廣金錢草對(duì)膽色素結(jié)石的實(shí)驗(yàn)研究

1、廣金錢草對(duì)膽色素結(jié)石的實(shí)驗(yàn)研究【摘要】目的討論廣金錢草對(duì)膽色素結(jié)石的作用機(jī)制。方法用林可霉素對(duì)豚鼠造模1周，停藥1周后灌服廣金錢草高中低劑量和陽(yáng)性對(duì)照藥4周，空白組和模型組正常喂養(yǎng)4周。結(jié)果廣金錢草顯著降低豚鼠膽囊結(jié)石率，對(duì)膽囊炎有治療效果，并且能影響血液生化學(xué)指標(biāo)和膽汁成分。結(jié)論實(shí)驗(yàn)通過大體解剖、病理以及血和膽汁生化檢查，進(jìn)一步證明廣金錢草抗炎作用，尤其是對(duì)慢性炎癥。通過抗炎保護(hù)了膽囊上皮，防止水腫和分泌大量粘蛋白，維護(hù)正常組織構(gòu)造;同時(shí)降低膽汁粘度、DBIL、a2+和-葡萄糖醛酸酶濃度，防止膽色素結(jié)石核心形成和結(jié)石的增大?？寡谆謴?fù)了膽囊的動(dòng)力學(xué)環(huán)境，有消除膽汁淤滯的作用，故有排石作用。另一

2、方面，保護(hù)肝細(xì)胞功能，促進(jìn)肝細(xì)胞分泌膽汁酸，膽汁酸增加使游離膽紅素的溶解度增加及鈣離子沉積減少，阻止結(jié)石的產(chǎn)生。同時(shí)，肝臟分泌的增加有利膽作用。廣金錢草通過以上幾方面到達(dá)治療膽色素結(jié)石?！娟P(guān)鍵詞】廣金錢草;膽色素結(jié)石;膽囊炎廣金錢草作為四大南藥之一，在民間運(yùn)用歷史悠久，被廣泛用來治療熱淋、砂淋、小便澀痛、黃疸尿赤、尿路結(jié)石等1。目前有關(guān)它對(duì)膽結(jié)石治療的研究較少，尤其是對(duì)膽色素結(jié)石的研究暫未見。已有研究說明廣金錢草通過促進(jìn)K分泌，到達(dá)增加膽汁流量、收縮膽囊、擴(kuò)張奧狄氏括約肌從而到達(dá)利膽排石作用的2。盧兗偉3認(rèn)為廣金錢草總黃酮除具有防治腎結(jié)石的作用外，因其有顯著的利膽作用，故對(duì)膽結(jié)石的防治作用值得

3、進(jìn)展深化研究。本研究在已有利膽研究根底上，全面討論其對(duì)膽色素結(jié)石的治療機(jī)制的研究，一方面為膽色素結(jié)石提供更多有效藥物，另一方面豐富廣金錢草藥理學(xué)研究?jī)?nèi)容，為藥材的單味藥制劑和配伍提供藥理學(xué)根據(jù)。1材料與方法廣金錢草制劑由中山大學(xué)新華學(xué)院藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供，采用水提醇浸法提取，含16.7g/l生藥。林可霉素(批號(hào)09112105。上海旭東海普藥業(yè)消費(fèi))。消溶肝膽結(jié)石片(四川旭華制藥廠消費(fèi))。豚鼠選用英國(guó)種安康短毛雌性豚鼠72只，體重(30050)g，南方醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。1.1動(dòng)物分組和藥物用量采用隨機(jī)分組法將其分成6組，空白對(duì)照組(A)、模型組(B)、廣金錢草高劑量32.4g/(100gd

