本科生-農(nóng)藥生物測定

1、農(nóng)藥生物測定劉井蘭揚(yáng)州大學(xué)園藝與植物保護(hù)學(xué)院緒 論一、生物測定(biological assay，bioassay)概念通常是指具有生理活性的物質(zhì)對某種生物產(chǎn)生效應(yīng)的一項(xiàng)技術(shù)。Finney(1952)：指對生物的任何刺激產(chǎn)生效應(yīng)的測定。包括來自物理、化學(xué)、生物、生理、心理等方面的刺激對生物活體產(chǎn)生的反應(yīng)。研究作用物、靶標(biāo)生物和反應(yīng)強(qiáng)度三者關(guān)系的一項(xiàng)專門技術(shù)。二、農(nóng)藥生物測定技術(shù) 是利用有害生物(或靶標(biāo)生物)對農(nóng)藥的反應(yīng)來鑒別某種化合物生物活性的基本方法。 靶標(biāo)生物為了保證測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，供試生物要有足夠的數(shù)量與質(zhì)量。人工飼養(yǎng)，通過對飼養(yǎng)條件的定向控制使靶標(biāo)生物在生理狀態(tài)、齡期大小，健康狀況以

2、及敏感性等方面達(dá)到一致性。因此，飼養(yǎng)靶標(biāo)生物也是生物測定技術(shù)的一項(xiàng)重要內(nèi)容。三、農(nóng)藥生物測定的意義與應(yīng)用1、測定農(nóng)藥對昆蟲、螨類、病原菌、線蟲、雜草及鼠類等靶標(biāo)生物的毒力與藥效。2、篩選農(nóng)藥新品種，篩選是農(nóng)藥檢測技術(shù)的初步工作，而毒力測定是做進(jìn)一步精確鑒定。3、研究化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與生物活性關(guān)系的規(guī)律，為創(chuàng)造新農(nóng)藥提供依據(jù)。4、研究農(nóng)藥的理化性質(zhì)及加工劑型與毒效關(guān)系，提高農(nóng)藥的使用效果。5、測定不同農(nóng)藥混合使用的效力及尋找增效劑，為農(nóng)藥合理混用提供依據(jù)。6、對有害生物抗藥性的監(jiān)測和研究克服或延緩抗藥性發(fā)展的有效措施。7、利用敏感生物來測定農(nóng)藥的有效含量及殘留量。第一章 生物測定技術(shù)的原理和原則

3、 一、基本原理殺蟲劑生物測定的基本原理是研究殺蟲劑與生物的相關(guān)性，利用昆蟲、螨類、溫血動物等對藥劑的反應(yīng)來鑒別殺蟲劑的毒力與藥效。二、農(nóng)藥生物測定的原則1控制影響因素(條件控制)在毒力測定中，要求只有兩個變數(shù)，一個是殺蟲劑的劑量（或濃度）作為自變數(shù)，另一個是死亡率作為應(yīng)變數(shù)（依變數(shù)），而其他因素應(yīng)盡可能保持一致，使影響因素力求穩(wěn)定，否則，我們所測得的死亡率（Y）不只是由殺蟲劑劑量（濃度）的改變而引起，還會因昆蟲的大小齡期性別發(fā)育階段或環(huán)境條件以及處理方法等的不一致，使得測得劑量死亡率的關(guān)系不是直線回歸式，而變成復(fù)雜的偏回歸式，顯然，這樣做是不合適的，而且造成了分析上困難，得到的結(jié)果不可靠。環(huán)境

4、條件、靶標(biāo)生物、藥劑環(huán)境條件溫度：主果影響試蟲的活動性，代謝率，體內(nèi)生理生化的變化，以及對殺蟲劑的穿透性，轉(zhuǎn)化率。也影響微生物與植物的生長和藥劑進(jìn)入植物組織的速率。濕度：影響試蟲的成活、植物對藥劑的吸收等光照：影響植物的光合作用、生理狀態(tài)與生長勢等，也影響一些真菌孢子的形成與萌發(fā)。生物材料的一致，如昆蟲的性別、發(fā)育階段、營養(yǎng)，如試蟲是成蟲，應(yīng)雌雄一致，最好是雌成蟲；幼蟲或若蟲，應(yīng)為同一齡期，體重大小一致，成蟲的日齡也要一致；室內(nèi)飼養(yǎng)的試蟲，才能達(dá)到營養(yǎng)條件一致，野外采集的，也應(yīng)在室內(nèi)飼養(yǎng)一段時間后再用于試驗(yàn)；藥劑處理的部位盡可能一致點(diǎn)滴部位愈靠近昆蟲的中樞神經(jīng)系統(tǒng)（頭、腹神經(jīng)索）昆蟲愈易中毒

5、。植物上莖葉處理要避免根系受到藥劑的作用。藥劑：一般要求純度在95%以上，至少是含量較高原藥、原粉 作為毒力測定用的殺蟲藥劑最好是化學(xué)純的化合物，不是制劑，不是工業(yè)制品，不是加有其他輔助劑的成品，因?yàn)槿魏坞s質(zhì)的存在都會影響到毒性，增效或減效 溶劑不同溶劑對昆蟲表皮的穿透率不同，單位時間內(nèi)滲入蟲體內(nèi)的蟲量也不同，在體內(nèi)的代謝速率也不同，最后到達(dá)靶標(biāo)部位的藥量也不同，測得結(jié)果就有明顯差異。因此，配制藥液的溶劑一致，一般以丙酮為宜。 2、必須設(shè)立對照目標(biāo)昆蟲在試驗(yàn)期間由于個體生活力弱，天敵寄生感病等原因，往往有自然死亡情況，因此，藥劑處理組的死亡蟲數(shù)也包括自然死亡數(shù)，故應(yīng)設(shè)立對照加以校正，以消除自然

6、因素所造成的死亡對藥劑效果的干擾?？瞻讓φ眨翰蛔魅魏翁幚淼娜軇┨幚韺φ眨号c藥劑處理所用溶劑、乳化劑都一樣，只是不含藥劑，這種對照是為了消除非有效成分對供試生物的影響：如丙酮配制的藥液進(jìn)行點(diǎn)滴試驗(yàn)，那么對照組也就應(yīng)點(diǎn)滴丙酮。標(biāo)準(zhǔn)藥劑對照：在生產(chǎn)中對某種目標(biāo)昆蟲常用的有效藥劑，不僅可以同新農(nóng)藥對比，還可以消除一些偶然因素的影響所造成的誤差。上述三種對照可以根據(jù)具體情況和試驗(yàn)要求來設(shè)立，一般至少設(shè)兩種對照。 3、必須設(shè)重復(fù)一般重復(fù)3-4次。4、運(yùn)用生物統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)結(jié)果第二章 目標(biāo)昆蟲的飼養(yǎng)第一節(jié)：對標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)昆蟲的要求一、標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)昆蟲概念被普遍采用的，具有一定代表性和經(jīng)濟(jì)意義以及抗藥力穩(wěn)定均勻的農(nóng)藥殺

7、蟲毒力和毒效指示試蟲群體。 二、標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)昆蟲的要求 1易飼養(yǎng)，繁殖力強(qiáng)。不互相殘殺，不受季節(jié)和寄主限制，能保證周年充分供應(yīng)。2具有一定的代表性和經(jīng)濟(jì)意義。如代表重要農(nóng)業(yè)害蟲的目、科或不同的取食特性和敏感性，或是在分類上和使用價(jià)值上有一定意義。3. 群體的生活力和抗藥力要穩(wěn)定和均勻一致。篩選新農(nóng)藥時，應(yīng)選擇抗藥力和生活力較強(qiáng)、自然死亡率低的試蟲群體，才不致影響篩選結(jié)果。測定農(nóng)藥殘留量時，最好選用敏感的群體，才容易得出試驗(yàn)結(jié)果。4.選用合適的蟲期、齡期、年齡的試蟲群體或混合群體供作測試對象。選用原則是試蟲群體間的蟲期比例、蟲齡、年齡用蟲體大小比較接近一致，蟲齡不宜過大或過小，新羽化的或年齡過大的試

