細(xì)胞制劑車間設(shè)計(jì)要點(diǎn)與問題分析

1、細(xì)胞制劑車間設(shè)計(jì) 要點(diǎn)與問題分析Good Manufacture Practice（GMP）良好操作規(guī)范GMP是世界衛(wèi)生組織（WHO），對所有制藥企業(yè) 質(zhì)量管理體系的具體要求，1992年實(shí)施。我 國 藥 品 生 產(chǎn) 質(zhì) 量 管 理 規(guī) 范 （ Good Manufacture Practice of Medical Products，GMP） 根 據(jù)中華人民共和國藥品管理法、中華人民 共和國藥品管理法實(shí)施條例， 制定本規(guī)范。 1999年8月1日起施行（導(dǎo)致1112家企業(yè)倒閉） 。新版藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂） 自2011年3月1日起施行（500家中小企業(yè)關(guān)停） 。新版GMP已經(jīng)與世

2、界衛(wèi)生組織藥品GMP一致。GMP三大要素是人員、硬件和軟件。人員是關(guān)鍵，硬件是基礎(chǔ)，軟件是保證。優(yōu)秀的機(jī)構(gòu)人員、與生產(chǎn)質(zhì)量相適應(yīng)的硬件、完 善可行的軟件構(gòu)成了生產(chǎn)合格藥品的基本保證1997年發(fā)布醫(yī)藥工業(yè)潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范（簡 稱GMP 設(shè)計(jì)規(guī)范）；2009年實(shí)施醫(yī)藥工業(yè)潔 凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范 GB50457-2008； 藥品生產(chǎn)質(zhì) 量管理規(guī)范（2010年修訂）2011年3月1日起施 行。Good Manufacture Practice（GMP）良好操作規(guī)范干細(xì)胞臨床研究管理辦法（試行）國家衛(wèi)生計(jì)生委會(huì)同食品藥品監(jiān)管總局聯(lián)合 國衛(wèi)科教發(fā)201548號2015年07月20日發(fā)布第十七條干細(xì)胞制劑的制備

3、應(yīng)當(dāng)符合藥品生 產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）的基本原則 和相關(guān)要求，配備具有適當(dāng)資質(zhì)的人員、適用的設(shè)施設(shè)備最大限度地降低制備過程中的污染、交叉污染，確保持續(xù)穩(wěn)定 地制備符合預(yù)定用途和質(zhì)量要求的干細(xì)胞 制劑。體細(xì)胞制劑特點(diǎn)規(guī)模?。簜€(gè)體化制劑（或批量制劑）多批樣品同期制備，增加交叉污染和混肴 差錯(cuò)幾率。理、化因素對制劑影響大，終產(chǎn)品不能滅 菌處理。有些含有凍存和復(fù)蘇程序。有些終制劑進(jìn)入人體前不能完成所有檢 測。終制劑有效期短。細(xì)胞制劑與其他生物制劑的不同點(diǎn)細(xì)胞制劑抗體、因子、多肽、中 藥等生物制劑開始制備就要在A級下 操作有些制劑在制備初期在 D級或C級操作終產(chǎn)品無法過濾或高溫 除菌可過濾或高溫除菌消

4、毒 處理有些屬于個(gè)體化制劑 一批只供一人每批可供成千上萬人終產(chǎn)品通常保存時(shí)間短終產(chǎn)品保存時(shí)間長自體血液骨髓來源的細(xì)胞與異體組織來源的干細(xì)胞制劑的不同點(diǎn)自體血液骨髓細(xì)胞異體組織來源的干細(xì)胞（臍帶、胎盤）自體來源異體來源無菌采集空氣中開放暴露污染機(jī)率低污染機(jī)率相對高自體一人使用可供多人使用體內(nèi)存活長體內(nèi)存活短出問題影響一人影響多人體細(xì)胞制劑室位置的選擇應(yīng)建立在自然環(huán)境良好的區(qū)域，應(yīng)遠(yuǎn)離空氣嚴(yán) 重污染、水質(zhì)嚴(yán)重污染或病原微生物（含未知 或無檢測手段的病原微生物）豐富的場所，應(yīng) 遠(yuǎn)離振動(dòng)或噪聲干擾的區(qū)域；獨(dú)立或相對獨(dú)立應(yīng)建立并實(shí)施防蟲、防鼠、防花粉等措施，防 止無關(guān)動(dòng)植物進(jìn)入關(guān)鍵區(qū)域?？諝鈨艋t(yī)藥工業(yè)

5、潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范 GB50457-2008空氣潔凈 度等級懸浮粒子最大允許數(shù)（個(gè)/m3）微生物最大允許數(shù)0.5m5m浮游菌（cfu/m3）沉降菌（cfu/皿）1003500051100003500002000100310000035000002000050010300000105000006000015新版各級別空氣懸浮粒子的標(biāo)準(zhǔn)2010年新版GMP 附錄1無菌藥品GMP不同國家有不同標(biāo)準(zhǔn)，ISO國際統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級別懸浮粒子最大允許數(shù)/立方米靜態(tài)動(dòng)態(tài)(3)0.5m5.0m(2)0.5m5.0mA級(1)3,520203,52020B級3,52029352,0002,900C級352,0002