4、)組()、廣金錢草中劑量16.2g/(100gd)組(D)、廣金錢草低劑量8.1g/(100gd)組(E)、消溶肝膽結(jié)石片0.125g/(100gd)組(F)。每組12只，每5只一大籠，分籠喂養(yǎng)，飼養(yǎng)的環(huán)境溫度為1525。1.2動(dòng)物膽色素結(jié)石模型制造采用Stt方法4，5，除空白對(duì)照組外，余5組分別給予豚鼠大腿根部(雙后肢交替應(yīng)用，以防皮膚壞死)皮下注射林可霉素，每日上午進(jìn)展實(shí)驗(yàn)按6g/100g體重給藥，連續(xù)7天。1.3實(shí)驗(yàn)步驟第1、2周正常飼養(yǎng)，以適應(yīng)環(huán)境。第3周造模，空白組在造模時(shí)皮下注射等量生理鹽水，其余所有組動(dòng)物注射林可霉素。第4周所有動(dòng)物休息。第5周A、B組常規(guī)飼養(yǎng)，每天灌生理鹽水1l

5、，、B、E、F組灌胃給藥。在實(shí)驗(yàn)期間，每周稱量動(dòng)物體重1次，每天記錄實(shí)驗(yàn)室溫度和濕度、動(dòng)物精神狀況、皮毛光度、活動(dòng)情況、進(jìn)食量、大小便等一般情況。每籠動(dòng)物除每日自由飲水，并喂適量青菜。每日早晚定時(shí)喂養(yǎng)，并清潔豚鼠籠、飼料盆及水壺等。1.4樣本取材第8周最后一天，灌藥300in后，把受試動(dòng)物處死前由心臟取血,送生化檢查。同時(shí)，迅速用血管鉗阻斷膽囊管，取下膽囊，肉眼觀察膽囊外形、成石情況，并用注射器吸出全部膽汁，搜集所有動(dòng)物膽石，取材后分別送驗(yàn)。每組各取5只動(dòng)物的肝和膽囊送病理檢查。1.5血清、膽汁生化和膽石分析采用L-7200全自動(dòng)生化分析儀，測(cè)量膽汁中游離膽紅素(UB)、鈣(a2+)、膽汁酸、

6、-葡萄糖醛酸酶含量及血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(AKP)、尿素氮(BUN)。膽石采用溴化鉀壓片法，測(cè)試儀器為雙光束紅外分光光度計(jì)。2結(jié)果與分析2.1動(dòng)物的一般情況第1、2周動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育正常，沒有死亡。第2周造模、第4周休息，空白組無(wú)死亡，其他各組共死亡10只。死前動(dòng)物均出現(xiàn)精神萎靡不振、腹瀉、皮毛倒豎無(wú)光澤、體重下降等病癥，存活動(dòng)物有精神欠佳、活動(dòng)減少、皮毛無(wú)光澤、體重下降，最后逐漸到根本正常。在治療期死亡2只，原因是灌胃操作不當(dāng)致死。動(dòng)物不同時(shí)期存活情況見表1。表1實(shí)驗(yàn)過程中豚鼠存活情況(只)對(duì)死亡的豚鼠進(jìn)展尸體解剖發(fā)現(xiàn)肝臟大體標(biāo)本有明顯充血水腫，膽囊內(nèi)有棕褐色膿性分泌物和少量淡

7、黃色絮狀沉淀物，并且經(jīng)化驗(yàn)絮狀沉淀主要為膽色素及膽色素鹽。鏡下可見肝細(xì)胞大量壞死，膽囊上皮有多處潰瘍，膽囊各層有大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。分析：從死亡動(dòng)物的大體解剖和病理檢查可看出，林可霉素造模對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肝臟、膽囊的形態(tài)及功能均影響較大，因此造成動(dòng)物出現(xiàn)精神、食欲和大小便改變等情況。2.2體重變化第1、第2周各組動(dòng)物體重沒有顯著差異。第4周，動(dòng)物經(jīng)過造模和休整期，各組動(dòng)物體重發(fā)生明顯變化。所有動(dòng)物造模后的體重與空白組比差異有顯著性(P0.01)。第8周，用藥組所動(dòng)物體重都增加，但高劑量組和陽(yáng)性藥與空白組比差異無(wú)顯著性(P0.05)，而低、中劑量組與空白組和陽(yáng)性藥組比差異有顯著性(P0.050.01