8、蟲群體不宜采用。供試的昆蟲種類，除了農(nóng)作物害蟲外，害蟲、衛(wèi)生害蟲以及其它繁殖力強(qiáng)、易于飼養(yǎng)的昆蟲或動物均可采用。如粘蟲、家蠅、擬谷盜、米象、蜚蠊、蚜蟲等。5.便于進(jìn)行移取處理。三、人工飼養(yǎng)類型完全飼養(yǎng)：昆蟲的整個生活史都是在人為控制條件下完成的。如完全變態(tài)的昆蟲，從卵幼蟲蛹成蟲。不完全飼養(yǎng)：昆蟲的部分生活史是在人為控制條件下完成的。這一飼養(yǎng)主要是觀察昆蟲某一個發(fā)育階段的生物學(xué)特性，或?yàn)榕R時性的試驗(yàn)需要提供蟲源。如蝗蟲（漸變態(tài)昆蟲）的若蟲成蟲，飼養(yǎng)可以在室外，也可以在室內(nèi)。1、要有適合昆蟲取食和棲息的形狀和質(zhì)地；2、要有刺激取食和助長取食的因子；3、要消除抑食因子；4、有必要的營養(yǎng)成分和適當(dāng)?shù)臓I

9、養(yǎng)比例；5、有良好的防腐效果。第二節(jié)昆蟲人工飼料的類別和成分一、人工飼料的理論二、昆蟲人工飼養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)1、不受季節(jié)的影響。2、不受寄主和土地的限制。3、能減少或避免微生物感染及農(nóng)藥等因子的干擾。4、易獲得生理標(biāo)準(zhǔn)一致的試驗(yàn)用蟲。5、能控制飼料的組成，研究昆蟲的取食和發(fā)育。三、人工飼料的類別人工飼料是與天然食料或天然飼料相對的一種通稱，從廣義上來說，凡是經(jīng)過加工配制的任何飼料都稱為人工飼料，以飼料的純度為基準(zhǔn)，將昆蟲的人工飼料分為三大類型。1、全純飼料化學(xué)規(guī)定飼料、規(guī)定飼料 由已知化學(xué)結(jié)構(gòu)的純物質(zhì)組成的飼料，稱化學(xué)規(guī)定飼料。由大多數(shù)純化學(xué)物質(zhì)加上一種或數(shù)種未知結(jié)構(gòu)，但已知純度的精制產(chǎn)品（如經(jīng)提純的干

10、酪素、植物油、淀粉等）組成的飼料，稱為規(guī)定飼料。 2、半純飼料多數(shù)成分為純化合物，另含一種或幾種粗制的動植物材料（如肝臟、葉子粉、酵母以及它們的粗提物等）3、實(shí)用飼料這類飼料主要由未經(jīng)提純的天然營養(yǎng)物質(zhì)組成，這些天然物質(zhì)能提供昆蟲所需要的全部或大部分營養(yǎng)成分，但是也含有一些昆蟲不能利用的或?qū)ハx取食或生長發(fā)育有害的物質(zhì)。四、人工飼料中常用的天然營養(yǎng)物質(zhì) 1、酵母用得最早，最廣泛的天然物質(zhì)，常用啤酒和面包酵母，營養(yǎng)成分大致相同，其中蛋白質(zhì)和核酸的含量50%；糖類37%40%；脂類23%灰分7%左右，水溶性維生素可達(dá)0.5%。 2、麥胚麥胚含有昆蟲所需要的各種營養(yǎng)成分，如蛋白質(zhì)、糖、脂肪酸、磷酰脂

11、類、生育酚、胡蘿卜素和維生素和20余種無機(jī)鹽，其中以不飽和脂肪酸為主的脂類含量可高達(dá)10%左右。 未發(fā)現(xiàn)麥胚中抑制昆蟲取食的有毒物質(zhì)。3、大豆豐富的蛋白質(zhì)（4050%）脂肪酸（可高達(dá)20%）還有些昆蟲必需的固醇、生育酚和各種維生素營養(yǎng)成分。 含有一些對昆蟲的取食和生長發(fā)育有害的物質(zhì)。一、種蟲1、在引選種蟲時必須進(jìn)行嚴(yán)格挑選，選取生活力、繁殖力、抗病力較強(qiáng)的品系進(jìn)行雜交產(chǎn)生優(yōu)良后代；2、繁育過程中逐代逐一蟲期嚴(yán)格挑選具有代表性和生活力強(qiáng)的試蟲留作種蟲；3、需要換種。有時選留少數(shù)蟲種進(jìn)行繁育，其后代常有退化，如試蟲的繁殖力和適應(yīng)環(huán)境的能力顯著下降，或試蟲群體抗藥力不穩(wěn)定或試蟲退化等，則必須換種。第

12、三節(jié)標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)昆蟲室內(nèi)大規(guī)模飼養(yǎng)的定向控制二、營養(yǎng)條件營養(yǎng)條件是試蟲生活中必需的基本條件。營養(yǎng)條件的好壞對試蟲的生長發(fā)育、大量繁育、生活力、群體質(zhì)量均勻性和抗藥力穩(wěn)定等都有很大的影響。1、蛋白質(zhì)和氨基酸（1）作用功能構(gòu)成昆蟲蟲體的主要物質(zhì)；促進(jìn)昆蟲生長發(fā)育，提高生殖力，生活力。從本質(zhì)上講：昆蟲對蛋白質(zhì)的需要就是對氨基酸的需要。 （2）必需氨基酸與非必需氨基酸非必需氨基酸昆蟲在體內(nèi)代謝過程中，這些氨基酸可以依靠其他物質(zhì)來制造，當(dāng)食物和飼料中，缺乏這種氨基酸時，昆蟲的生長發(fā)育還不會停止。必需氨基酸不能在昆蟲體內(nèi)制造的，必須由食物來提供的氨基酸。（10種）精氨酸，組氨酸，賴氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，甲硫

13、氨酸，蘇氨酸，纈氨酸，苯丙氨酸，色氨酸。2、糖類，又稱碳水化合物功能：生物體內(nèi)能量的主要來源；也作用于脂類和非必需氨基酸的合成；對昆蟲的取食行為有重要的影響。對于植食性昆蟲，糖類是重要的取食刺激物質(zhì)，特別是蔗糖的刺激作用最顯著最廣泛，其次是果糖和麥芽糖。在大多數(shù)情況下，在人工飼料配方的設(shè)計(jì)中，用蔗糖或輔以另一種糖就能獲得較好的效果。 人工飼料中常用的糖類的種類有：蔗糖、葡萄糖、麥芽糖、淀粉。3、脂肪酸和固醇 功能：是構(gòu)成蟲體脂肪的主要成分；代謝水的來源；建立合成貯存脂肪體與肝糖或組成卵黃。例如：鱗翅目中多數(shù)蛾類都需要亞油酸或亞麻酸。少這類不飽和脂肪酸，蛹發(fā)育不好，成蟲的羽化和展翅都受到影響。直

14、、鞘翅目中的很多種類也需要這類不飽和脂肪酸。除了化學(xué)規(guī)定飼料或用于研究脂肪酸定性、定量需要的規(guī)定飼料，要使用純的不飽和脂肪酸外，一般飼料中都用植物油、玉米油、大豆油作為脂肪酸的來源。4、維生素分為水溶性和脂溶性兩大類：水溶性維生素：昆蟲體內(nèi)輔酶的組成部分；與酶一起參與機(jī)體的代謝過程，對昆蟲的生長發(fā)育有重要的意義。5、無機(jī)鹽昆蟲的血淋巴和各部分組織中都含有很多無機(jī)物，這些無機(jī)物質(zhì)在昆蟲的生理活動構(gòu)成上起重要的作用。而所有的無機(jī)物質(zhì)都是通過食物獲得的。因此，人工飼料中必須含有無機(jī)物。不同種類和不同食性的昆蟲對無機(jī)物的需要有一定的差異。 總體上，多數(shù)昆蟲都必需K、P、Mg三種元素，其次是不同程度地需

