ABI7500熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程目的為規(guī)范使用人正確和正常的使用ABI 7500析的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化，特制定本規(guī)程。適用范圍適用于本公司 ABI7500 熒光定量 PCR 儀的操作。職責(zé)使用人員負(fù)責(zé)本規(guī)程的實施。設(shè)備使用人負(fù)責(zé)設(shè)備維護保養(yǎng)工作；設(shè)備責(zé)任人負(fù)責(zé)設(shè)備的定期維護保養(yǎng)工作。質(zhì)量監(jiān)督員負(fù)責(zé)監(jiān)督本規(guī)程的實施。內(nèi)容程序設(shè)置power綠色狀態(tài)。7500 software V2.3 OK，待軟件連接儀（USB 線接口Design Wizard選項，紅色箭頭指示位置有個下拉菜單，如下圖所示。下拉菜單中有一個 Advanced Setup（高級設(shè)置）選項，如箭頭所示：第 1 頁 共 1

2、0 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程點擊這個選項，可以進入下面這個界面，儀器型號和反應(yīng)程序類型。（帶*號 的必需填）第 2 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程此圖是上面圖的延續(xù)（自己電腦顯示不完全，紅色箭頭從上到下指示的分別是Plate Setup 選項、探針類型和TaqMan 探針，速度類型選擇默認(rèn)就可以了（7500fast 的話則有快速模式可以選擇Plate Setup 選項，點擊這個選項，就可以進入下一個設(shè)置界面。 紅色箭頭和指的是設(shè)定反應(yīng)探針和反應(yīng)樣品名稱，箭頭處可以填寫反應(yīng)探針名稱（P1,HB,HCFATAMRA BHQ，在這個儀器中無

3、此選擇none。箭頭處可以填寫樣品名稱。點擊箭頭和箭頭處可以添加反應(yīng)探和箭頭（另：探針跟樣品設(shè)定后可保存，方便以后實驗調(diào)用，具體是點擊箭頭下面第 3 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的 Saved Taeget，下次調(diào)用則點擊 Add Saved 就可調(diào)出。）1 DAAN 1 HBV1成之后，我們點擊紅色箭頭所指的選項，進入下個界面。48 個反應(yīng)孔空余。藍(lán)色箭頭和分別是放大這個孔板界面的按鈕，藍(lán)色箭頭顯示大小還原默認(rèn)設(shè)置按鈕。A1 紅色箭頭U指示的框里第 4 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程是個指示的參比熒光，儀器默認(rèn)是ROX，但

4、是產(chǎn)品一般沒有添加ROX None4567 升序或7654 降序的排列，單擊可彈出以下界面，具體如下。表示起始的濃度，表示 10的話則為升序，按照 4567 的濃度；1:10 的話則為降序，按照 7654 的濃度。4 1 個（即沒有做復(fù)孔10000，選擇10，選擇箭頭Apply10 4567 排列。此外也可以選擇鼠標(biāo)雙擊類似反應(yīng)孔板的那個界面，會出現(xiàn)下面這個界面：第 5 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程如上圖所示，選定反應(yīng)孔雙擊后會出現(xiàn)這樣一個界面，紅色箭頭指示的 樣品反應(yīng)類型，紅色箭頭反應(yīng)探針，紅色箭頭Sample樣品名稱。指示的Run Method 選項進入

5、下個界面。上圖的箭頭和（1 2 第 6 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程會有出現(xiàn)藍(lán)色的錯誤提示）設(shè)定好循環(huán)條件就可以進行模板保存以便下次實驗時調(diào)用程序點擊位于軟件中間右方的（注這個鍵是由于本人電腦不是寬屏（14 寸acer。如果是AB配的電腦則可以在軟件上全部顯示，不會出現(xiàn)鍵或是那些滑動條，但是。字體會小點，選擇保存運行的模板，命名。下次實驗使用的時候就不用再在設(shè)條件，直接點擊open method，調(diào)出你所需要做的實驗的擴增條件。reaction setup（反應(yīng)體系設(shè)置）materials list（耗材清單）去設(shè)置。點擊箭頭所指的 run 進入運行界面。S

