的參數(shù)。 箭頭箭頭表示的是一些附加的報警信息，例如重復孔偏差了，熒光偏差了，質控失控了。箭頭表示的是上

7、面 4 中圖譜的集合，可自己選擇組合查看。實驗結束后填寫設備使用記錄結果分析analysis setup baselinethreshold數(shù)值，點擊綠色analyze軟件及完成自動分析。amplification plot 界面查看所有樣品的擴增曲線。整體曲線的觀察,將所有曲線選中進行整體觀察。觀察是否存在污染情況（包括標本污染和試劑污染，特別應注意大量曲線在同一 Ct值出現(xiàn)上漲的情況。觀察是否有光路傳導阻滯或電壓波動等機器原因形成的異常曲線。對照、質控品、標準品的分析陰性對照：試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知陰性標本。第 8 頁 共 10 頁ABI7500 ABI7500 熒光定量

8、PCR 儀標準操作規(guī)程作用：用以監(jiān)測實驗室和前處理過程中是否存在污染。作用：用以監(jiān)測實驗能否正常檢出陽性標本，避免假陰性的出現(xiàn)。知或未知濃度的陽性室內質控血清。作用：用以監(jiān)控日常實驗的精密度。性標準品稀釋可能存在問題，提示實驗中存在較大人為誤差。Ct 值是否在平日的正常位置：Ct （試劑過期或保存條件不合格。出現(xiàn)低拷貝標準品做不出，而高拷貝曲線 Ct 值均正常，則提示可能存在低拷貝陽性標準品的降解情況。若高拷貝標準品出現(xiàn) Ct 值后移，且能排除上述情況，則判斷是否為試劑靈敏度下降。得出定量結果：調節(jié)基線和閾值以得到一較好的標準曲線。電腦據(jù)此曲線給出實驗結果值。儀器維護注意開機關機順序，機器開機后即可使用，無需預熱。U盤等移動存儲設備，建議使用光盤刻錄來轉移數(shù)據(jù)。（比如光盤）儀器表面與電腦表面應每月用軟布擦拭（漆層。燈泡更換：在燈泡使用達到壽命后（2000 小時，或者意外損壞后需要更換。機器關閉30 意燈泡高溫。然后將新燈泡，用氣吹吹掉表面的灰塵，安裝燈泡。樣品孔清潔：樣品孔污染后會影響PCR 擴增的信號，是的該孔信號高于其他孔，造成假background72000 的孔，使用棉簽與去離子水進行清潔。清潔時關閉機器電源，打開前面上半面板，將熱蓋板（黑色面板）background72000。6 ROI校正。儀器在搬運后需要進行背景校正、純熒光校正和ROI驗。第 9 頁 共 10