15、要Ca、Fe、Zn、Na、Mn、Cu等這些元素。植食性昆蟲血淋巴中K的含量高于Na，而肉食性昆蟲血淋巴中Na的含量高于K，因而用于植食性昆蟲的無機(jī)鹽類中的K的含量都比Na高。 飼料中使用最早的韋氏鹽，韋氏鹽中的NaF對昆蟲有害，所以有些飼料中刪除了這一成分。三、飼養(yǎng)中的環(huán)境條件 1、溫度：最適溫度是2025 溫度過低，昆蟲死亡；溫度過高，對很多成蟲的繁殖力有不利的影響，對飼養(yǎng)質(zhì)量也受到影響。蟲架上裝日光燈時，不要使飼養(yǎng)容器靠近日光燈，否則會使溫度上升。最適宜的晝夜變溫環(huán)境（白天溫度高，夜晚溫度低）對昆蟲比恒溫環(huán)境中飼育的更優(yōu)越而穩(wěn)定。提高飼養(yǎng)溫度方法：陽光、電燈、電爐、火爐降溫：空調(diào)、冰塊2、

16、濕度各種昆蟲對濕度的要求差異很大。飼養(yǎng)過程中保持70%左右的濕度是適宜的，過高的濕度會滋生霉菌，對電器裝置也會造成影響，濕度過低，卵不易孵化。增加濕度：噴霧、灑水、放置水盆降低濕度：加強(qiáng)通風(fēng)，減少水汽3、光照 主要是光周期的影響。 光周期主要影響農(nóng)業(yè)昆蟲的滯育，飼養(yǎng)中要很好地控制光照的時間。 四、飼養(yǎng)目標(biāo)昆蟲的一般技術(shù)飼養(yǎng)技術(shù)的環(huán)節(jié)很多，主要包括2個方面， 對昆蟲各個蟲態(tài)的處理如蟲卵消毒、接種、移蟲、收集蟲蛹；對飼料和飼養(yǎng)環(huán)境的處理，如更換飼料，提供化蛹和產(chǎn)卵的場所條件等等。具體步驟：一般飼養(yǎng)要1代以上。按照通常的步驟，為防止避免寄生和感染，飼養(yǎng)通常從卵開始，因?yàn)閷β严颈绕渌A段消毒方便，容

17、易。1、卵的處理 常用的殺菌劑：12%次氯酸鈉；12%過氧化氫；0.1%氯化汞；10%甲醛；福爾馬林；酒精；懷特溶液12%次氯酸鈉：是一種溫和的表面消毒劑，多用于雙翅目蟲卵的消毒，也常與其他殺菌劑配合廣泛用于各類蟲卵的消毒。0.1%氯化汞：殺菌力強(qiáng)，滲透力也強(qiáng)。易殺傷蟲卵，處理時間不宜過長。注意：對一些帶有絨毛的卵塊，連續(xù)使用殺菌劑消毒的效果， 比只用一種殺菌劑消毒要好的多。例：三化螟卵塊用10%的甲醛，2%次氯酸鈉，0.1%氯化汞各浸5分鐘能取得較好的效果。玉米螟卵在2%的次氯酸鈉2%甲醛液中浸10分鐘效果也較好。注意事項(xiàng)：有效的消毒劑；適宜的濃度；適宜的消毒時間；最適宜的消毒的發(fā)育期。消毒

18、時間：根據(jù)卵的大小來確定，一般25，浸漬數(shù)分鐘即可，最適宜的蟲卵消毒時間是卵孵化424h。如鱗翅目昆蟲一般選擇黑頭期，即孵化前半天或1天。過早地消毒不僅影響孵化率，而且對幼蟲的存活和生長都有不利的影響。溫、濕度卵在適宜的溫、濕度條件下才能正常發(fā)育，在高濕季節(jié)或干燥環(huán)境中培育的蟲卵一定要保濕，否則會使蟲卵干死，多數(shù)昆蟲的卵在70%的相對濕度下能正常發(fā)育，一般在容器中用浸水的棉花球；不過，容器加蓋時要適當(dāng)透氣，防止?jié)穸冗^大，引起卵表面或所依附的底物發(fā)霉。卵消毒后漂洗數(shù)次（滅菌蒸餾水）滅菌濾紙吸干低溫處理：在大量飼養(yǎng)中，卵期是保藏昆蟲最好的時期，適當(dāng)貯存某些昆蟲的卵，可以調(diào)節(jié)所需要的蟲口數(shù)量，一般貯

19、藏溫度為05，大部分在05冰箱中保存數(shù)月到1年，但也有一些不能貯存時間太長，如三化螟的卵塊在10保存一星期，孵化率和幼蟲存活率下降。2、接種地點(diǎn)：在無菌室（接種箱中）進(jìn)行。接種前注意飼料的物理性狀，飼料表面的濕、粘度不宜過大，劃過溝槽或打過洞穴的飼料，要防止這些小環(huán)境中積水，否則會淹死剛孵化的小幼蟲，容器壁上有水對小幼蟲的活動不利，有時也會造成死亡。例如：不少鱗翅目昆蟲的卵在水中或過濕的條件下不能孵化，通常不加這類昆蟲的蟲卵直接放在飼料上，而置于容器壁上，或先在飼料表面襯一塊滅菌紙，將蟲卵或卵塊放在紙上；如將蟲卵直接放在飼料上，必須先用滅菌紙將飼料表面的水分吸干。3、幼蟲飼養(yǎng) 幼蟲多采用集體飼

20、養(yǎng)。飼料供給：可一次性供給，也可添加或更換飼料，如所飼養(yǎng)昆蟲的生活周期很短（如在一周內(nèi)），可以不換飼料，如果飼養(yǎng)昆蟲的生活周期較長的，必須更換新的飼料。注意：飼養(yǎng)期除必要的觀察外，盡量少驚動。昆蟲正在脫皮時，易造成昆蟲的死亡，換飼料時可利用昆蟲的習(xí)性使其聚集。 如鱗翅目低齡幼蟲的趨光性，將它們集中到容器口邊，利用家蠅等幼蟲的避光性，使它們趨向容器底部。對有殘殺行為和單棲習(xí)性的幼蟲，通常采用單個飼養(yǎng)，不過多數(shù)情況下低齡幼蟲能群聚取食，極少數(shù)殘殺或排斥。因此，可集體飼養(yǎng)到三齡若蟲再分開單個飼養(yǎng)。4、化蛹化蛹：全變態(tài)的昆蟲都有化蛹階段，為了使昆蟲順利化蛹，需要提供適宜的化蛹條件和場所。化蛹場所：在飼

21、料表面化蛹；在容器蓋下或壁上化蛹；在飼料中化蛹；由于條件不適宜不化蛹。缺點(diǎn)：在飼料中化蛹時，不利于本身的羽化，也不利于控制其交配和產(chǎn)卵。所以一般化蛹前將老熟幼蟲或預(yù)蛹收集起來，轉(zhuǎn)移至化蛹的容器中，蛾科一些種類也在飼料中化蛹這些蛹個體大，容易揀出，但一般還是先將老熟幼蟲或預(yù)蛹從飼料中取出，放至襯有皺紋紙或處理過的泥土中使其化蛹。有些種類化蛹需要提供特殊的場所，如三化螟老熟幼體要裝入模擬水稻莖的蠟紙管，咬成羽化孔時才化蛹。5、成蟲交配和產(chǎn)卵成蟲羽化前，要將蛹按一定的性比和數(shù)量效到產(chǎn)卵籠中，進(jìn)行羽化和交配，多數(shù)鱗翅目昆蟲羽化時，以90%的相對濕度為好，成蟲羽化時，應(yīng)根據(jù)它們在自然界中的習(xí)性控制光照，

22、植食笥的蛾類要在黑暗或微弱光照條件下羽化。多數(shù)種類的成蟲，羽化后不久即進(jìn)行交配，交配和影響交配的因素很多，除了昆蟲本身間的性信息素的作用外，還受外界溫、濕氣壓、氣流及寄主植物等因子的影響。在通常情況下，經(jīng)交配的雌蟲都能順利的產(chǎn)卵，如卷葉蛾科、蛾科中的很多種類以及螟蛾科中的三化螟，玉米螟等，都能在蠟紙、濾紙或布條等片狀物體上產(chǎn)卵。 飼養(yǎng)衛(wèi)生：飼養(yǎng)環(huán)境過濕，空氣污濁，不注意清潔和消毒，常常會引起霉菌的發(fā)生，造成昆蟲生病而死亡，所以飼養(yǎng)中要認(rèn)真保持衛(wèi)生，并經(jīng)常做好各種設(shè)備的消毒工作。飼養(yǎng)容器的小環(huán)境衛(wèi)生也很重要，對需要常添換飼料的種類，注意清除糞便，死蟲和變質(zhì)的飼料，每隔一定時間要更換干凈的飼養(yǎng)容器

