香菇多糖對荷瘤鼠免疫細(xì)胞及生存率的影響

1、香菇多糖對荷瘤鼠免疫細(xì)胞及生存率的影響【摘要】目的討論香菇多糖對荷瘤S180鼠免疫細(xì)胞及生存率的影響。方法昆明小鼠70只，分為正常鹽水對照組，腫瘤模型、組，香菇多糖實驗、組，生存實驗?zāi)Ｐ徒M，生存實驗給藥組。觀察計算小鼠體重、瘤重、腫瘤指數(shù)及抑瘤率，脾重及脾指數(shù)，脾組織構(gòu)造，體視學(xué)方法計量脾白髓相對面積百分比及單位面積中脾小體的個數(shù)，外周血白細(xì)胞分類計數(shù)，小鼠生存質(zhì)量和生存天數(shù)等指標(biāo)。結(jié)果香菇多糖有顯著的抑瘤作用，并可明顯延長荷瘤鼠的生存時間。香菇多糖使脾指數(shù)明顯升高，使荷瘤鼠脾白髓相對面積及脾小體個數(shù)明顯增加。香菇多糖使末梢血中性幼稚細(xì)胞比例明顯增加。結(jié)論香菇多糖能使荷瘤鼠免疫細(xì)胞數(shù)量增加，明

2、顯延長腹水型S180小鼠的生存期?！娟P(guān)鍵詞】香菇多糖；S180；生存率；體視學(xué)；白細(xì)胞分類計數(shù)Abstrat：bjetiveTinvestigatetheeffetsflentinaniunyteandsurvivalrateinS180tur-bearingie.ethds70ieeredividedint7grups:nralsalinentrlgrup，tursalinentrlgrup，tursalinentrlgrup，turlentinangrup，turlentinangrup，survivedelgrupandsurvivelentinangrup.Evaluatinfthee

3、xperientalresultinludedthegeneralnditinftheie,inhibitryratefS180tur,survival,hangesinbdyEight,turEIght,turindex,spleeneights,spleenindex,relativeareasfspleenhitepulp,splenindulenuberandBunts.Results1.LentinauldinhibitthegrthfS180saraandprlnglifeftur-bearingiebviusly.2.Spleenindexeseregreatlyhigheran

4、drelativeareasfspleenhitepulpandsplenindulenuberereinreasedinturlentinangrupthanthers.3.Iatureneutrphilratiinturlentinangrupinreased.nlusinLentinaanstiulateiunyteprpagatingandprlnglifeftur-bearingiebviusly.Keyrds：Lentina;S180；Surviverati;Sterelgy;Peripheralleuytesunt香菇多糖lentinan,LTN作為一種重要的生物調(diào)節(jié)劑，因其確定

5、的抗瘤效應(yīng)，毒副作用小，已廣泛應(yīng)用于腫瘤的免疫治療1。但香菇多糖對荷瘤者生存質(zhì)量和生存率的影響，以及它對荷瘤者免疫器官組織構(gòu)造的影響，那么少見研究。本實驗以小鼠S180移植性腫瘤為模型，通過對腫瘤指數(shù)、抑瘤率、脾指數(shù)，脾組織構(gòu)造觀察，體視學(xué)方法計量脾白髓相對面積百分比及單位面積中脾小體的個數(shù)，外周血白細(xì)胞分類計數(shù)，小鼠生存質(zhì)量和生存天數(shù)的觀察等各項指標(biāo)的測定分析，觀察了香菇多糖對荷瘤S180機體免疫功能的影響，討論了香菇多糖對腫瘤的作用效果及其可能的作用機制，為香菇多糖的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供實驗根據(jù)。1材料小鼠S180細(xì)胞株Sara180由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥研究所購進(jìn)，本院科研中心傳代培養(yǎng)。實

6、驗用56天齡昆明小鼠，由贛南醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。注射用香菇多糖消費廠家：南京康海藥業(yè)，批號：051107。lypus顯微鏡。SPSS14.0統(tǒng)計軟件包。2方法2.1荷瘤S180鼠模型的建立取已接種7d腫瘤生長良好的S180腹水型小鼠，抽吸乳白色的濃稠腹水以無菌生理鹽水稀釋后，用血球計數(shù)板進(jìn)展活細(xì)胞計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1107，制成腫瘤細(xì)胞懸液活細(xì)胞率95%。在小鼠右前腋皮下注射0.2lS180細(xì)胞懸液，制成實體瘤模型。2.2動物分組及處理昆明小鼠70只，隨機分為7組，雌雄各半，后兩組用作生存率實驗。第1組為正常鹽水對照組，右前腋皮下注射0.2l生理鹽水，7d后處死；第2組為腫瘤模型組，第3組