8、)。而模型組的動(dòng)物體重有增加，但與空白組和陽(yáng)性藥組比差異有顯著性(P0.01)。詳見表2。表2動(dòng)物體重的變化注：與空白對(duì)照組比擬，*P0.05，*P0.01;與模型組比擬，P0.05，P0.01;與陽(yáng)性對(duì)照藥比，P0.05，P0.01小結(jié)：體重變化反映藥物對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育影響情況。林可霉素造模對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育影響較大。經(jīng)藥物治療(治療藥和陽(yáng)性對(duì)照藥)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育根本到達(dá)正常狀態(tài)。說明藥物對(duì)抗林可霉素引起的影響因素有明顯的治療和改善作用。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3膽囊成石情況本次實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所生成的膽石多為棕黃色和淡黃色，大局部呈泥沙樣，成形的體積大小不等，膽囊和膽管內(nèi)均有發(fā)生。模型組和低劑量組膽囊

9、壁增厚、粗糙明顯，膽囊管壁增厚狹窄明顯，有石膽汁呈粘稠混濁、深綠色。陽(yáng)性藥和高劑量組膽囊構(gòu)造近似空白組，增厚不明顯，無(wú)石膽汁淡黃色比擬稀簿。中劑量組一局部呈現(xiàn)出高劑量組表現(xiàn)，一局部近似低劑量組，但膽汁粘度較輕。各實(shí)驗(yàn)組膽石發(fā)生情況，詳見表3。表3動(dòng)物膽石發(fā)生情況(只)注：與空白對(duì)照組比擬，*P0.05，*P0.01;與模型組比擬，P0.05，P0.01;與陽(yáng)性對(duì)照藥比，P0.05，P0.01從表2可以看出各組成石率不同，模型組最高，成石率達(dá)89%，各給藥組成石率低于模型組，其中空白組、陽(yáng)性藥組和高劑量組與模型組比差異有顯著性(P0.01)。模型組、中、低劑量與陽(yáng)性藥組比差異有顯著性(P0.05

10、0.01)。模型組、高、中、低劑量組與空白組比差異有顯著性(P0.050.01)。陽(yáng)性藥與空白組比差異無(wú)顯著性(P0.05)。分析：本方法制造豚鼠膽囊結(jié)石模型是成功的。藥物可明顯降低豚鼠膽囊結(jié)石形成率。(1)實(shí)驗(yàn)中林可霉素致動(dòng)物膽色素結(jié)石，模型組成石率達(dá)89%，與文獻(xiàn)報(bào)道根本符合6。陽(yáng)性藥和高劑量組明顯降低膽色素結(jié)石形成，說明有明顯的治療作用，兩者療效相當(dāng)。中、低劑量組結(jié)石數(shù)量有減少趨勢(shì)，說明藥物有一定改善效果。(2)膽汁的粘度和淤積對(duì)膽色素結(jié)石起到重要作用。從模型組和低劑量組膽汁與陽(yáng)性藥和高劑量組膽汁比擬，以及膽囊壁和膽囊管情況，說明前者林可霉素影響了膽囊上皮分泌吸收和膽囊平滑肌的運(yùn)動(dòng)，出現(xiàn)

11、膽汁淤積現(xiàn)象，而后者膽汁排泄通暢。2.4血液和膽汁生化指標(biāo)結(jié)果受試動(dòng)物于處死前由心臟取血，別離血清，用全自動(dòng)生化儀測(cè)定血清中ALT、AKP、BUN。膽汁中測(cè)總膽汁酸、-葡萄糖醛酸酶、鈣、游離膽紅素。詳見表4、表5。表4廣金錢草對(duì)豚鼠血液生化指標(biāo)的影響注：與空白對(duì)照組比擬，*P0.05，*P0.01;與模型組比擬，P0.05，P0.01;與陽(yáng)性對(duì)照藥比，P0.05，P0.01表5廣金錢草對(duì)豚鼠膽汁成分的影響注：與空白對(duì)照組相比，*P0.05，*P0.01;與模型組比擬，P0.05，P0.01;與陽(yáng)性對(duì)照藥比，P0.05，P0.01從表4可以看出ALT僅在模型組與空白組之間差異有顯著性(P0.05