6、TART START按鈕右方可出現(xiàn)實驗的預(yù)計剩余時間。箭頭件。實驗結(jié)束后按箭頭所指的分析，出現(xiàn)以下界面。第 7 頁 共 10 頁ABI7500 熒光定量 PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程做完實驗后，曲線會出現(xiàn)在上圖，以對數(shù)圖譜的形式出現(xiàn)，若想換為線性圖譜，可點擊箭頭log linear，其次，再點擊箭頭的分析按鈕（有實驗數(shù)據(jù)的話會出現(xiàn)analysiCT 96 孔面板中出現(xiàn)，上面的顯示不完全，曲線的baseline threshold 設(shè)置是在上圖數(shù)字（不是箭頭所指的地方進行設(shè)置。箭頭表示的是實驗標(biāo)準(zhǔn)曲線的參數(shù)。 箭頭箭頭表示的是一些附加的報警信息，例如重復(fù)孔偏差了，熒光偏差了，質(zhì)控失控了。箭頭表示的是上

7、面 4 中圖譜的集合，可自己選擇組合查看。實驗結(jié)束后填寫設(shè)備使用記錄結(jié)果分析analysis setup baselinethreshold數(shù)值，點擊綠色analyze軟件及完成自動分析。amplification plot 界面查看所有樣品的擴增曲線。整體曲線的觀察,將所有曲線選中進行整體觀察。觀察是否存在污染情況（包括標(biāo)本污染和試劑污染，特別應(yīng)注意大量曲線在同一 Ct值出現(xiàn)上漲的情況。觀察是否有光路傳導(dǎo)阻滯或電壓波動等機器原因形成的異常曲線。對照、質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品的分析陰性對照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進行同樣處理的已知陰性標(biāo)本。第 8 頁 共 10 頁ABI7500 ABI7500 熒光定量

8、PCR 儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程作用：用以監(jiān)測實驗室和前處理過程中是否存在污染。作用：用以監(jiān)測實驗?zāi)芊裾z出陽性標(biāo)本，避免假陰性的出現(xiàn)。知或未知濃度的陽性室內(nèi)質(zhì)控血清。作用：用以監(jiān)控日常實驗的精密度。性標(biāo)準(zhǔn)品稀釋可能存在問題，提示實驗中存在較大人為誤差。Ct 值是否在平日的正常位置：Ct （試劑過期或保存條件不合格。出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而高拷貝曲線 Ct 值均正常，則提示可能存在低拷貝陽性標(biāo)準(zhǔn)品的降解情況。若高拷貝標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn) Ct 值后移，且能排除上述情況，則判斷是否為試劑靈敏度下降。得出定量結(jié)果：調(diào)節(jié)基線和閾值以得到一較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。電腦據(jù)此曲線給出實驗結(jié)果值。儀器維護注意開機關(guān)機順序，機器開機后即可使用，無需預(yù)熱。U盤等移動存儲設(shè)備，建議使用光盤刻錄來轉(zhuǎn)移數(shù)據(jù)。（比如光盤）儀器表面與電腦表面應(yīng)每月用軟布擦拭（漆層。燈泡更換：在燈泡使用達到壽命后（2000 小時，或者意外損壞后需要更換。機器關(guān)閉30 意燈泡高溫。然后將新燈泡，用氣吹吹掉表面的灰塵，安裝燈泡。樣品孔清潔：樣品孔污染后會影響PCR 擴增的信號，是的該孔信號高于其他孔，造成假background72000 的孔，使用棉簽與去離子水進行清潔。清潔時關(guān)閉機器電源，打開前面上半面板，將熱蓋板（黑色面板）background72000。6 ROI校正。儀器在搬運后需要進行背景校正、純熒光校正和ROI驗。第 9 頁 共 10