鏈霉素發(fā)酵工藝驗(yàn)證方案

1、鏈霉素發(fā)酵工藝驗(yàn)證方案目的：確認(rèn)鏈霉素發(fā)酵系統(tǒng)工藝流程，確認(rèn)種子工藝、小小罐工藝、小罐工藝、中罐工藝、大罐發(fā)酵工藝，驗(yàn)證該發(fā)酵系統(tǒng)工藝的穩(wěn)定性和牢靠性及制備 的發(fā)酵液能否到達(dá)中間體規(guī)格要求。范圍：50驗(yàn)證地點(diǎn)：403驗(yàn)證對(duì)象：原斜面代 、代 斜面12母瓶子瓶小小罐小罐中罐大罐驗(yàn)證步驟：確定驗(yàn)證方案，確定驗(yàn)證打算，內(nèi)容、步驟，以便準(zhǔn)確驗(yàn)證鏈霉素發(fā)酵系統(tǒng)。驗(yàn)證措施概要：生產(chǎn)記錄：原斜面：冷藏期10外觀無(wú)菌外觀集落:白色飽滿(mǎn)、正常代 或代1142外觀無(wú)菌外觀集落：白色飽滿(mǎn)、正常母瓶：無(wú)菌斜面及外觀無(wú)菌菌絲粘稠、色澤米黃、無(wú)顆粒狀菌絲681700u/ml963500u/ml 6700u/ml冷藏期5菌

2、絲IIIII子瓶：無(wú)菌斜面及外觀無(wú)菌菌絲粘稠、色澤米黃、無(wú)顆粒狀菌絲120小時(shí)7000u/ml144 小時(shí)7500u/ml冷藏期7 天 菌絲IIIII小小罐：菌絲IIIII鏡檢無(wú)菌PH7.5小罐：菌絲IIIII鏡檢無(wú)菌1200u/m3.5g/100m PH7.5中罐：菌絲IIIII鏡檢無(wú)菌1800u/m3.5g/100m PH7.5大罐：放罐殘?zhí)?.0 克/100毫升放罐殘氮120毫克/100毫升放罐透光度40%放罐效價(jià)14000u/ml原材料：生產(chǎn)過(guò)程中所用的各種原材料及其規(guī)格見(jiàn)原材料一覽表設(shè)備：生產(chǎn)鏈霉素所及設(shè)備見(jiàn)設(shè)備一覽表。以上所及設(shè)備的每一局部，必需在本次驗(yàn)證前確保經(jīng)過(guò)適當(dāng)鑒定IQ/O

3、，并且任何相關(guān)的測(cè)試裝置經(jīng)過(guò)校正。人員培訓(xùn)，作為驗(yàn)證爭(zhēng)辯的一局部，涉及生產(chǎn)鏈霉素發(fā)酵的每位職工均經(jīng)GMP及有關(guān)崗位SOP培訓(xùn)。生產(chǎn)程序和流程表：生產(chǎn)過(guò)程的描述：我廠用于生物合成鏈霉素的生產(chǎn)菌種為灰色鏈霉菌，為了保持菌種的24冰庫(kù)內(nèi)，或者將孢子制成牛奶懸濁液，密閉冷藏于196液氮中。每年對(duì)生產(chǎn)菌株進(jìn)展兩次自然分別，把握菌落變異率5%，并進(jìn)展菌絲八代遺傳穩(wěn)定性考察，考察其母、子代謝及效價(jià)單位的穩(wěn)定性。挖取清潔海灘細(xì)沙不能污染各種有機(jī)物100 吸盡砂內(nèi)鐵屑備用，挖取郊區(qū)地面二尺深處的黃土不能污染各種有機(jī)物120 目篩子過(guò)篩,用磁鐵充分吸盡土內(nèi)鐵屑備用。以上處理的砂和土，按土一份，砂二份比例混合，分裝