23、，如容器中發(fā)現(xiàn)病原體感染，應(yīng)立即連同容器一起處理，對飼養(yǎng)環(huán)境也要嚴(yán)格消毒，通常只是將分別成蟲或生病的蟲體移開是沒有用的。褐飛虱全純?nèi)斯わ暳系膭?chuàng)制及氨基酸營養(yǎng)研究主要研究內(nèi)容包括：1、研制出優(yōu)化的褐飛虱全純?nèi)斯わ暳?，解決了國際上長期未能突破的專食性昆蟲褐飛虱全純?nèi)斯わ暳系碾y題。2、建立了全套褐飛虱全純飼料繼代飼養(yǎng)技術(shù)，首次實(shí)現(xiàn)連續(xù)6個世代的飼養(yǎng)，并形成了規(guī)范的褐飛虱全純?nèi)斯わ暳仙鷾y技術(shù)體系。3、首次闡明了褐飛虱對氨基酸的基本需求及其機(jī)制，明確8種氨基酸為褐飛虱生長發(fā)育的必需，揭示體內(nèi)共生酵母菌是形成褐飛虱氨基酸需求特征的重要原因，并與蟲體的補(bǔ)償能力相一致。4、首次明確致害性不同的褐飛虱種群(生物

24、型)對不同氨基酸種類、氨基酸總量與配比的需求均存在明顯的分化，揭示了氨基酸在水稻抗蟲性中的重要作用，是脅迫褐飛虱致害特性變異的有效選擇。第四節(jié) 目標(biāo)昆蟲的基本操作方法一、目的 通過混勻移取、分離和處理，使試蟲群體質(zhì)量均勻一致，盡可能減少試驗(yàn)結(jié)果的差異。二、移取試蟲的方法一般移取法：對于活動強(qiáng)度不大或具有假死習(xí)性的試蟲。體型小，軟體或易碰傷的幼蟲，如蚜蟲、紅蜘蛛。趨光法：利用昆蟲的趨光特性來移取試蟲。缺點(diǎn)：均勻性差，先移出的試蟲多為生活力強(qiáng)的個體，同時易造成蟲體損失或飛逃。麻醉法：對于飛翔或活動強(qiáng)度大的試蟲，移取有困難，用物理、化學(xué)方法麻醉處理。吸蟲法：活動強(qiáng)度不大，微少的或易受機(jī)械傷害的目標(biāo)昆

25、蟲，用真空或喉管空氣注射吸蟲法。飛虱、蚜蟲。自行遷移移蟲法：利用試蟲的自行遷移生活特性達(dá)到混勻移蟲的目的。第三章 殺蟲劑毒力測定技術(shù) 第一節(jié) 基本知識一、毒力測定與田間防治試驗(yàn)（一）區(qū)別1、目的：毒力測定是衡量殺蟲藥劑對某種昆蟲的毒性程度，而田間防治試驗(yàn)是考慮該殺蟲藥劑在實(shí)際田間施用中對某種昆蟲的防治效果的。2、要求：毒力測定要求在室內(nèi)進(jìn)行，控制環(huán)境條件（溫、濕度、光照、營養(yǎng)等），并且還用生理狀態(tài)（性別、年齡、發(fā)育階段等）一致的昆蟲。（二）聯(lián)系 一般來講，毒性程度越高，防治效果越好，但也有這種情況存在，即某一種殺蟲藥劑對某一昆蟲在毒力測定中，毒性很高，而在實(shí)際田間防治中效果并不好，主要的原因是

26、環(huán)境因素引起了改變。二、毒性與毒效 毒性指某一種殺蟲藥劑對某種害蟲所具有的內(nèi)在致死能力。毒力毒性的一種數(shù)量表示，也即毒性程度。毒效該殺蟲藥劑的毒性在一定環(huán)境條件下所表現(xiàn)的殺死效果，是藥劑本身和多種因素綜合作用的結(jié)果。三、毒力或毒性程度的表示法 生物學(xué)中刺激與反應(yīng)的關(guān)系有兩種表現(xiàn)方式1、漸進(jìn)關(guān)系刺激增大，反應(yīng)也就相應(yīng)增大一些。2、限閾關(guān)系刺激有一個閾值，在這閾值下的刺激不引起反應(yīng)，而在這閾值上的刺激，不論多大，都引起同樣的反應(yīng)，這一種方式也就是全或無的方式。致死中量LD50：正好殺死這一群昆蟲中的一半個體的藥量量。 最高致死量：正好殺死這群昆蟲的全部個體的最低的藥量。最低致死量：正好不能殺死這一

27、群昆蟲的全部個體的最高藥。LD99LD30LD10四、殺蟲藥劑的毒力測定的基本數(shù)據(jù) 自變數(shù)x，依變數(shù)y第二節(jié) 初篩試驗(yàn)一、概念 又叫過篩試驗(yàn)（screen test），或初步綜合殺蟲毒力試驗(yàn)，是一種比較粗放的初步試驗(yàn)，目的是確定一種新殺蟲劑（新化合物）對某一目標(biāo)昆蟲有否有毒，以便決定是否有必要進(jìn)一步作毒殺作用方式或精密毒力測定，它不能判斷殺蟲劑的毒力大小，也不能區(qū)別其毒殺作用方式，對篩選新農(nóng)藥更為重要。 二、原理 將較高濃度或劑量的未知新農(nóng)藥，或已知的藥劑品種劑型，大量而均勻地直接噴撒于目標(biāo)昆蟲及食料上。然后將目標(biāo)昆蟲置于恒定的溫度（25）、濕度（6070%）條件下及通氣良好的恢復(fù)室內(nèi)，作用一

28、定時間(24h)，以充分發(fā)揮供試藥劑的綜合毒力觸殺、胃毒、熏蒸、忌避等。處理設(shè)計(jì)：液劑濃度為0.1%，粉劑為1%，復(fù)篩試驗(yàn)時或毒力比較時，藥劑的純度在95%以上，最好是原藥，可設(shè)5個濃度造成死亡率在20%80%范圍內(nèi)為宜。初篩試驗(yàn)一般每個處理2040頭或更少，重復(fù)一次，就可獲得正確的可靠的結(jié)果，每次試驗(yàn)仍需設(shè)立空白對照和溶劑對照（或標(biāo)準(zhǔn)藥劑對照）。若空白對照的自然死亡率20%重新選蟲做,表明蟲體的生活力太弱。 在試驗(yàn)期間應(yīng)注意觀察試蟲的中毒死亡征象。 死亡、中毒、擊倒、復(fù)活及取食情況，并保證水分及食料的供應(yīng)，以免試蟲因食料不足而引起自相殘殺或自然死亡，或植株萎蔫以及試蟲逃離植株（蚜蟲、紅蜘蛛）

29、等現(xiàn)象。三、要求目標(biāo)昆蟲：人工飼養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)昆蟲或田間發(fā)生一致的昆蟲。環(huán)境條件：溫度25；濕度（一般農(nóng)業(yè)昆蟲為6080%）；處理設(shè)計(jì)：按上面的四、初篩實(shí)驗(yàn)的方法1、噴霧法：用定量的藥劑通過噴霧器呈細(xì)霧狀噴到盛有目標(biāo)昆蟲及食料的器皿內(nèi)，待藥液晾干后，再將目標(biāo)昆蟲及食料移入干凈的器皿中，定時觀察中毒死亡情況。2、浸漬法：將一定數(shù)量的目標(biāo)昆蟲放在一塊干凈的紗布袋或小沙籠里，再將紗布或紗籠連同食料浸入藥液中，經(jīng)過35秒后取出晾干，或用濾紙吸去多余的藥液，最后將目標(biāo)昆蟲和食料移入干凈器皿內(nèi)，置于恒溫恢復(fù)室內(nèi)，隔一定時間后，觀察記載試蟲中毒死亡情況。3、食料混藥法：將定量丙酮藥液或粉劑與食料混勻，制成一定