12、)，而用藥組與空白組之間差異無(wú)顯著性(P0.05)。模型組和低劑量組AKP與空白組比差異有顯著性(P0.050.01)，而高、中劑量組和陽(yáng)性藥組與空白組比差異無(wú)顯著性(P0.05)。BUN在所有造模組與空白組之間差異無(wú)顯著性(P0.05)。分析：藥物影響豚鼠血液生化學(xué)指標(biāo)。(1)ALT升高說明林可霉素在造模時(shí)對(duì)肝臟細(xì)胞的損傷，造成肝細(xì)胞壞死。模型組ALT升高說明林可霉素對(duì)模型組肝細(xì)胞的損傷作用仍然存在，所有用藥組ALT正常說明藥物可能對(duì)有一定的修復(fù)保護(hù)作用。結(jié)果說明給藥組動(dòng)物用藥后精神狀態(tài)、活動(dòng)、對(duì)刺激的反響及進(jìn)食情況比模型組明顯好，并且體重增加比模型組明顯快，說明藥物對(duì)肝有保護(hù)作用。(2)A

13、KP降低說明經(jīng)藥物治療后膽囊急、慢性炎引起的梗阻情況在陽(yáng)性藥和高、中劑量組中有明顯改善，膽道通暢，同時(shí)在模型組和低劑量組中膽道狹窄和梗阻情況仍存在。在動(dòng)物解剖的大體標(biāo)本中也證實(shí)這一點(diǎn)。(3)BUN各組之間差異無(wú)顯著性，說明造模和用藥對(duì)動(dòng)物腎功能沒有影響。從表5結(jié)果看出UB、a2+和-葡萄糖醛酸酶在模型組、低中劑量組與空白組和陽(yáng)性藥組比差異有顯著性(P0.050.01)，膽汁酸在模型組、低劑量組與空白對(duì)照比差異無(wú)顯著性(P0.05)，與陽(yáng)性藥組比差異有顯著性(P0.01)。而高劑量和陽(yáng)性藥組與空白組比差異無(wú)顯著性(P0.05)，同時(shí)高劑量組與陽(yáng)性藥組比差異無(wú)顯著性(P0.05)。中劑量組與空白組

14、和陽(yáng)性藥比差異有顯著性(P0.05)。分析：藥物影響豚鼠膽汁成分。(1)在模型組和低劑量組中UB、a2+、-葡萄糖醛酸酶的值與空白組比明顯增高，說明膽汁中致石性成分的增高，促進(jìn)了膽石形成和加大。(2)在陽(yáng)性藥和高劑量組中UB、a2+、-葡萄糖醛酸酶的值與空白組比擬沒有增高，說明膽汁中抑石成分增高，抑制膽石形成和加大。(3)膽汁酸主要有由肝細(xì)胞分泌，它的濃度反映了肝細(xì)胞分泌功能。在陽(yáng)性藥和高、中劑量組中濃度增高說明肝細(xì)胞分泌膽汁旺盛。膽汁增加，對(duì)膽道起著沖刷作用，故藥物通過加強(qiáng)肝細(xì)胞分泌功能，起著利膽排石作用。(4)中劑量組UB、a2+、-葡萄糖醛酸酶和膽汁酸濃度有變化，不如高劑量，說明藥物與膽

