米諾環(huán)素對衰老癡呆大鼠腦組織eNOS、iNOS表達的影響

1、米諾環(huán)素對朽邁癡呆大鼠腦構(gòu)造eNOS、iNOS表達的影響趙宇蔡志友晏勇余昌胤張駿黃良國晏寧承歐梅李潔穎蔣萍【摘要】目的不雅察米諾環(huán)素(inyline)對朽邁癡呆大鼠學習影象和腦構(gòu)造eNS、iNS表達的影響，探究米諾環(huán)素對朽邁癡呆腦庇護作用機制。要領(lǐng)istar大鼠隨機分組：假手術(shù)組(S組)、癡呆模子組(組)、米諾環(huán)素治療組(T組)。酶聯(lián)免疫吸附法和免疫構(gòu)造化學法檢測大鼠腦構(gòu)造eNS、iNS的含量，舉動學檢測大鼠影象學習改變。效果T、組與S組大鼠前后兩次跳臺實行、水迷宮實行的效果有明顯性差異(P0.01)，T組與組大鼠前后兩次跳臺實行、水迷宮實行的檢測效果有明顯性差異(P0.01)。T組iNS表達

2、較組低落(P0.01),T組eNS表達較組增高(P0.01)；T組eNS、iNS表達較S組增高(P0.01)；組eNS、iNS表達較S組明顯增高(P0.01)。結(jié)論米諾環(huán)素能低落朽邁癡呆大鼠腦構(gòu)造iNS、加強eNS表達按捺氧化應激反響發(fā)揮腦庇護作用?！娟P(guān)鍵詞】癡呆；米諾環(huán)素；一氧化氮合酶【Keyrds】Deentia;inyline;Nitrixidesynthas一氧化氮合酶(NS)是催化一氧化氮(N)生物合成的酶，普及存在于種種范例的細胞中。內(nèi)皮源性一氧化氮合酶(eNS)可以激活血管平滑肌細胞中的可溶性鳥苷酸環(huán)化酶，使胞內(nèi)AP濃度升高，從而起到擴張血管、按捺血小板和白細胞黏附、聚攏的作用，

3、發(fā)揮神經(jīng)庇護成效1。誘導性一氧化氮合酶(iNS)重要漫衍于巨噬細胞、炎性中性粒細胞、血管平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞、小膠質(zhì)細胞和星型細胞等，一旦合成績不竭地產(chǎn)生N，直至底物耗盡，過量產(chǎn)生的N可通過活性氮、氧化應激效應對腦構(gòu)造造成損害2。米諾環(huán)素作為四環(huán)素類藥物中一種有用的神經(jīng)細胞庇護劑，在按捺神經(jīng)炎癥3、按捺小膠質(zhì)細胞激活4、按捺基質(zhì)金屬卵白酶表達5，6、按捺活性氧產(chǎn)物和氧化應激的產(chǎn)生7，8、按捺細胞調(diào)亡9歷程等發(fā)揮腦庇護作用。本研究通過不雅察朽邁癡呆大鼠動物模子腦構(gòu)造eNS和iNS的表達，探究NS在朽邁癡呆中的發(fā)病機制，并接納米諾環(huán)素對朽邁癡呆大鼠舉行干預，探究米諾環(huán)素對朽邁癡呆腦庇護作用的機制。

4、1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1質(zhì)料1.2要領(lǐng)穿梭箱底部鋪以不銹鋼電柵，巨細為601625，箱頂部裝有蜂鳴器。練習時，將大鼠放在箱內(nèi)任一側(cè)，20s后出現(xiàn)蜂鳴音，連續(xù)15s，蜂嗚5s后由底部電柵賜與電刺激(電流強度1.5A)，大鼠受到電刺激后逃到另一端，電擊蜂鳴主動制止。記載動物在單獨蜂鳴期間躲避的時間(主動躲避時間)和遭受電刺激的時間以及電擊的次數(shù)。全部動物天天測試1次，每次20個循環(huán)，全程練習。rris水迷宮作為檢測實行動物學習影象程度的緊張東西，其測試步伐重要包羅定位飛行實行和空間探究實行兩個部門。(1)定位飛行實行：用于丈量大鼠獵取履歷(學習)的本領(lǐng)。實行前1d下戰(zhàn)書將大鼠放入水中自由游泳2in，不雅

5、察其游泳姿勢并使其認識實行情況。實行歷時4d，天天上、下戰(zhàn)書兩個時間段，每個時間段練習4次，每次練習隨機選擇一個入水點，將大鼠面向池壁放入水池，同一次練習全部大鼠入水點雷同。記載大鼠尋到平臺的時間，即暗藏期。(2)空間探究實行：用于丈量大鼠保存履歷(影象)的本領(lǐng)，即大鼠學會探求平臺后，對平臺空間位置影象的本領(lǐng)。在練習的末了時段撤消平臺，然后在B象限任選一個入水點將大鼠面向池壁放入水中，不雅測其在120s內(nèi)涵各象限的游泳間隔及其占總間隔的百分比，以及120s內(nèi)穿越各象限平臺相應位置(即平臺在D象限地點的位置)的次數(shù)。記載大鼠尋到平臺的時間(學習暗藏期)，及120s內(nèi)穿越各象限平臺相應位置的次數(shù)(