30、濃度的藥粉藥?；蚨俱s，再接入一定數(shù)量的目標(biāo)昆蟲，任其接觸取食，定期觀察效果。五、初篩試驗(yàn)結(jié)果分析 結(jié)果檢查時，一般情況下，家蠅以不能正常飛翔或不能正?；顒右暈樗劳觥Ｖ卸镜暮ο壸鳛樗老x，是因?yàn)樵谳^短的藥劑作用時間內(nèi)（如24、48h）要嚴(yán)格區(qū)別中毒與真正死亡的界限是有一定困難和費(fèi)時間，而且要嚴(yán)格區(qū)別中毒與死亡的意義也不大。通常試蟲中毒后，藥劑作用時間延長時，就接近死亡，因此以不能正?；顒幼鳛樗劳鰳?biāo)準(zhǔn)可以大大節(jié)約觀察時間，且不會影響測定結(jié)果。 擬谷甲的死亡標(biāo)準(zhǔn)，以不能正常爬行視為死亡。 蚜蟲以毛筆輕輕撥動蟲體，附肢無任何反應(yīng)則視為死亡，粘蟲、菜青蟲等鱗翅目幼蟲以不能正?；顒右暈樗劳龌蛘咭暂p輕觸動蟲體

31、，無任何反應(yīng)作為死亡標(biāo)準(zhǔn)均可，具體的死活標(biāo)準(zhǔn)可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵髞矶?，但?yīng)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，以便相互比較。1、試蟲死亡率高繼續(xù)研究，進(jìn)一步測定其毒殺作用方式.2、試蟲死亡率低，又不取食（對照組）照常取食，殺蟲劑有忌避作用。3、試蟲死亡率低，又照常取食，殺蟲劑毒力小或無毒力，則無必要進(jìn)一步測定。 進(jìn)行初篩試驗(yàn)，確定了藥劑有毒，要進(jìn)一步了解，需做毒殺作用方式測定技術(shù)。 初篩實(shí)驗(yàn)，它只判斷藥劑是否有毒，不能確定化合物的毒力大小，也不能區(qū)別其毒殺作用方式。但是，當(dāng)某種殺蟲劑經(jīng)過初篩試驗(yàn)后，其毒效接近標(biāo)準(zhǔn)藥劑時，就有價(jià)值進(jìn)一步其對昆蟲的毒殺作用方式。第三節(jié) 毒殺作用方式測定技術(shù)目的：了解藥劑對目標(biāo)昆蟲的毒殺作

32、用方式。在初步毒力測定中，只解決藥劑對目標(biāo)昆蟲是否有毒，但不了解它是怎樣毒殺昆蟲的。為了正確有效的使用這種殺蟲劑，必須了解它對目標(biāo)昆蟲究竟是以什么作用方式殺死的，因此，需要進(jìn)一步做殺蟲劑毒殺作用方式的鑒定。分類依據(jù):殺蟲劑進(jìn)入蟲體的部位及途徑的不同。毒力作用的方式可分為：胃毒毒力測定、觸殺毒力測定、熏蒸人、忌避、內(nèi)吸作用測定 一、胃毒作用測定技術(shù)1、無限取食法原理：目標(biāo)昆蟲可以無限制地取食混有殺蟲劑的飼料，不計(jì)算目標(biāo)昆蟲實(shí)際吞食的藥量。A、飼料混藥喂蟲法 將定量的藥粉同谷物混和均勻，然后每個處理放入目標(biāo)昆蟲2050頭，或?qū)⑺巹┤苡谟袡C(jī)溶劑如丙酮制成藥液，將定量藥液同食物混勻，待溶劑全部揮發(fā)后，

33、置于適宜條件下培養(yǎng)，經(jīng)710d檢查死亡情況，比較毒力。濃度表示法：以藥劑相當(dāng)于食物的比例作為含藥濃度。目標(biāo)昆蟲：擬谷甲、米象、鋸谷盜、麥蛾（倉貯害蟲及一般農(nóng)業(yè)害蟲） B、培養(yǎng)基混藥法用人工培養(yǎng)基與不同濃度的藥劑混合，然后接一定數(shù)量的目標(biāo)昆蟲，定時觀察死亡情況。目標(biāo)昆蟲：果蠅（麻醉后）瓊脂混藥法：瓊脂混藥法瓊脂2克白糖6克水100毫升煮成瓊脂凍液（取5毫升）殺蟲劑不同濃度（5毫升）冷固后加50頭（吸蟲管）果蠅蘇醒后便飛到凍膠上取食，24小時檢查死亡情況。 其他方法如種子拌藥或浸藥處理法、糖漿混藥飼蟲法、毒鉺法。2、定量取食法 是使供試目標(biāo)昆蟲按預(yù)定殺蟲劑劑量取食，或在目標(biāo)昆蟲取食后能準(zhǔn)確測定其吞

34、食劑量。A、葉片夾毒法應(yīng)用很廣，由坎貝爾1929年提出來的。目標(biāo)昆蟲：植食性的、取食量大的、咀嚼式口器的目標(biāo)昆蟲，如粘蟲、蝗蟲、玉米螟、斜紋葉蛾和家蠶。方法：把厚薄均勻的而光滑的植物葉片用鉆孔器（直徑為2厘米）打孔制成5060片，或用剪刀剪成一定面積的葉片，放入噴粉玻璃罩或轉(zhuǎn)盤沉降噴粉器內(nèi)，進(jìn)行定量噴粉，同時放入一定面積的紙片或鋁片（先稱量）噴粉后將硬紙片或鋁片）取出再行稱量，測定每一張葉片上藥粉的沉積量（或換算成單位面積上的藥量）把圓葉片放在培養(yǎng)皿中并保濕。原理：兩張葉片，中間均勻地放入一定量的殺蟲劑飼喂目標(biāo)昆蟲，然后計(jì)算被吞服的葉片面積，計(jì)算出吞食的藥量。優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果準(zhǔn)確，避免發(fā)生觸殺作用，

35、操作方便。缺點(diǎn)：計(jì)算吞服面積較費(fèi)時間。注意：盡量選用試蟲原來的寄主植物，以免有拒食情況；有幾種寄主植物時，應(yīng)選用葉片較大及光滑者，以免藥劑在上面分布不均勻；盡量用同一生理狀態(tài)的葉片及新鮮的葉片。步驟：鉆孔器打孔制成片，用微量進(jìn)樣器吸取10微升藥液（已知含量丙酮藥液）均勻地涂抹在圓葉片上（葉片面積盡量小直徑6mm），自然晾干，另取一片無藥的圓葉片那一面對合，研成夾毒葉片，或?qū)⑾x劑配成不同濃度的丙酮藥液，用微量點(diǎn)滴器定量滴加至小葉片上，待丙酮揮發(fā)后，制成夾毒葉片，飼喂已知體重試蟲，讓其全部吞食，然后再給試蟲喂以新鮮無毒葉片。此法雖然計(jì)算吞服面積較費(fèi)時間，但它仍然是目前比較理想的胃毒毒力測定技術(shù)。

36、B、液滴飼喂法目標(biāo)昆蟲：舔食性昆蟲，如家蠅、果蠅、蜜蜂。方法：將一定量的殺蟲劑加入到糖漿或糖汁中，用微量注射器形成一定大小的液滴（0.010.001毫升），直接飼喂目標(biāo)昆蟲，或?qū)⑿纬傻囊旱畏旁诓Ａ?，讓目?biāo)昆蟲自行舔食，舔食前后稱重，確定取食量。藥劑處理后，放入干凈的培養(yǎng)皿中，定期觀察中毒反應(yīng)情況，計(jì)算死亡率。缺點(diǎn)：沒有完全排除觸殺作用的干擾，測定結(jié)果偏高，在實(shí)踐中很少應(yīng)用。此法適應(yīng)舔食性昆蟲不適應(yīng)于植食性昆蟲。二、觸殺作用測定技術(shù)原理：將較高濃度或劑量的殺蟲劑施于蟲體的全部或局部合適部位，使蟲體充分接觸藥劑而發(fā)揮觸殺作用。有直接施藥法和局部施藥法。直接施藥法：藥劑通過體壁進(jìn)入蟲體而致死的稱