4、于玻璃試管12100m，每支裝1g，用紗布棉塞塞緊置于小銅線(xiàn)筐中，放消毒鍋消毒，間歇滅菌三次，每次壓力0.12MP122111 120、45 小時(shí)，外說(shuō)明批號(hào)、日期備用，使用前為確保無(wú)菌起見(jiàn)，應(yīng)按以上要求再消毒烘干一次。取符合質(zhì)量要求的孢子斜面一支，在無(wú)菌操作下,參加 0.85%氯化1ml 1#棒將外表孢子輕輕刮下防止用力過(guò)重劃破瓊脂1ml 割頭無(wú)菌吸管吸出，準(zhǔn)確認(rèn)真地在每支無(wú)菌空白砂土管內(nèi)加 0.1ml 孢子液參加時(shí)應(yīng)留意將吸管伸至接近沙土處，但又不能接觸沙土，也不能使吸管口接觸沙土管口及內(nèi)壁。塞緊棉塞，將沙土敲松攤開(kāi)，放在真空枯燥器內(nèi)枯燥器內(nèi)放置氯化鈣枯燥劑0.10MPa4 4 5 支或以

5、上時(shí)，抽干時(shí)間酌情增加，取出抽干的沙土孢子，敲松放在盛有無(wú)水24冰庫(kù)中保存?zhèn)溆?。使用時(shí)承受2 年。市售穎牛奶離心三次，3000rpm,15分鐘棄去上層脂肪,將脫脂牛 分鐘消毒。121，60 分鐘，間隙滅菌三次，待用。2#棒輕輕將孢子刮下，用無(wú)菌吸管吸孢子牛奶懸濁液置滅菌珠子瓶，10 分鐘,1ml 無(wú)菌吸管將珠子瓶?jī)?nèi)的孢子牛奶懸濁液參加無(wú)菌安培管中，0.3ml/5年。100 級(jí)，每三個(gè)月對(duì)塵埃粒子0.5u 的塵埃3.5 /1L空氣、風(fēng)速0.35m/、無(wú)菌定點(diǎn)開(kāi)啟雙碟分鐘1 個(gè)/碟進(jìn)展測(cè)定。尋常每次操作定點(diǎn)放置定點(diǎn)開(kāi)啟雙碟30 分鐘，把握雜菌菌落1 個(gè)/碟。每天用前紫外光消毒一小時(shí)，每三個(gè)月調(diào)換消

6、毒劑1/600潔爾滅、75%酒精。孢子斜面：取生產(chǎn)用之孢子沙土管或孢子冷凍管在無(wú)菌室內(nèi)，用操作棒勺取適量27167 天，該生長(zhǎng)成之孢子斜面稱(chēng)為原斜面，僅作孢子傳代使用，不能制備母瓶，液氮冷凍孢子接出原斜面。依據(jù)質(zhì)量2410 天。斜面外觀除了個(gè)別不正常集落以外，應(yīng)大部份為白色，飽滿(mǎn)梅花型， 饅頭型、圓型之集落，將原斜面孢子，選擇23 只正常集落點(diǎn)種第一代，用第一代傳代斜面同樣點(diǎn)種其次代傳代斜面，第一其次代孢子斜27l67 天，第一、其次代斜面14 天，均可制作母瓶，孢子斜面?zhèn)鞯狡浯未鸀橹?，不再傳第三代，挖塊制作過(guò)母瓶之剩余孢子斜面，應(yīng)保存在冷藏庫(kù)中一個(gè)月，以備檢用。斜面培育基配制法：名稱(chēng)配比 %

7、葡萄糖注射用0.81.2蛋白胨0.30.6氯化鈉0.40.6豌豆浸出液1216瓊脂海燕牌2.02.8pH7.07.4C (g/100ml)C (g/100ml)N (mg/100ml)P (ug/ml)pH0.9-1.232-3860-906.8-7.5豌豆浸出液制備：豌 豆： 30 克氯 仿： 0.5%二次1000ml1M H SO ：調(diào)pH用2430 克豌豆洗凈瀝干，參加1000ml1M H SO pH至244.50.5蓋緊放置于 371MH2SO4 調(diào)整PH 值維持在 4.24.50.5%371 6 天，粗濾20 去除氯仿750ml 搖瓶中，每瓶裝量約200ml0.09Mpa、11812

8、020分鐘，冷卻后放入冰箱中備用。同時(shí)抽樣送化驗(yàn)，檢驗(yàn)質(zhì)量，在使用該批豌豆浸出液時(shí)，必需再送一次樣品，測(cè)定氨氮含量與第一次相接近時(shí)可按后一次樣含量計(jì)算使用，如其次次含量與第一次不符，須再抽樣復(fù)試，以最終一次化驗(yàn)數(shù)據(jù)為準(zhǔn)進(jìn)展計(jì)算使用。豌豆浸出液質(zhì)量：工程工程外觀氨氮NH -N24無(wú)菌狀況磷(PO )規(guī)格澄清液170200mg/100ml600ug/100ml左右無(wú)雜菌4.1.4母瓶：用符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的同支孢子斜面冷藏期不超過(guò)14 天在無(wú)菌室內(nèi)用挖塊法分別將孢子接種到已預(yù)備好之二只搖瓶中，編號(hào)為母I 母 II， 接種后送至溫度 27l23020r mm搖瓶機(jī)上，5064II 一IIII 用牛皮紙包扎