7、為腫瘤模型組，第4組為香菇多糖實驗組,第5組為香菇多糖實驗組，這4組于接種腫瘤后第2天始分別隔日腹腔注射生理鹽水0.2l和香菇多糖0.2l(每只每次0.025g)，第2，4組腹腔注射3次，第3，5組腹腔注射7次，均于最后1次給藥后第2日處死；第6，7組處理方法分別同第3，5組，但7次腹腔注射后不處死，繼續(xù)按常規(guī)飼養(yǎng)，并每日觀察記錄一般情況。2.3取材小鼠2%戊巴比妥鈉全身麻醉，稱重后剪開頸部皮膚，注射器穿刺頸內(nèi)靜脈取血，分別置抗凝管中和作二張血涂片；開胸，從左心室灌注生理鹽水，至右心房流出清亮液體后改用4%多聚甲醛溶液灌注固定，迅速剝離腫瘤并取脾，電子天平稱重后記錄。然后按每只小鼠的不同編號分

8、別入4%多聚甲醛溶液中后固定。血涂片自然風(fēng)干后，甲醇固定，瑞氏染液染色待檢。2.4檢測指標(biāo)2.4.1生存質(zhì)量和壽命延長率每日觀察記錄生存實驗各組小鼠的一般情況和腫瘤生長情況。壽命延長率=(給藥組平均生存時間模型組平均生存時間)/模型組平均生存時間。2.4.2脾重及脾指數(shù)，腫瘤重、腫瘤指數(shù)及抑瘤率計算公式：脾指數(shù)g/g=脾體質(zhì)量g/小鼠體質(zhì)量g；腫瘤指數(shù)g/g=腫瘤體質(zhì)量g/小鼠體質(zhì)量g；抑瘤率(%)=(腫瘤模型組腫瘤平均體質(zhì)量給藥組腫瘤平均體質(zhì)量)/腫瘤模型組腫瘤平均體質(zhì)量100%。2.4.3脾白髓相對面積及脾單位面積中脾小體的個數(shù)所取各組脾臟固定24h后，按常規(guī)脫水透明，低溫石蠟包埋。作連續(xù)

9、切片，片厚5，隔10片取1片，每例取3片，HE染色，用體視學(xué)方法計量脾本質(zhì)中構(gòu)造的變化情況。計量方法如下：用物鏡校準(zhǔn)片校定方網(wǎng)系統(tǒng)中小方格的邊長d及面積d2，以目鏡測微尺測參照系脾組織面積測點數(shù)PS，參照系被測構(gòu)造脾白髓交點數(shù)P，計數(shù)脾小體的個數(shù)n。分別按公式A=P/PS100%和NS=nPSd2計算脾白髓相對面積A及單位面積中脾小體的個數(shù)NS。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.4.4外周血白細(xì)胞計數(shù)和分類按常規(guī)在lypus顯微鏡下用血細(xì)胞計數(shù)板對抗凝血做白細(xì)胞計數(shù)；每個樣本2張血涂片，每張血涂片觀察100個白細(xì)胞，根據(jù)美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會natinalitteefrliniallabratry

10、standards,NLS)推薦的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)分淋巴細(xì)胞、中性幼雉細(xì)胞和中性分葉細(xì)胞，并做記錄。2.5統(tǒng)計學(xué)處理實驗數(shù)據(jù)以s表示，采用SPSS14.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)展統(tǒng)計學(xué)分析。經(jīng)正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗滿足正態(tài)分布和方差齊同后作單因素方差分析，組間差異用SNK方法檢測。3結(jié)果3.1香菇多糖對各組小鼠生存天數(shù)的影響小鼠接種腫瘤細(xì)胞4天后開場出現(xiàn)可觸及腫瘤。腫瘤模型組小鼠成瘤率100%。小鼠飲食減少，毛發(fā)雜亂無光澤，豎毛現(xiàn)象明顯，活動也明顯減少。香菇多糖給藥組小鼠成瘤率90%，腫瘤生長緩慢，且明顯比腫瘤模型組小鼠活潑，皮毛有光澤，豎毛現(xiàn)象不明顯，生存期明顯延長。模型組小鼠50%死于20d以內(nèi)，而給藥組小

11、鼠只有20%死于20d以內(nèi)。到實驗完畢時接種腫瘤后120d，仍有二只小鼠存活，從外觀看安康活潑，似無異常。但其中一只在右腹下可觸及綠豆大腫塊已維持20多天未見增長。各組小鼠生存情況見表1和圖1。表1各組小鼠平均生存時間和壽命延長率(略)3.2香菇多糖對腫瘤生長的影響香菇多糖有顯著的抑瘤作用。結(jié)果見表2。表2各組小鼠腫瘤生長情況(略)3.3香菇多糖對荷瘤鼠脾臟組織構(gòu)造的影響腫瘤模型組脾白髓相對面積與單位面積脾構(gòu)造中脾小體個數(shù)均比正常對照組下降，但在應(yīng)用香菇多糖后，有明顯上升。香菇多糖實驗組小鼠的脾臟指數(shù)比正常鹽水對照組及腫瘤模型組均有明顯上升。以上情況隨用藥時間延長，改善更為明顯。結(jié)果見圖2和表