37、為觸殺毒力，但實(shí)際上并不能完全避免一部分殺蟲劑自氣孔進(jìn)入或口器吞入消化道內(nèi)。以下這幾種方法藥劑接觸至昆蟲整個體表，昆蟲體表越大，接觸量越大，但其中有可能有胃毒及對呼吸的影響，甚至有物理窒息作用，很難與單純的觸殺毒力比較。注意在噴霧塔及噴粉塔下進(jìn)行，否則也是不均勻的。A、噴粉及噴霧法定量的粉劑噴撒在盛有目標(biāo)昆蟲及食料的器皿內(nèi)，再將目標(biāo)昆蟲及食料移入干凈的器皿中，用紗布蓋好，定時觀察中毒死亡情況 。用定量的藥劑通過噴霧器呈細(xì)霧狀噴到盛有目標(biāo)昆蟲及食料的器皿內(nèi)，待藥液晾干后，再將目標(biāo)昆蟲及食料移入干凈的器皿中，定時觀察中毒死亡情況 。B、浸漬法將蟲體直接浸入藥液，浸液一段時間后，取出，晾干或吸干，置

38、于合適的溫、濕度條件下及通氣良好的環(huán)境中，隔一定時間后（5h、24h或48h），觀察記載死亡情況，計(jì)算死亡率（或校正死亡率），求得國LC50。優(yōu)點(diǎn)：快，浸漬時間短，常用于有效篩選新農(nóng)藥、有效化合物的篩選試驗(yàn)；1980年被FAO推薦為蚜蟲抗藥性的標(biāo)準(zhǔn)測定方法?？梢园汛笈ハx一同處理，甚至于5個濃度一同浸液。操作簡單，不需特殊儀器。適應(yīng)性廣，可適應(yīng)用水生昆蟲、粘蟲、擬谷甲、家蠅、蚜蟲、介殼蟲等多種昆蟲和螨類。藥液在昆蟲體表的分布是均勻的，假如各個昆蟲體表面積相差不大。 蚜蟲、紅蜘蛛以及介殼蟲等，可以連同植株寄主一起浸入藥液。紅蜘蛛有吐絲成球現(xiàn)象，藥液不易均勻沾濕體表影響結(jié)果?？上葘в屑t蜘蛛的葉片

39、置于豆苗（35cm高）上，等葉片枯萎時，紅蜘蛛自行遷移至豆葉片，然后進(jìn)行浸液。目標(biāo)昆蟲：適用于多種昆蟲的卵和幼蟲，如水生昆蟲、粘蟲、擬谷甲、家蠅、蚜蟲、介殼蟲。缺點(diǎn)：毒力只能用藥液的濃度來表示，而不能精確地用每一昆蟲體重所獲得的劑量來表示，這是不夠精確的。這種方法測得的毒性雖然是接觸毒性，但其中也有可能有胃毒和呼吸作用的影響。不適于活動性極強(qiáng)的或大型昆蟲（要先麻醉，而麻醉后浸液多少有影響），大型昆蟲測用量較多，不甚經(jīng)濟(jì)。毒力大小與昆蟲種類性別蟲期生理狀態(tài)及營養(yǎng)條件、浸藥時間等條件關(guān)系極大，測試時應(yīng)可能控制條件一致使測試條件達(dá)到相對穩(wěn)定。 注意：配制藥液的溶劑、方法、劑型要一致，否則會影響蟲體表

40、面粘的藥量及穿透能力，從而影響觸殺毒力；浸漬時間長短因蟲而異，浸漬時間長，會增加死亡率，時間過短，又可能使藥液在昆蟲體表上濕潤粘著不充分，擬谷盜、鋸谷盜、蜚蠊、果蠅等試蟲浸23分鐘為宜，粘蟲幼蟲、蚜蟲等浸液10秒，紅蜘蛛浸5秒即可；藥液不能重復(fù)利用；一個濃度的藥液不可一個個地依次浸液處理，但可以同時浸入幾個處理重復(fù)、浸液試蟲體表上的多余藥液應(yīng)先除去，以免濕度過大，待體表上的藥液晾干后，再移入干凈的器皿中。浸玻片法亦稱粘膠法，適用于雌成螨（35天齡的雌成螨）的測定，被FAO推薦為螨類抗藥性的標(biāo)準(zhǔn)測定方法。二、局部施藥法原理：將藥液或藥粉均勻地施于蟲體的合適部位，使其充分發(fā)揮觸殺作用，由于藥劑不接

41、觸目標(biāo)昆蟲的口器，因此，基本上可以避免胃毒作用的干擾。A 藥膜法基本原理：將定量的殺蟲劑，采用浸漬、點(diǎn)滴、噴灑等方法施于物體表面上，形成一個均勻的藥膜，然后放入一定量的供試目標(biāo)昆蟲。讓其爬行接觸一段時間，再移到正常的環(huán)境條件下，在規(guī)定的時間觀察試蟲的中毒死亡率。計(jì)算死亡率或擊倒率。優(yōu)點(diǎn)：最接近實(shí)際防治情況；方法簡單，操作方便；應(yīng)用范圍廣，幾乎一切爬行的昆蟲都適用；結(jié)果準(zhǔn)確，是目前常用的一種方法。缺點(diǎn)：昆蟲與藥膜接觸時主要是足部（特別是足跗節(jié)）的接觸，如果昆蟲的足部是殺蟲劑穿透的主要部位，采用藥膜法測得的毒力就偏高，如家蠅藥膜法的毒力高于點(diǎn)滴法，家蠅果蠅蚊類是藥膜法最理想的試驗(yàn)昆蟲，而對于那些足

42、部表皮不是殺蟲劑穿透的主要部位或不能穿透的目標(biāo)昆蟲，采用此法測得的結(jié)果就偏低。 藥膜法測得的結(jié)果不能表示準(zhǔn)確的劑量，即不能表示單位體重昆蟲接受的藥量，只能用單位面積的藥量來表示，而單位面積的藥量并不等于藥劑進(jìn)入蟲體的藥量；昆蟲的活動習(xí)性對試驗(yàn)結(jié)果的影響較大。不同物體表面接觸毒性及殘留藥效都有很大差異，因此應(yīng)盡量控制條件一致。B 點(diǎn)滴法原理：是將一定量的藥液點(diǎn)滴到供試目標(biāo)昆蟲體壁的一定部位來測定殺蟲劑穿透表皮而引起昆蟲中毒致死的觸殺毒力。是特里萬1920年首先發(fā)明了微量注射器，它是一個螺旋推動千分尺進(jìn)而推動注射器的內(nèi)柱，從針尖擠出液滴來。方法：一般點(diǎn)滴胸部背面。點(diǎn)滴器常用的器械：微量點(diǎn)滴器；微量

43、點(diǎn)滴儀；電動手動微量點(diǎn)滴器；毛細(xì)管微量點(diǎn)滴器優(yōu)點(diǎn)：精確度高，因?yàn)樘幚淼膭┝靠赡芸刂频檬譁?zhǔn)確，一般誤差在5%上下；可以避免胃毒作用的干擾；試驗(yàn)昆蟲數(shù)目可以大為減少，一般用20個昆蟲一組，就可以獲得相當(dāng)一致的結(jié)果；藥劑用量少，用于新殺蟲劑的初步測定，這是一個很大的優(yōu)點(diǎn)（比藥膜法）；由于儀器裝置上的改進(jìn)，目前操作方便，迅速，所用的儀器裝置也十分簡便。缺點(diǎn)：不能處理很大數(shù)量的目標(biāo)昆蟲，準(zhǔn)確性在很大程度上決定于昆蟲本身的生理狀態(tài)，因此，必須用生理狀態(tài)十分一致的目標(biāo)昆蟲，否則會大大影響其準(zhǔn)確性；點(diǎn)滴部位與點(diǎn)滴量；目標(biāo)昆蟲處理前的麻醉方式等都有影響；操作技術(shù)難掌握。對微小昆蟲操作困難，不如使用浸漬法。三、

