考研微生物x15檢驗

1、第十一章 微生物與食品安全 食品衛(wèi)生的微生物學檢驗 檢驗內容 細菌總數(shù)的測定； 大腸菌群最近似數(shù)（MPN）的測定； 病原菌檢驗；衛(wèi)生學意義1、污染程度2、保質期3、樣品被糞便污染4、腸道病原菌5、食源性疾病病原 注意事項 1、要提前了解有關微生物的特性 2、做好準備工作（培養(yǎng)基、標準菌株及其他材料的準備）； 3、注意無菌操作： 打開任何樣品容器之前，在取樣開口處的周圍表面，必須擦干凈，去除會污染樣品的物質，用70%酒精擦拭消毒，防止污染。第一節(jié) 細菌總數(shù)的測定 一、概念/單位：個/mlg(cm2) 是指每克（或每毫升）樣品中所含細菌的數(shù)量。 二、測定方法（傳統(tǒng)SPC法：稀釋平板、旋轉平板） 稀

2、釋平板 （一）樣品稀釋及傾注平板 1、無菌操作，取試樣10克（或10ml）放于含有100ml（如檢樣為液體則改為90ml）滅菌生理鹽水或其它稀釋液的滅菌玻璃瓶內（瓶內予先放置適當數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內，充分振搖或研磨作成1：10的均勻稀釋液。 2、用1ml滅菌吸管，吸取1：10稀釋液1ml，注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內，振搖試管混合均勻，作成1：100稀釋液。 3、另取1ml吸管，按以上操作順序作10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋1次，即換用1支1ml滅菌吸管。 4、根據(jù)對樣品污染情況的估計，選擇23個適宜稀釋度。分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1ml

3、稀釋液于滅菌平皿內，每個稀釋度作2個平皿。 5、稀釋液移入平皿內后，即時將冷至4555的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46水浴保溫）傾注平皿約15ml，并移動平皿使混合均勻。 （二）培養(yǎng) 待瓊脂凝固后，翻轉平皿，置37溫箱內培養(yǎng)2448h后取出，計算平皿內菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克（或每毫升）樣品所含菌落總數(shù)。 （三）菌落計數(shù)方法 作平皿菌落計數(shù)時，可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏，在記下各皿的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各皿平均菌落數(shù)。 1、平皿菌落數(shù)的選擇：選取菌落數(shù)在30300之間的平皿作為菌落總數(shù)的測定標準。一個稀釋度使用兩個平皿時，應采取兩個平皿平均數(shù)；如其中一個平皿有較大片狀

4、菌落生長時，則不宜采用，而應以無片狀菌落生長的平皿作為該稀釋度的菌落數(shù)。若片狀菌落不到平皿的一半時，而其余一半中菌落分布又很均勻，則可計數(shù)半個平皿后乘以2代表全皿菌落數(shù)。 2、稀釋度的選擇 應選擇平均菌落數(shù)在30300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表中例1） 若有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30300之間，則應視二者之比如何來決定，若其比值小于2，應報告其平均數(shù)，若大于2則報告其中較小的數(shù)字（見表中例2及3） 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（根據(jù)表中例4） 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于300，則應按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋

5、倍數(shù)報之（見表中例5） 若所有稀釋度的平均菌落均不在30300之間，其中一部分大于300或小于30時，則以最近于30或300的平均菌數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表中例6） 3、菌落數(shù)的報告：菌落數(shù)在100以內時按實有數(shù)報告，大于100時，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以4舍5入方法計算，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來表示（見表中報告方式欄）。三、安全性評價（衛(wèi)生評定） 根據(jù)被檢食品（樣品）相關標準進行綜合評價。 影響因素 1、取樣方法； 2、微生物在樣品中的分布情況； 3、食品中微生物的特性； 4、食品原料的特性； 5、食品的預檢過程； 6、培養(yǎng)基的營養(yǎng)； 7、培養(yǎng)溫度和

6、時間； 8、培養(yǎng)基的pH、AW、Eh； 9、稀釋劑的類型； 10、其他競爭性或拮抗微生物； 其它方法膜過濾法：0.45微米孔徑，水和溶質可以通過，微生物不可通過，將膜在平板上培養(yǎng)，MDC計數(shù)，適當染色效果更好。 干燥薄膜計數(shù)法：即紙片法，美國3M公司發(fā)明，快速出結果；現(xiàn)代方法。 顯微直接計數(shù)法：涂片染色計數(shù)； 表層微生物的檢測 擦拭法稀釋、平板接觸法、黏性薄膜法； 代謝受破壞微生物的培養(yǎng) 亞致死、高溫、冷凍、干燥、輻射、抗生素、防腐劑等作用或的細菌，在選擇性培地上不生長。在高營養(yǎng)（特別加牛乳、 磷酸鹽、酪蛋白、半乳糖等）非選擇性培養(yǎng)基上生長?，F(xiàn)代食品安全檢測。 不可生長的活性微生物 即VBNC

7、狀態(tài)，主要是弧菌類、沙門氏菌、大腸桿菌。采用直接計數(shù)法。 第二節(jié) 大腸菌群最近似數(shù)（MPN）的測定 一、概念/單位：個/100mlg 大腸菌群系指一群在37 24h能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，好氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。 二、測定方法 1、樣品稀釋（同細菌總數(shù)測定）； 2、接種乳糖膽鹽發(fā)酵管（33=9支）； 3、鑒別培養(yǎng)（伊紅美蘭、遠藤氏瓊脂）； 4、乳糖復發(fā)酵試驗； 三、結果報告（按照國標及有關標準） 第三節(jié) 病原菌檢驗 一、檢驗內容：沙門氏菌、志賀氏菌、葡萄球菌、變形桿菌、副溶血性弧菌等。 二、檢驗方法：以沙門氏菌為例 1、前增菌； 2、選擇性增菌； 3、選擇性平板分離； 4、生化試驗； 5、血清學反應； 檢驗程序見下圖 注：沙門氏菌因子血清，用于初步