溫潤養(yǎng)血顆粒治療肺纖維化的實驗研究

1、溫潤養(yǎng)血顆粒治療肺纖維化的實驗研究【關(guān)鍵詞】肺纖維化；,大鼠；,中藥復(fù)方；,實驗研究摘要：目的：尋找治療肺纖維化有效的中藥復(fù)方制劑。方法：將36只SD大鼠隨機分成正常組、假手術(shù)組、模型組和孝中、大劑量組，每組6只。從造模第2天開場給予溫潤養(yǎng)血顆粒治療，28d后處死，取左上肺以10%中性福爾馬林固定，做HE、VG、ASSN染色，進展病理檢查，并以電子計算機圖象分析系統(tǒng)進展圖象量化分析。結(jié)果：病理光鏡檢查顯示，治療組肺泡炎和肺纖維化程度較模型組輕，治療組肺間隔面積/視場面積小于模型組(P0.05)，治療組肺間隔灰度/肺泡灰度大于模型組(P0.05)。結(jié)論：溫潤養(yǎng)血顆?？梢杂行б种朴杉毙苑螕p傷引起的

2、肺纖維化，小劑量給藥效果最好。關(guān)鍵詞：肺纖維化；大鼠；中藥復(fù)方；實驗研究肺纖維化是多種肺間質(zhì)疾病的共同結(jié)果。主要表現(xiàn)為進展性呼吸困難、干咳等病癥，其死亡率較高。目前對其治療以口服糖皮質(zhì)激素為主。溫潤養(yǎng)血顆粒是根據(jù)曹世宏教授的臨床經(jīng)歷方化裁而成，在臨床應(yīng)用中獲得較好療效。本實驗采用博萊霉素引發(fā)的肺纖維化大鼠模型為實驗對象，以溫潤養(yǎng)血顆粒治療28d，將各組大鼠的肺組織做病理切片，利用計算機圖象分析系統(tǒng)進展圖象分析，評價療效。1材料和方法1.1動物清潔級SD雄性大鼠36只，由中國科學院上海實驗動物研究所提供，體重210250g。完全隨機分成6個組，分別為：正常組、假手術(shù)組、模型組、小劑量組、中劑量組

3、、大劑量組。動物飼養(yǎng)條件：溫度20，濕度47%。1.2實驗藥物溫潤養(yǎng)血顆粒(批號：021029)，由江蘇省中醫(yī)醫(yī)院制劑部提供。其組成是：人參，蛤蚧，當歸，熟地，丹參，川芎等共13味。實驗用藥為浸膏制劑，濃度以生藥計為3.8g/L。實驗劑量確定以臨床用量(以生藥計：24g/kg體重)的4倍為大劑量，2倍為中劑量，臨床用量為小劑量，分別為9.6，4.8，2.4g/kg。實驗時將浸膏臨時配制成相應(yīng)濃度(0.96，0.48，0.24g/l)，灌喂量為1l/100g體重，模型組灌喂一樣體積的生理鹽水。從造模后第2天開場治療，1次/d，共28d。博萊霉素(BL)由日本化學株式會社消費，1.5g/只，溶于0

4、.3l生理鹽水中。1.3肺間質(zhì)纖維化模型的制作按文獻1的方法進展。實驗組動物用乙醚吸入麻醉后，切開頸部皮膚，以血管鉗鈍性別離暴露氣管，用注射器在環(huán)狀軟骨間刺入氣管腔，向氣管內(nèi)注射博萊霉素(1.5g/只溶于0.3l的生理鹽水中)，假手術(shù)組動物在一樣條件下氣管內(nèi)注射生理鹽水0.3l。注射后立即將大鼠直立并前后旋轉(zhuǎn)。正常組同期飼養(yǎng)，不作任何處理。1.4病理學評價方法取大鼠的左上肺以10%中性福爾馬林固定，酒精梯度脫水，石蠟包埋，制成5的切片，做HE，VG，ASSN染色。形態(tài)定量分析采用ias2000圖象分析系統(tǒng)(四川大學圖象圖形研究所)，將切片進展HE，VG染色，將切片置于分析儀顯微鏡上，在100倍

5、下每例切片自左向右，自上向下選取10個視野，分別測定肺泡間隔面積，視場面積，肺泡間隔灰度，肺泡灰度。測定條件：分辨率800600，256度灰階。所有數(shù)據(jù)以s表示，治療組與模型組先進展F檢驗，檢驗方差齊性。再進展t或t檢驗。治療組間進展方差分析。P0.05為有顯著性差異。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2結(jié)果2.1肺泡間隔面積模型組肺泡間隔面積大于假手術(shù)組，有顯著差異(P0.01)，小中大劑量組肺泡間隔面積及視場的比值均小于模型組，有統(tǒng)計學差異(P0.05)。對三個劑量組進展方差分析有顯著性差異(P=2.16105)。另外，假手術(shù)組的肺間隔面積，和與視場的比值均大于正常組，且有顯著性差異(P0.01)。見