9、存放于24II 連續(xù)培育作質(zhì)量檢查，做無(wú)菌試驗(yàn)二支，分別進(jìn)展2737培育。68 PH、uml24 小時(shí)取一次樣測(cè)定上述工程，共計(jì)三次68 小時(shí)， 96 小時(shí)，120小時(shí)三次如母瓶質(zhì)量符合要求，則母瓶可以進(jìn)罐使用，5 天。制得的母瓶應(yīng)菌絲稠粘，目檢無(wú)菌絲團(tuán)顆粒、米黃色、無(wú)異味不化稀無(wú)菌正常。效價(jià)：120 小時(shí)6700uml。接子瓶的母瓶制備法，用無(wú)菌操作挖一塊斜面，接入一只母瓶，在搖瓶5064 顆粒狀菌絲的母瓶，作為接子瓶用，接種子瓶的母瓶不冷藏。遇特別5天。母瓶原材料及配比方下：原材料葡萄糖配比%3.55.5黃豆餅粉碳酸鈣硫酸銨3.04.50.50.80.50.8氯化鈉磷酸二氫鉀0.250.5

10、0.040.07消后質(zhì)量規(guī)格：CC(g/ml)N(mg/100ml)P(ug/100ml)3.84.8130155130155子瓶：取符合種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之母瓶，在無(wú)菌操作條件下，用吸管接入已預(yù)備吸管做無(wú)菌試驗(yàn)斜面一支，在37恒溫室培育，接種后子瓶送 27l3044 IIIII 初，長(zhǎng)好后，留120 144 小時(shí)分別取樣測(cè)定效價(jià)，一瓶測(cè)粘度及氨氮，一瓶接無(wú)菌斜面二支作無(wú)菌試驗(yàn)分別培育于273恒溫室及觀看菌絲形態(tài)菌株要加測(cè)C及P247 天，如在保存期間覺(jué)察有化稀現(xiàn)象或有染菌嫌疑，即停頓使用，改用其他批號(hào)種子，放搖23 批瓶存?zhèn)溆?。制得的子瓶?yīng)菌絲稠粘，目檢無(wú)菌絲團(tuán)顆粒，米黃色，無(wú)異味。不化 子瓶原材

11、料及配比方下：原材料配比%葡萄糖3.55.5黃豆餅粉2.33.5碳酸鈣0.20.7硫酸銨0.50.7氯化鈉00.2磷酸二氫鉀0.0450.07豆油1L玉米漿00.2消后質(zhì)量規(guī)格：N(mg/100ml)160180P(ug/100ml)155180C(g/ml)C(g/ml)6.04.8在某罐種子移植到下一級(jí)罐后，進(jìn)展罐內(nèi)的沖洗及閥墊的更換檢查嚴(yán)密度，檢查局部包括空氣分布管，攪拌軸封，與罐相連之法蘭焊接及15 分鐘并檢查過(guò)濾器有無(wú)培育基倒流。培育基實(shí)行實(shí)消：0.160.19MPa 進(jìn)展投料實(shí)消。先加水至攪拌處，然后投入已配好的培育基，攪拌成勻漿0.070.12MPa 時(shí)20 115124，完畢后

12、保壓冷卻待接種，取消后樣測(cè)定C、N、P、PH。28 0.1m3小時(shí)流0.5m323 只小罐作種子用。接4 8 PH C 和效價(jià)，25 8 NII III 初階2 小時(shí)須將種液涂片鏡檢什菌狀況，培育條件：271，35030rmin，4668h，0.5m3/分，假設(shè)種子罐生長(zhǎng)過(guò)程中pH 量，調(diào)整配方等工藝調(diào)整措施，以期使各級(jí)種子罐質(zhì)量符合種子質(zhì)量要求。小小罐原材料及配比方下：原材料名稱(chēng)葡萄糖 黃豆餅粉硫酸銨 碳酸鈣小小罐120L配比3.55.52.53.50.50.70.20.7小小罐(500L)配比磷酸二氫鉀玉米漿0.0450.070.10.2(機(jī)動(dòng))豆油1L/罐批氯化鈉配料體積100L0.10