15、石形成之間有量效關(guān)系。中劑量是參考人的用量設(shè)計(jì)的，說明單味藥對(duì)膽結(jié)石治療有一定效果，但是很有限。2.5病理結(jié)果A、D、E、F組膽囊無(wú)急、慢性炎癥改變，B和組有膽囊慢性炎癥改變，并伴明顯增生和狹窄。A、D、E、F組肝細(xì)胞無(wú)炎癥反響，不伴有纖維增生。B肝細(xì)胞有散發(fā)的變性改變，無(wú)增生改變。分析：藥物對(duì)慢性膽囊炎有明顯的治療作用。(1)膽囊病理證明：模型組和低劑量組膽囊上皮有潰瘍，局部上皮增生明顯，說明正常膽囊的吸收上皮壞死脫落，影響膽汁的水、鈉等無(wú)機(jī)鹽的吸收，同時(shí)增生的分泌上皮分泌大量的粘蛋白，使膽汁pH值下降，膽汁致石力增強(qiáng)，加上粘蛋白是結(jié)石形成的基質(zhì)，即粘蛋白凝膠包裹膽固醇單晶體或膽色素顆粒形成

16、沉淀物。同時(shí)大量的炎性浸潤(rùn)肌層致平滑肌收縮功能障礙，造成膽汁瘀積。炎癥刺激引起纖維組織增生，產(chǎn)生膽囊管狹窄，這些最終導(dǎo)致膽色素結(jié)石形成。(2)相反陽(yáng)性藥和高劑量組膽囊上皮、肌層及纖維結(jié)締組織的變化不明顯，近似空白組，所以這些組動(dòng)物根本沒有出現(xiàn)泥沙樣結(jié)石，或結(jié)石不明顯。通過以上實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了以往研究廣金錢草有利膽和對(duì)膽囊炎的治療作用外，還進(jìn)一步證實(shí)了它對(duì)膽色素性結(jié)石的治療作用。3討論3.1膽色素性結(jié)石形成的機(jī)制(1)人類膽石按其主要組成成分可分為膽固醇性、膽色素性及混合性，以混合性為多。膽固醇性結(jié)石又稱為“代謝性結(jié)石，它的發(fā)病與高膽固醇血癥有親密關(guān)系。膽色素性結(jié)石又叫“感染性結(jié)石，它的發(fā)病與膽

17、道感染、炎癥有關(guān)。目前有關(guān)膽色素性結(jié)石的形成原因尚不非常清楚?，F(xiàn)有aki學(xué)說和膽紅素鈣溶解-沉淀平衡失調(diào)學(xué)說7，都認(rèn)為UB、a2+、-葡萄糖醛酸酶和膽汁酸對(duì)膽色素性結(jié)石發(fā)生起重要作用。-葡萄糖醛酸酶在感染時(shí)可水解成為非結(jié)合膽紅素和葡萄糖醛酸。UB與鈣離子結(jié)合而析出膽紅素鈣沉淀。另外，感染的膽汁中的硫酸糖蛋白，把分散的膽紅素鈣沉淀微粒積集在一起，固化成結(jié)石。同時(shí)感染、膽道梗阻可使酶活性增強(qiáng)。膽紅素鈣溶解-沉淀平衡失調(diào)學(xué)說認(rèn)為：膽紅素鈣在膽汁中的沉淀和溶解處于動(dòng)態(tài)平衡中，受多種因素影響。(1)膽汁酸鹽，它能與鈣結(jié)合形成膽汁酸鈣而使膽汁中的鈣降低，同時(shí)膽汁酸鹽對(duì)未結(jié)合膽紅素有助溶作用，所以能防止或減

18、少膽紅素鈣沉淀的生成。(2)糖蛋白，它是膽石形成的基質(zhì)。另外，膽固醇、磷脂、葡萄糖醛酸對(duì)膽紅素鈣沉淀-溶解平衡有影響。影響膽色素結(jié)石形成的因素還有致石核心：50%70%膽色素結(jié)石都有核心，主要是蟲殘?bào)w、細(xì)菌、脫落的上皮細(xì)胞等。3.2林可霉素致動(dòng)物膽色素結(jié)石的主要機(jī)制林可霉素致動(dòng)物膽色素結(jié)石的主要機(jī)制是早期誘發(fā)肝細(xì)胞和膽囊上皮壞死，造成肝細(xì)胞分泌“致石性病理膽汁，之后，合并感染和異物刺激等因素，引起膽囊上皮炎造成膽囊吸收分泌異常，加重了“致石性病理膽汁的成石性，同時(shí)膽囊運(yùn)動(dòng)功能失調(diào)，膽汁排泄不暢和瘀積，造成“致石性病理膽汁在膽囊中儲(chǔ)藏，加上壞死脫落的膽囊上皮、細(xì)菌和寄生蟲殘?bào)w形成膽色素結(jié)石的核心