44、內(nèi)吸作用測定技術(shù) 內(nèi)吸殺蟲劑可以通過植物的根、莖、葉以及種子等部位滲入植物內(nèi)部組織，隨植物體液傳導(dǎo)整株，不妨礙植物的生長發(fā)育，而對害蟲具有很高的毒效的化學(xué)物質(zhì)。具有內(nèi)吸殺蟲作用的藥劑很多，但不一定是屬于內(nèi)吸殺蟲劑 。直接測定法根系內(nèi)吸法莖部內(nèi)吸法葉部內(nèi)吸法種子內(nèi)吸法四、熏蒸毒力測定技術(shù) 使藥劑以氣態(tài)經(jīng)呼吸系統(tǒng)進(jìn)入蟲體，在作用部位產(chǎn)生毒力反應(yīng)，以測定熏蒸毒力的殺蟲劑生物測定。 五、忌避作用測定技術(shù) 將定量的藥劑施于植株上或部分植株，再接入一定量的目標(biāo)昆蟲，置于正常環(huán)境下，定期觀察目標(biāo)昆蟲的取食情況，用坐標(biāo)紙法測量被目標(biāo)昆蟲取食面積計(jì)算忌避程度。 第四章 試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)與分析一、毒力的表示方法1、

45、死亡率 (Mortality） 反映殺蟲劑藥效的一個最基本指標(biāo)。 校正死亡率死亡率表示受試目標(biāo)昆蟲經(jīng)藥劑處理后的死亡百分?jǐn)?shù)，它可以直接反應(yīng)藥劑的效果。但昆蟲中往往也有自然死亡的個體，即有自然死亡率存在。因此 ，需要對藥劑處理的死亡率進(jìn)行校正。這就是Abbott提出的校正死亡率。局限性：只有當(dāng)自然死亡與藥劑引起的死亡沒有關(guān)系時，自然死亡率在5%-20%之間時才適用。2、蟲口減退率（大田） 3、致死中量(LD50)/致死中濃度(LC50)致死中量(medium lethal dosage)是指殺蟲劑殺死供試?yán)ハx一半(50%)時所需要的藥量。致死中濃度(medium lethal concentra

46、tion)是指殺蟲劑殺死供試?yán)ハx一半(50%)時所需要的藥劑濃度。TLM 忍受極限中濃度（Medium tolerance limit）魚對有藥的水體接觸一定的時間50%個體死亡的極限濃度（48h） 20-28度 水生生物。4、相對毒力指數(shù)孫云沛1949年提出，幾種農(nóng)藥不同時間不同條件下作生物測定，生物測定影響因素很多，用同一種標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥作比較。二、毒力回歸線LDP線1、試驗(yàn)設(shè)57個不同劑量（或濃度）系列，對多組昆蟲分別測得死亡率。2、劑量（濃度）-死亡率毒力曲線。昆蟲對殺蟲劑敏感性分布是一個偏常態(tài)性分布，也就是說，殺蟲劑對昆蟲的效應(yīng)增加不是和劑量的增加成正比，而是與劑量增加的比例成比例。因此，

47、一個群體昆蟲的累積死亡率和殺蟲劑濃度的關(guān)系是一條不對稱的“S”形曲線。特點(diǎn)是：不對稱S型，中部較值，不易精確求得LD50值。缺點(diǎn)： 用5-7個濃度作一條“S”形曲線很難得到準(zhǔn)確的LD50。 用5-7個劑量死亡率的點(diǎn)來確定S型曲線，可以畫出很多條適合這57點(diǎn)的曲線。 S曲線的特點(diǎn)是兩端平緩，中間一段很陡，因此在死亡率靠近50%時，劑量對數(shù)值只要很小的變化，死亡率就會有很大的變化，即死亡率在45-55%處的劑量與LD50十分接近，不可能準(zhǔn)確求出LD50。劑量轉(zhuǎn)換成對數(shù)：為了計(jì)算方便，通常把濃度換算成對數(shù)值，使偏常態(tài)分布變成正態(tài)分布，使不對稱的“S”曲線變成對稱的“S”曲線 。(3)將S型曲線變成直

48、線：將死亡率轉(zhuǎn)換成機(jī)率值，則對稱的S型曲線變成一根直線，則稱劑量對數(shù)死亡率機(jī)率值曲線，亦稱毒力回歸線LDP線，又稱臨時毒力回歸線。Y=a+bx死亡率轉(zhuǎn)換成機(jī)率值：機(jī)率值就是機(jī)率的單位，范圍1-9，其實(shí)質(zhì)常態(tài)等差加上5。常態(tài)等差即正態(tài)分布的平均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)誤所得的數(shù)值范圍，投射在底線常態(tài)等差點(diǎn)上各個常態(tài)等差。由于常態(tài)等差有正有負(fù)，為計(jì)算方便，將常態(tài)等差加上5即為機(jī)值。 結(jié)果：將轉(zhuǎn)換成的對稱“S”型曲線進(jìn)一步轉(zhuǎn)換成一條直線。坡度(slop)：直線的傾斜度，代表昆蟲群體對殺蟲劑敏感性的差異程度.坡度大，分散程度小，即表示昆蟲群體對殺蟲劑的反應(yīng)較均勻。坡度小，分散程度大，即表示昆蟲群體對殺蟲劑的反應(yīng)具有

49、很大的異質(zhì)性，即對殺蟲劑的反應(yīng)不均勻，即殺死95%昆蟲種群的劑量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于坡度大的需要的劑量。如果兩種殺蟲劑的致死中量相同，兩條毒力回歸線不是平行而是相交的，A、B兩線的坡度不同，LD75和LD25的劑量差別很大，比較時b具有重要意義， 不能用LD50，必須考慮曲線的坡度。引起75%的蟲子死亡與95%的蟲子死亡，需要的藥劑劑量相差越小，表明反應(yīng)均勻，如A與B相比較 AB三、毒力回歸線的求取方法（一）作圖法1、目測畫出對數(shù)-機(jī)率值回歸直線直接從實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果，將藥劑劑量轉(zhuǎn)換為對數(shù)，死亡率轉(zhuǎn)換成機(jī)率值，用目測的方法繪制LDP線，畫直線須遵守的原則：所畫的直線應(yīng)盡量與各點(diǎn)接近。主要照顧死亡率在16%-

50、84%之間對應(yīng)的機(jī)率值的點(diǎn)。2、求出LD50自機(jī)率值5處引出橫軸的平行線與直線相交，自相交點(diǎn)引出縱軸的平行線與橫軸相交，交點(diǎn)的值為LD50的對數(shù)值，反對數(shù)后即得LD50值。3、求毒力回歸式(直線方程)毒力回歸式可用y=a+bx表示y：機(jī)率值，x：劑量或濃度對數(shù)，a：截距，b：直線的斜率從計(jì)算回歸線的坡度值(斜率b) ，在直線上任意取兩點(diǎn)，可得到x1、y1和x2、y2兩組數(shù)值4、卡方(2)檢驗(yàn)將各劑量的對數(shù)值x代入求得的回歸方程式中，求出相應(yīng)的機(jī)率值(理論值)；根據(jù)求得的理論機(jī)率值，從死亡率-機(jī)率值表中查出死亡率p;求各劑量的理論死亡數(shù)np(供試蟲數(shù)理論死亡率)不求各劑量的實(shí)際死亡數(shù)r與理論死亡

51、數(shù)np的差，即r-np；求5、求致死中量的標(biāo)準(zhǔn)誤Sm根據(jù)各劑量的理論機(jī)率值，查權(quán)重系數(shù)表，查出相應(yīng)的權(quán)重系數(shù)w；求權(quán)重nw，并求權(quán)重總和nw代入下式中式中x為各劑量的的對數(shù)值，x為各劑量的的對數(shù)值的平均數(shù)，m為致死中量的對數(shù)值。6、致死中量95%的置信限致死中量的置信限即致死中量的可靠范圍，變即藥劑對供試?yán)ハx種群致死中量真值的波動范圍。當(dāng)p=0.05，自由度為N(供試?yán)ハx數(shù))，查得t分布表得t值，致死中量的置信限=LD50tSm因供試?yán)ハx數(shù)一般大于50，可認(rèn)為自由度為+，t值為1.96，故致死中量真值的波動范圍為：M1=LD50-1.96SmM2=LD50+1.96Sm注意：式中的LD50及S