13、.2250L消后體積100L250L消后規(guī)格如下小小罐小小罐pH6.08.0C2.84.4N115170P120200小小罐把握規(guī)格：消后CNP 必需符合質(zhì)量要求，假設(shè)不符合則重投料、消毒。中間把握溫度必需在271，超過(guò)30時(shí)間較長(zhǎng)則不能作為種子。染菌罐不能作種子用。氨氮在中間代謝中必需漸漸利用，假設(shè)后期上升則不作種子用。5放罐把握：殘?zhí)?.5g/100ml，殘氮140mg/100ml，PH7.5，效價(jià)800uml。IIIII 初為主。2 3 瓶以上。小罐：在某罐種子移植到下一級(jí)罐后，進(jìn)展罐內(nèi)的沖洗及閥墊的更換，檢查嚴(yán)密度，檢查局部包括空氣分布管，攪拌軸封，與罐相連之法蘭焊接15 分鐘并檢查過(guò)

14、濾器有無(wú)培育基倒流。培育基實(shí)行連消：經(jīng)清洗，檢查嚴(yán)密后的罐批方可進(jìn)展空消，空消時(shí)0.160.19MPa 時(shí)，排出罐內(nèi)冷凝水后再開(kāi)頭計(jì)算4045 1251300.080.1MPa 時(shí)導(dǎo)入無(wú)菌空氣保壓，即可進(jìn)入連消狀態(tài)。連消時(shí)總蒸汽壓力不低于 0.25MPa，按生產(chǎn)進(jìn)度把各類(lèi)罐空消完畢， 0.20.25MPa，45 分鐘后可進(jìn)入連消連消時(shí)通過(guò)泵把培育基輸入消毒維持罐0.2MPa，126135、56噸h。消入罐中，冷卻培育基至近培育溫度，保壓待接種，取消后樣測(cè)C、N、P、PH。0.160.19MPa 壓力跌 0MPa 進(jìn)展投料實(shí)消。則先加水至攪拌處，然后投入已配好的培育基，攪拌成勻漿狀加熱。翻開(kāi)各支

15、路蒸汽，關(guān)閉罐蓋待壓力上升0.070.12MPa2025分鐘，消毒溫度為115124，完畢后保壓冷卻待接種，取消后樣測(cè)定C、N、P、PH。0.2m3分，5 lm3分，一只小罐種子通常移入一只中罐，特別狀況時(shí)一只小罐種子可移入二只中罐。4 8 PH C 和效價(jià)，25 8 小時(shí)測(cè)N，種子罐移種標(biāo)準(zhǔn)菌絲呈IIIII 初階2 小時(shí)須將種液涂片鏡檢什菌狀況，培育條件：271，33020rmin，4060h，1m3/分。假設(shè)種子罐生長(zhǎng)過(guò)程中遇代謝過(guò)快時(shí)可適時(shí)降溫培育，遇代謝慢種子罐PH 上升，可削減通氣量，小罐原材料及配比方下：原材料名稱(chēng)原材料名稱(chēng)小罐(500L)配比葡萄糖4.55.5黃豆餅粉2.53.5

16、硫酸銨0.50.7碳酸鈣0.20.7磷酸二氫鉀0.050.07玉米漿0.10.2(機(jī)動(dòng))豆油1L/罐批氯化鈉0.10.2配料體積250L消后體積250L消后質(zhì)量規(guī)格如下：小 罐小 罐pH6.08.0C3.55.5N120180P130190小罐把握規(guī)格：消后P必需符合質(zhì)量要求，假設(shè)不符合指差距較大接種前必需訂正。271。染菌罐不能作種子用。4放罐把握：殘?zhí)?.5g/100ml，殘氮140mg/100ml，PH7.5，效價(jià)1200uml。IIIII 4048 小時(shí)。中間代謝中，氨氮必需逐步利用。2 只小罐。一只小小罐可全部接入中罐作種子用。中罐：在某罐種子移植到下一級(jí)罐后，進(jìn)展罐內(nèi)的沖洗及閥墊的