6、影象暗藏期)，比力各組暗藏期，評價大鼠學習影象成效。大鼠麻醉后結(jié)實于手術(shù)臺上，快速心臟抽血約5l注入試管中，室溫下靜置2h后，4離心，3000r/in，10in，取血清。在冰臺上敏捷分散大鼠一側(cè)的海馬，按2.5l/g腦質(zhì)量參加相稱體積的冰生理鹽水，用勻漿器將構(gòu)造研磨，然后冰浴下超聲波破壞制成勻漿，4，10000r/in離心10in，取上清液。實行嚴酷根據(jù)eNS、iNS酶聯(lián)免疫吸附法說明書步調(diào)舉行。1.3統(tǒng)計學處置懲罰全部數(shù)據(jù)以xs表現(xiàn)，全部數(shù)據(jù)接納SPSS11.0軟件包舉行統(tǒng)計學處置懲罰，同一組內(nèi)差異時相點的比力接納方差闡發(fā)，兩組之間同一時相點的比力接納t查驗。2效果2.1水迷宮、穿梭箱實行效

7、果穿梭箱實行檢測表現(xiàn)組大鼠的電擊次數(shù)與S組比力明顯增長(P0.01)，主動躲避次數(shù)明顯低落(P0.01)；組大鼠的學習暗藏期和影象暗藏期時間明顯延伸(P0.01)；T組與組同時相點比力電擊次數(shù)明顯低落(P0.01)，主動躲避次數(shù)明顯增高(P0.01)，T組大鼠的學習暗藏期和影象暗藏期時間明顯延伸(P0.01)，組各組間大鼠舉動學的檢測效果間差異無明顯性(P0.05)，T組各組間大鼠舉動學的檢測效果差異也無明顯性(P0.05)(表1)。表1水迷宮、穿梭箱實行效果(略)2.2iNS的表達與闡發(fā)ELISA法檢測iNS表現(xiàn)組腦構(gòu)造內(nèi)iNS程度顯著增高(P0.01),顛末米諾環(huán)素治療后，iNS程度明顯低

8、落(P0.01)(表2)。免疫構(gòu)造化學法D值與ELISA值具有同等性，模子鼠腦構(gòu)造內(nèi)iNS程度明顯增高(P0.01)，顛末米諾環(huán)素治療后，iNS程度明顯低落(P0.01)；T組與組同時相點比力iNS表達明顯低落(P0.01)；組各組間效果差異無明顯性(P0.05)，T組各組間檢測效果差異無明顯性(P0.05)。顛末米諾環(huán)素治療后iNS腦內(nèi)表達程度明顯低落。2.3各組大鼠腦構(gòu)造eNS的表達ELISA法檢測eNS表現(xiàn)組腦構(gòu)造內(nèi)eNS程度顯著增高(P0.01)。和iNS相反，顛末米諾環(huán)素治療后，eNS程度明顯增高(P0.01)(表2)。免疫構(gòu)造化學法D值與ELISA值具有同等性，模子鼠腦構(gòu)造內(nèi)eNS

9、程度明顯增高(P0.01)，顛末米諾環(huán)素治療后，eNS程度明顯增高(P0.01)；T組與組同時相點比力eNS表達明顯低落(P0.01)；組各組間效果間差異無明顯性(P0.05)，T組各組間檢測效果間差異無明顯性(P0.05)。顛末米諾環(huán)素治療后eNS腦內(nèi)表達程度明顯增高。表2各組iNS、eNS表達程度(略)3討論活性氮介質(zhì)N到場了腦缺血后的病理損傷歷程。而NS是N合成歷程中的關(guān)鍵酶。如今已有3種特異的NS被克隆，根據(jù)細胞或構(gòu)造泉源差異別離稱為eNS、nNS、iNS。這三種亞型的NS從成效上可分為兩大類。布局型NS包羅nNS和iNS，差異的NS在腦缺血歷程中起到差異乃至相反的作用。nNS和eNS

10、漫衍于血管內(nèi)皮細胞、神經(jīng)構(gòu)造和血小板中，在生理條件下，腦構(gòu)造中eNS合成量很小，通過擴張血管按捺血小板和白細胞黏附、聚攏，發(fā)揮神經(jīng)庇護成效1。而nNS那么是神經(jīng)元和小膠質(zhì)細胞在缺血急性期，NDA受體激活a2+大量內(nèi)流時產(chǎn)生的，具有神經(jīng)毒性作用14。iNS一旦合成績不竭地產(chǎn)生N，直至底物耗荊這種過量產(chǎn)生的N可對缺血構(gòu)造造成損害2。通過米諾環(huán)素治療后，模子組大鼠不但舉動學病癥明顯改進，而且iNS的表達明顯低落，eNS的表達明顯增高，表白米諾環(huán)素對朽邁癡呆學習影象的進步與按捺朽邁癡呆大鼠腦內(nèi)活性氮的產(chǎn)生、氧化應激途徑有關(guān)。本研究創(chuàng)造自由基慢性中毒朽邁癡呆模子活性氮產(chǎn)物明顯增高，表白了活性氮產(chǎn)物通過氧化應激途徑到