52、m均為對數(shù)值，需查反對數(shù)表才是劑量的數(shù)值。（二）最小二乘法求a、b時以(y-y)2最小為原則 以點(diǎn)滴法測定高效氯氰菊酯對菜青蟲的毒力為例：菜青蟲3-4齡，每個處理為三個重復(fù)，每個重復(fù)10頭試蟲，放入干凈的培養(yǎng)皿中待處理，以丙酮為對照，由低濃度向高濃度依次點(diǎn)滴，點(diǎn)滴量為0.04-0.06微升，處理完畢，給定量新鮮葉片，置25-27恒溫培養(yǎng)48小時后記錄觀察死亡率。 濃度(g/l) 點(diǎn)滴量(g/頭)重復(fù)處理蟲 數(shù)48小時平均死亡率校正死亡率死亡率機(jī)率值Y劑量對數(shù)X0031010%-3.718400.0103025.3610-431030%22.22%4.2345-3.270.0206041.071

53、0-331046.67%40.74%4.7647-2.970.041212.1410-331056.67%51.86%5.0476-2.670.082424.2810-331066.67%62.97%5.3319-2.370.164848.5610-331080%77.78%5.7655-2.07按照下列公式求回歸方程Y=a+bx中的a和b注意：公式中的N不是供試蟲數(shù)，而是處理劑量數(shù)。求得后再將Y=5代入方程式中，求得LD50?？ǚ綑z驗(yàn)與LD50的95%置信限求取如作圖法。劑量對數(shù)X理論機(jī)率值Y理論死亡率% P供試蟲數(shù)n實(shí)際死亡數(shù)r理論死亡數(shù)np相差r-n p (r-n p)2 n p(1-

54、p)-3.274.303324.3303022.22%2.4330.570.18-2.974.666336.9303040.74%3.6930.980.41-2.675.029351.2303051.86%5.1230.550.12-2.375.392365.2303062.97%6.5230.150.00992-2.075.755377.5303077.80%7.7530.250.0362=0.767.815 (=5-2=3) 四、殺蟲劑混用聯(lián)合作用的判斷增效劑：凡是在一般濃度下單獨(dú)使用時對昆蟲并無毒性，或毒性很小，但與殺蟲劑混用時，則能增加殺蟲劑的效果。這類化合物稱為增效劑。一般可以用測定

55、相對毒力的方法來表示增效劑效能的大小，即用增效比值（增效倍數(shù)）來表示。凡增效比值明顯大于1時，即證明有增效作用。增效倍數(shù)=單獨(dú)藥劑LD50 / (藥劑+增效劑) LD50例：增效磷分別與氧樂果、溴氰菊酯混用對桃蚜的毒力氧樂果+增效磷的共毒系數(shù)=1.110-2 /3.810-3100 =289.47溴氰菊酯+增效磷的共毒系數(shù)= 1.6410-4 / 3.2910-4100 =49.85殺蟲劑LD50(g/頭)共毒系數(shù)氧樂果1.110-2氧樂果+增效磷(1：2)3.810-3289.47 (增效)溴氰菊酯1.6410-4溴氰菊酯+增效磷(1：2)3.2910-449.85 (拮抗)共毒系數(shù)法(CT

56、C法)孫云沛1960年提出共毒系數(shù)法 Co-Toxicity Co-efficient毒力指數(shù)=(標(biāo)準(zhǔn)藥劑的LD50/供試藥劑的LD50) 100混劑理論毒力指數(shù)（TTI）=A的毒力指數(shù)混劑中A藥的百分含量+B的毒力指數(shù)混劑中B藥的百分含量實(shí)際毒力指數(shù)(ATI)= （標(biāo)準(zhǔn)藥劑的LD50/A+B的LD50）100 CTC= ATI / TTI 100 CTC100 相加作用 CTC100 增效作用由于存在實(shí)驗(yàn)誤差，很難判斷CTC略大于100為增效，因此國內(nèi)通用的是CTC120增效，80-120相加，80拮抗。例：溴氰菊酯、乙酰甲胺磷及其混用對甘藍(lán)上桃蚜的毒力混劑的ATI=3.42 10-4 /5

57、.9810-3100=5.72混劑的TTI=100 1/81+1.0680/81=2.28共毒系數(shù)(CTC)=ATI / TTI100=4.72/2.25100=250.88殺蟲劑LD50(g/頭)TI溴氰菊酯3.4210-4100乙酰甲胺磷3.2210-21.06溴氰菊酯+乙酰甲胺磷(1：80)5.9810-35.72第五章 殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定作為一種測定藥劑對病原菌生物活性的技術(shù)具有以下特點(diǎn)：研究材料較易獲得。病原菌分離培養(yǎng)、菌種保存容易。測定技術(shù)趨向成熟，條件穩(wěn)定，結(jié)果的重現(xiàn)性好，不受外界因素影響。方法容易標(biāo)準(zhǔn)化。殺菌劑生物測定有二類，一類是離體生物測定(bioassay

58、in vitro)病原菌在脫離寄主環(huán)境條件下，在人工培養(yǎng)條件下來進(jìn)行的一類藥劑生物活性測定方法。這類方法損傷簡便，測定快速，易標(biāo)準(zhǔn)化，重現(xiàn)性好。多用于藥劑對可人工培養(yǎng)的病原菌作用的測定。結(jié)果與生產(chǎn)應(yīng)用有較大差異，特別是無直接毒性的藥劑。一類是活體生物測定(bioassay in vivo)這類測定在寄主植物上測定藥劑對病原菌的活性，因此，與上類不同的是增加植物，不間單純的藥劑對病菌的作用。如果是溫室中的測定，環(huán)境條件基本可以控制。如果是田間試驗(yàn)，還增加了環(huán)境條件在不可控制的情況下藥劑的表現(xiàn)。測定條件與大田接近，結(jié)果實(shí)用性好，對藥劑在田間應(yīng)用的參考價(jià)值較大。受環(huán)境因素影響大，易出現(xiàn)結(jié)果的不穩(wěn)定。

59、一、殺菌劑(離體)生物測定的基本要求與基本操作1、試驗(yàn)器材的清潔一般洗滌：肥皂水或洗衣粉或洗潔精，常用的洗滌劑。堿、酸洗滌：對于器皿上粘有焦油、樹脂等物質(zhì)，用一般洗滌不易去掉，可用濃硫酸或40%氫氧化鈉溶液先浸泡，再清洗。鉻酸洗滌：強(qiáng)氧化劑，去污力極強(qiáng)，有腐蝕性，使用時要注意避免洗液濺到皮膚或衣物上，以防灼傷。鉻酸洗滌液是實(shí)驗(yàn)室常用的強(qiáng)去污劑，配制方法：重鉻酸鉀60g， 濃硫酸460ml，水300ml先將重鉻酸鉀溶于溫水中，冷卻后徐徐加入濃硫酸。配好的洗液呈紅色、濃厚，有均勻的紅色小結(jié)晶。稀洗液則為重鉻酸鉀60g，硫酸60ml，水1000ml。2、試驗(yàn)器材的滅菌1)干熱滅菌：主要是利用干熱的空

60、氣滅菌。烘箱干熱滅菌：主要用于玻璃器皿及不易變形(性)或燃燒的材料滅菌，滅菌溫度一般控制在160-180，滅菌時間1-2小時，如150，則需2小時。對于土壤這種材料，滅菌時往往體積大，則一次滅菌的效果常常會不理想，就要采用間歇滅菌的方法進(jìn)行滅菌。火焰滅菌：是將器具在燃燒的火焰上進(jìn)行灼燒，如接種針、接種環(huán)、打孔器等可以在火焰上灼燒的器具。2)濕熱滅菌：常用的是高壓蒸氣滅菌。密閉的高壓蒸氣滅菌鍋中的水回執(zhí)后產(chǎn)生蒸氣，水蒸氣溫度和水的沸點(diǎn)，隨著鍋內(nèi)壓力的增高而提高，蒸氣壓力的大小與蒸氣溫度有一定關(guān)系。蒸氣鍋的壓力是可以控制的，一般滅菌時的壓力為15磅/吋2。對于土壤這種材料，可以用間歇滅菌的方法才能