17、更換，檢查嚴(yán)密度，檢查局部包括空氣分布管，攪拌軸封，與罐相連之法蘭焊接及閥門(mén)等，如15 分鐘并檢查過(guò)濾器有無(wú)培育基倒流。0.160.19MPa 時(shí)，排出罐內(nèi)冷凝水后再開(kāi)頭計(jì)算4045 125130罐壓維持在 0.080.1MPa 時(shí)導(dǎo)入無(wú)菌空氣保壓，即可進(jìn)入連消狀態(tài)。連消時(shí)總蒸汽壓力不低于 0.25MPa， 按生產(chǎn)進(jìn)度把各類(lèi)罐空消完畢，同時(shí)各所用管路也必需經(jīng)蒸汽消毒，壓力 0.20.25MPa，45 分鐘后可進(jìn)入連消，連消時(shí)通過(guò)泵把培育基輸入消毒維持罐，連消條件為0.2MPa，126135、56 噸h。消入罐中，冷卻培育基至近培育溫度，保壓待接種，取消后樣測(cè)C、N、P、PH。中罐由小罐移入種子

18、或整只小小罐移入，開(kāi)頭加空氣流量，前5 小360m3h，每二只中罐可移入一只大罐。各級(jí)罐壓出種子前均先用被接種罐內(nèi)培育基壓到壓出罐接種管進(jìn)展冷卻管道，防止?fàn)C傷種子。4 8 PH C 和效價(jià)，25 8 小時(shí)測(cè)N，種子罐移種標(biāo)準(zhǔn)菌絲呈IIIII 初階2 小時(shí)須將種子液涂片鏡檢什菌狀況。培育條件：271，18020rmin，3560h，6 m3/分，假設(shè)種子罐生PH 削減通氣量，調(diào)整配方等工藝調(diào)整措施，以期使各級(jí)種子罐質(zhì)量符合種子質(zhì)量要求。原材料葡萄糖原材料葡萄糖 黃豆餅粉硫酸銨 氯化鈉 碳酸鈣 玉米漿 豆油硫酸二氫鉀配料體積消后體積配比%4.55.52.53.50.50.70.102(機(jī)動(dòng))0.2

19、0.70.10.2(機(jī)動(dòng))8L/罐0.050.073.23.5M3.03.2M消后質(zhì)量規(guī)格如下：PHPH消 后 C消后N消后 P6.08.0(g/100ml)3.55.5(mg/100ml)120180(r/l)130190中罐把握規(guī)格：CNP 必需符合質(zhì)量要求，假設(shè)不符合指差距較大在接種前必需實(shí)行措施訂正。中間把握溫度必需在271，超過(guò)30時(shí)間較長(zhǎng)則不能作為種子用。染菌罐不能作種子用。氨氮在中間代謝中必需漸漸利用。菌齡必需以把握菌絲階段IIIII 3050 小時(shí)。接種量一只小罐接一只中罐，或一只小小罐可接一只中罐。7放罐把握：殘?zhí)?.5g/100ml，殘氮140mg/100ml，PH7.5，

20、效價(jià)1800uml。8小小罐、小罐、中罐遇到氨氮消耗快時(shí)可將罐溫調(diào)整到26 0. 5培育。大罐：大罐放罐后，降罐壓至零磅，開(kāi)蓋用水沖洗，將沖洗后的殘留發(fā)酵液，壓入提煉承接桶內(nèi)，再翻開(kāi)罐蓋，進(jìn)罐內(nèi)去除積垢后，檢查攪拌，空 氣分布管，葉子及上下婆司是否松，同時(shí)進(jìn)展閥墊及填料的更換和檢 修工作。然后蓋好罐蓋，通入空氣，進(jìn)展各連接處法蘭等、閥門(mén)、配 根、罐蓋、氨水、空氣等嚴(yán)密度檢查。待檢查完畢后，蓋緊罐蓋、準(zhǔn) 備下次空罐消毒。如遇染菌，可下去敲鏟，去除積垢，空消時(shí)延長(zhǎng)消 30 分鐘。罐空消：0.160.19MPa 進(jìn)展壓水后進(jìn)展45 0.080.1MPa 保壓，假設(shè)上一罐批染菌，則金屬過(guò)濾器進(jìn)展消毒。