19、，進(jìn)一步開展成為膽色素結(jié)石7。3.3膽囊炎與膽石癥膽囊炎和膽石癥二者可互為因果，互相影響。膽囊的炎癥尤其是慢性膽囊炎必然影響膽囊壁的功能。膽囊炎時(shí)膽汁成分、代謝都受到影響，這些改變均成為形成膽石的基矗有人報(bào)道膽囊炎合并膽石者高達(dá)85%90%，膽囊炎為結(jié)石形成創(chuàng)造了條件6。aki學(xué)說和膽紅素鈣溶解-沉淀平衡失調(diào)學(xué)說8，強(qiáng)調(diào)感染是膽色素結(jié)石形成重要因素。膽色素結(jié)石的發(fā)病與膽道感染及膽汁淤積有明顯關(guān)系。感染是生石的“首要因素，淤積是生石的“必要條件。沒有淤積，即使有感染也不易形成結(jié)石6。3.4廣金錢草對(duì)膽色素結(jié)石的作用機(jī)制918已有廣金錢草藥理研究都證實(shí)：(1)抗菌和抗炎;(2)利膽;(3)尿石的溶

20、防作用;(4)利尿;(5)對(duì)心血管系統(tǒng)的影響;(6)鎮(zhèn)痛;(7)其他。常壓小鼠耐缺氧，廣金錢草尚有益智作用等。本實(shí)驗(yàn)通過大體解剖、病理以及血和膽汁生化檢查，也進(jìn)一步證明廣金錢草抗炎作用，尤其是對(duì)慢性炎癥。通過抗炎保護(hù)了膽囊上皮，防止水腫和分泌大量粘蛋白，維護(hù)正常組織構(gòu)造;同時(shí)降低膽汁粘度、DBIL、a2+和-葡萄糖醛酸酶濃度降低，防止膽色素結(jié)石核心形成和結(jié)石的增大?？寡谆謴?fù)了膽囊的動(dòng)力學(xué)環(huán)境，有消除膽汁淤滯的作用，故有一定的排石作用。另一方面，保護(hù)肝細(xì)胞功能，促進(jìn)肝細(xì)胞分泌膽汁酸，膽汁酸增加使游離膽紅素的溶解度增加及鈣離子沉積減少，阻止結(jié)石的產(chǎn)生。同時(shí)，肝臟分泌的增加有利膽作用。故廣金錢草通過

21、以上幾方面到達(dá)治療膽色素結(jié)石。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步證實(shí)了以往對(duì)廣金錢草的利膽和膽囊炎的治療作用外，還進(jìn)一步證實(shí)了它對(duì)膽色素性結(jié)石的治療作用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1金淑琴.金錢草、廣金錢草、連錢草的考證及臨床應(yīng)用.首都醫(yī)藥，2001，8(8)：54.2劉敬軍，鄭長(zhǎng)青.廣金錢草、木香對(duì)膽囊運(yùn)動(dòng)及血漿K含量影響的實(shí)驗(yàn)研究.四川中醫(yī)，2022，4(26)：31-32.3盧兗偉.廣金錢草及土大黃有效成分研究與應(yīng)用.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院根底醫(yī)學(xué)，2022.4NlisellK.Bileaidplsizeandgallbladdedstragea-paityingallstnedisease.SandJLipidRes,1993,34(4):680-687.5YasukaaK.Studiesnthenstituentsintheaterextratsr