12、3。表3各組小鼠脾臟組織構(gòu)造比擬(略)3.4香菇多糖對荷瘤鼠外周血免疫細(xì)胞的影響荷瘤鼠外周血白細(xì)胞總數(shù)低于正常組，香菇多糖能逆轉(zhuǎn)這種狀況，并使末梢血中性幼稚細(xì)胞比例明顯增加，其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果見表4。表4各組小鼠外周血細(xì)胞比擬(略)4討論香菇多糖雖無直接的抗瘤活性，但能通過激活不同的免疫反響而到達(dá)預(yù)防腫瘤生成和轉(zhuǎn)移的抗瘤效應(yīng)。可使腫瘤縮小，顯著延長荷瘤鼠的壽命24。本實驗結(jié)果顯示，香菇多糖在體內(nèi)對實驗性S180實體瘤的生長具有較明顯的抑制作用，用藥一周時腫瘤指數(shù)由38.810下降為24.032。抑瘤率到達(dá)35.21%。隨著用藥時間的延長，抑瘤效果更為明顯，用藥2周時腫瘤指

13、數(shù)由75.934下降為27.872。抑瘤率到達(dá)61.45%。且小鼠生存狀況也較好。接種腫瘤后存活30d以上的，模型組只有30%，而給藥組有60%。到實驗完畢時接種腫瘤后120d，給藥組仍有兩只小鼠存活，壽命延長率為72.76%。這說明香菇多糖有很好的延長S180荷瘤鼠壽命的作用，且與其明顯的抑瘤效應(yīng)有關(guān)。有研究說明，雖然香菇多糖以宿主介導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞免疫為主，但在實驗動物中發(fā)現(xiàn)也有促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖和合成IgG的功能，并能減輕由于使用抗腫瘤藥物治療引致的細(xì)胞毒性反響5,6。本實驗?zāi)[瘤模型組脾白髓面積及單位面積內(nèi)脾小體個數(shù)明顯降低。應(yīng)用香菇多糖后，脾指數(shù)增加，脾白髓的抑制情況得到改善，且隨時間的

14、延長，效果愈為凸顯。當(dāng)用藥兩周后，較未用藥組比擬差異有統(tǒng)計學(xué)意義P0.05，生發(fā)中心也更為明顯。這提示香菇多糖可能通過激活Th細(xì)胞，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的成熟、分化增殖，加強機體的抗腫瘤效應(yīng)。本實驗中，香菇多糖實驗組脾白髓相對面積雖比正常組下降，但無統(tǒng)計學(xué)意義；且其脾指數(shù)與正常組比擬有明顯上升P0.05，這說明實驗組脾白髓絕對面積不一定小于正常組。最終結(jié)果還有待做進(jìn)一步的研究。熊繼安等人7的研究說明，香菇多糖能增加血中淋巴細(xì)胞和大顆粒淋巴細(xì)胞的數(shù)量，促進(jìn)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率，增加NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞的活性。本實驗中香菇多糖使中性幼稚細(xì)胞比例明顯增加，其結(jié)果與上述報道相符。這一事實說明，香菇多糖可能使宿主

15、骨髓造血功能增強，這一方面改善了宿主的免疫抑制狀態(tài)，使荷瘤宿主充分調(diào)動自身的抗瘤機制，另一方面，將可使荷瘤宿主生存質(zhì)量得到改善，有益于配合放化療藥物的應(yīng)用，幫助患者維持相對較好的免疫功能來承受藥物的治療，起到更好的抗瘤效應(yīng)。上述實驗結(jié)果提示，香菇多糖具有調(diào)節(jié)免疫，協(xié)助抗腫瘤，延長荷瘤小鼠生存期的作用：其一是能進(jìn)步脾指數(shù)，改善荷瘤機體脾白髓受抑制狀況，加強機體的抗腫瘤效應(yīng)；其二是能改善骨髓造血機能，使外周血白細(xì)胞總數(shù)及中性幼稚細(xì)胞百分比增加，恢復(fù)和進(jìn)步宿主免疫功能?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1劉棟,錢建亞,卜敏.香菇多糖抗腫瘤作用研究現(xiàn)狀J.中國食用菌,2002,222:6.2asserSP.ediinalu

16、shrsasasurefantiturandiundulatingplysaharidesJ.ApplirbilBitehnl.2002，60(3):258.3aruyaaS,SukekaaY,KanekY,etal.Antiturativitiesflentinanandiellapistintur-bearingiJ.GanTKagakuRyh，2022，33(12):1726.4金亨燮,崔仁花,李承憲.香菇多糖的化學(xué)構(gòu)造與藥理成效J.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報，2022,26(2):113.5angG,Lin,ZhaR,etal.Effetsfsixplysaharidesextratedfrplantsntheiunlgialellsfi