6、表1。表1各組標本肺泡間隔面積略#與小劑量組比擬；*與正常組比擬；與假手術(shù)組的比擬；與模型組比擬2.2肺泡間隔灰度、肺泡間隔灰度與肺泡灰度比值模型組肺泡間隔灰度小于正常組及假手術(shù)組，且有顯著性差異(P0.01)。小劑量組大于模型組，且有顯著性差異(P0.01)，與正常組比擬未見統(tǒng)計學差異(P0.05)。中大劑量組與模型組比擬有統(tǒng)計學差異(P0.05)。小中大劑量組A/B比值行方差分析有顯著性差異(P=3.53109)。見表2。表2各組標本肺泡間隔灰度略#與小劑量組比擬；*與正常組比擬；與假手術(shù)組的比擬；與模型組比擬3討論肺間質(zhì)纖維化臨床病癥的主要特點是進展性的運動性呼吸困難和干咳?，F(xiàn)代中醫(yī)理論

7、認為，肺間質(zhì)纖維化與“肺痿“喘證“咳嗽相類似，根本可歸屬于“肺痿的范疇。其病機與肺腎兩虛有關(guān)，而肺間質(zhì)纖維化病理過程中的肺泡壁增厚、滲出物機化、肺泡變形閉鎖、間質(zhì)中的纖維組織收縮、毛細血管數(shù)量減少和影響血液循環(huán)等表現(xiàn)與“肺痿中的精血缺乏、氣陰兩虛、血行瘀滯的病機相似。肺纖維化的治療應(yīng)以溫潤行氣、生津化燥、養(yǎng)血活血為主。溫潤養(yǎng)血顆粒是在蛤蚧散(?博濟方?)、炙甘草湯以及四物湯的根底上，結(jié)合治療勞嗽久喘的經(jīng)歷用藥化裁而成。整體成效以溫補腎陽、納氣平喘、潤肺生津、活血行氣為主。肺纖維化患者服用溫潤養(yǎng)血顆粒34周后，血氣分析中的P2，Sa2較治療前有所進步。博萊霉素引發(fā)的肺纖維化模型是目前公認的比擬符

8、合人肺纖維化病理演變的模型。從模型制作后第2天即給予溫潤養(yǎng)血顆粒治療，觀察其從急性肺損傷期開場，對致纖維化因素是否有阻抑作用。戴令娟等3的研究說明氣管內(nèi)注入博萊霉素后第28天間質(zhì)纖維化成分增加、肺泡壁增厚、肺泡腔縮小，此時肺纖維化開展到頂峰，而28d后由于自生修復(fù)作用肺纖維化程度有所減輕，所以在我們的研究中以28d為治療持續(xù)時間。在第28天模型組肺泡間隔面積/視場增大與正常組及假手術(shù)組比擬顯著增大，且有顯著差異(P0.01)，表現(xiàn)出一樣的病理演變過程。治療組肺間隔面積/視場小于模型組(P0.05)，小劑量組與正常組比擬無顯著性差異(P0.05)。說明溫潤養(yǎng)血顆粒可阻斷上述病理過程的開展。為了更

9、明確的觀察膠原的增生情況，我們采用了VG染色以顯示膠原。在圖象分析中灰度值減小說明在顯微鏡下透光性下降，膠原纖維密度增高。結(jié)果顯示模型組灰度最低，說明膠原密度最大，含量最多。同樣治療組與模型組比擬均有差異(P0.05)。說明溫潤養(yǎng)血顆粒可減少肺纖維化形成過程中的膠原纖維含量的增加。戴令娟等4給模型大鼠腹腔注射芎嗪、當歸注射液治療28d后，發(fā)現(xiàn)肺纖維化程度較模型組低。劉衛(wèi)敏等5用25%濃當歸注射液后，急性肺泡炎階段自由基損傷減輕，炎性細胞滲出明顯減少，炎性介質(zhì)如Fn含量顯著下降；病理上肺纖維化明顯減輕；電鏡下膠原纖維減少，反映膠原纖維含量的Hyp明顯減少，肺纖維化過程受到阻遏，療效與用激素無明顯

10、差異。與以往的研究不同的是，本研究為口服復(fù)方制劑，川芎和當歸在復(fù)方中僅占1/5，并且隨著給藥劑量的增加，肺泡隔面積相對于小劑量組增大，灰度值減小，說明中大劑量抗纖維化作用較小劑量低。故我們認為作用機理可能與以往的研究不同，不能用單一成分的作用解釋。詳細的作用機理有待進一步研究說明。參考文獻：1陳伯義，姜莉.博萊霉素致大鼠肺纖維化肺泡巨噬細胞氧化和抗氧化損傷的動態(tài)研究J.中國醫(yī)科大學學報，1995，24(3)：240242.2SzapielSV,ElsnNA,FulerJD.Bleyininduedintersitialpulnarydiseaseinnude,athyiuseJ.ARevRespirDis,1979,120:893.3戴令娟，候杰，蔡后榮，等.肺纖維化動物模型肺組織形態(tài)定量分析J.南京鐵道