21、發(fā)酵罐培育基消毒：0.3MPa，用泵將已配制的氮源餅粉等碳源糖水依次分別進(jìn)入消毒塔、維持罐消0.2MPa58分鐘。 2 噸自來(lái)水，最終可酌情消入自來(lái)水補(bǔ)足體積。發(fā)酵罐原材料及配比方下：原材料原材料黃豆餅粉葡萄糖硫酸銨配比1.82.24.06.00.20.7氯化鈉碳酸鈣 磷酸二氫鉀豆油 玉米漿 氯化鈷 配料體積消后體積00.20.20.70.060.091030L0.10.20.23440M2537M消后質(zhì)量規(guī)格如下：pHC(g/100ml)大于6.24.56.5消后 N (mg/100ml)130160消后 P(r/ml) 2002603040M378分鐘后，004006MPa，開(kāi)啟入罐閥接入

22、培育基，當(dāng)培育基遇到蛇形管、即開(kāi)冷卻水冷卻。當(dāng)接料完畢，關(guān)閉入罐閥，進(jìn)空氣，保持罐壓 008009MPa，待溫度冷至29預(yù)備接種。消后測(cè)PH要求 62 以上，如低則加NaOH 調(diào)整。接種前、接種后取樣測(cè)C、N、P、PH并做無(wú)菌測(cè)驗(yàn)。發(fā)酵罐大罐接種和培育，發(fā)酵工藝。發(fā)酵罐接種：01MPa 以上，保持發(fā)酵罐之0.030.05MPa，翻開(kāi)接種入罐閥，種子罐中罐或倒動(dòng)身酵罐菌液借壓力差流入發(fā)酵大罐內(nèi)，接完后關(guān)罐入罐閥，開(kāi)入適量空氣流量在 10m3分以上，保持罐壓先將罐內(nèi)培育基壓到壓出種子罐接種管道進(jìn)展管道冷卻，防止?fàn)C傷種子。發(fā)酵罐培育和工藝接種：發(fā)酵大罐由2348110hr35t。各級(jí)罐壓出種子前均先

23、用被接種罐罐內(nèi)培育基壓到接種罐進(jìn)展冷卻管道，防止?fàn)C傷種子。IIIII2液涂片鏡檢什菌狀況.培育條件罐溫:2630，一般把握在29，罐溫測(cè)定用電阻溫度計(jì)量來(lái)2527培育，后期代謝慢的罐批30培育數(shù)小時(shí)至放罐。罐壓:。空氣流量:10m分以上，不開(kāi)攪拌，以后逐級(jí)增加流2530m/4555。如遇發(fā)酵后期反響劇烈，可適當(dāng)降低空氣流量和提高罐壓。攪拌轉(zhuǎn)速:大罐正常轉(zhuǎn)速在 110120rmin，亦可依據(jù)生長(zhǎng)代謝進(jìn)展調(diào)速。前期70時(shí)，攪拌全開(kāi)，中后期攪拌全開(kāi)。培育時(shí)間:16010中間取樣:8214pH，2010081002440814000uml，透光度40%。發(fā)酵大罐中間把握消沫：前期或后期發(fā)酵猛烈時(shí)可少量

24、屢次加油，中期由于補(bǔ)糖量增加液面上升也可酌情加油，假設(shè)加油無(wú)效可放提煉假設(shè)干噸。補(bǔ)糖：30504060，203046反常罐可酌情減量補(bǔ)入。第一次把握殘?zhí)呛咳狈Σ糠萏砑又?.85.2%其次次把握殘?zhí)呛?.85.0%第三次把握殘?zhí)呛?.04.5%第四次把握殘?zhí)呛?.52.8%第五次把握殘?zhí)呛?.72.0%特別狀況一次補(bǔ)糖量3.0時(shí)以分二次補(bǔ)入為宜，第三、四、五次補(bǔ)0.5則第五次糖可以不補(bǔ)。后期把握補(bǔ)糖量應(yīng)與氮耗相調(diào)，防止發(fā)酵液化稀。補(bǔ)氮：補(bǔ)氮可用15的無(wú)菌過(guò)濾氨水或NHSO4241依據(jù)殘氮用量計(jì)算通氨量參考控氮水平。3參考代謝及濃度。204035l35l次通氨為流加，生長(zhǎng)期最適pH6.56.9，氨氮水平可在90120mg100m40PH把握在6.87.，80100mg100mlpH7.10NHSO424替氨水，以調(diào)低 pH SO0.l20mg100ml NHN。硫4242酸氨把握補(bǔ)入量0.11401207585mg10