6、9003,520,00029,000D級3,520,00029,000不作規(guī)定不作規(guī)定注：（1）為確認(rèn)A級潔凈區(qū)的級別，每個(gè)采樣點(diǎn)的采樣量不得少于1立方米。A級潔凈區(qū)空氣懸浮粒子的級別 為ISO 4.8，以5.0m的懸浮粒子為限度標(biāo)準(zhǔn)。B級潔凈區(qū)（靜態(tài)）的空氣懸浮粒子的級別為ISO 5，同時(shí)包括 表中兩種粒徑的懸浮粒子。對于C級潔凈區(qū)（靜態(tài)和動(dòng)態(tài)）而言，空氣懸浮粒子的級別分別為ISO 7和ISO 8。 對于D級潔凈區(qū)（靜態(tài)）空氣懸浮粒子的級別為ISO 8。測試方法可參照ISO14644-1。（2）在確認(rèn)級別時(shí)，應(yīng) 當(dāng)使用采樣管較短的便攜式塵埃粒子計(jì)數(shù)器，避免5.0m懸浮粒子在遠(yuǎn)程采樣系統(tǒng)的長采

7、樣管中沉降。在單 向流系統(tǒng)中，應(yīng)當(dāng)采用等動(dòng)力學(xué)的取樣頭。（3）動(dòng)態(tài)測試可在常規(guī)操作、培養(yǎng)基模擬灌裝過程中進(jìn)行，證明 達(dá)到動(dòng)態(tài)的潔凈度級別，但培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)要求在“最差狀況”下進(jìn)行動(dòng)態(tài)測試。98年版與2010年版GMP潔凈區(qū)各級別空氣 懸浮粒子標(biāo)準(zhǔn)對照潔凈度級別2010年版GMP相當(dāng)于ISO標(biāo)準(zhǔn)98年版GMP相當(dāng)于ISO標(biāo)準(zhǔn)A動(dòng)態(tài)ISO5100級ISO5靜態(tài)ISO5B動(dòng)態(tài)ISO7靜態(tài)ISO5C動(dòng)態(tài)ISO810000級ISO7靜態(tài)ISO7D不作規(guī)定100000級ISO8靜態(tài)ISO8潔凈區(qū)微生物監(jiān)測的動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn)(1)潔凈度級別浮游菌cfu/m3沉降菌（90mm）cfu /4小時(shí)(2)表面微生物接觸

8、（55mm）cfu /碟5指手套cfu /手套A級1111B級10555C級1005025D級20010050注：（1）表中各數(shù)值均為平均值。（2）單個(gè)沉降碟的暴露時(shí)間可以少于4小時(shí)，同一位置可使用多個(gè)沉降碟連續(xù)進(jìn)行監(jiān)測并累積計(jì)數(shù)。GMP附錄-細(xì)胞治療產(chǎn)品征求意見稿食品藥品審核查驗(yàn)中心潔凈度級別細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)操作示例B級背景下的局部A級處于未完全密封狀態(tài)下產(chǎn)品的生產(chǎn)操作和轉(zhuǎn)移；無法除菌過濾的溶液、培養(yǎng)基的配制；病毒載體除菌過濾后的分裝。C級背景下的A級送風(fēng)1.生產(chǎn)過程中采用注射器對處于完全密封狀態(tài)下的產(chǎn)品、生產(chǎn)用溶液進(jìn)行取樣； 2.后續(xù)可除菌過濾的溶液配制；病毒載體的接種、除菌過濾；質(zhì)粒的除

9、菌過濾。C級產(chǎn)品在培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)；質(zhì)粒的提取、層析。D級采用密閉管路轉(zhuǎn)移產(chǎn)品、溶液或培養(yǎng)基；采用密閉設(shè)備、管路進(jìn)行的生產(chǎn)操作、取樣；制備質(zhì)粒的工程菌在密閉罐中的發(fā)酵?？諝鈨艋?xì)胞制劑制備質(zhì)量管理自律規(guī)范（中國醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)）干細(xì)胞制劑：第三十五條 應(yīng)按照工藝規(guī)程設(shè)計(jì)相 應(yīng)操作區(qū)的潔凈度級別，非完全密封狀態(tài)下的細(xì)胞 操作（如分離、培養(yǎng)、灌裝等）以及與細(xì)胞直接接 觸的無法終端滅菌的試劑和器具的操作，應(yīng)在 B 級 背景下的A 級環(huán)境中進(jìn)行。在隔離系統(tǒng)或密閉自動(dòng)制備系統(tǒng)可采用C+A。干細(xì)胞有些來源于暴露于外環(huán)境的組織（如臍帶、 胎盤等），應(yīng)有獨(dú)立的預(yù)處理間，檢測合格后再進(jìn) 入生產(chǎn)制備區(qū)。密閉隔離操作

10、系統(tǒng) 可以采用C級制備間Tofflon 東富龍全自動(dòng)多功能細(xì) 胞處理系統(tǒng)德國美天旎生物技術(shù)有限公司可在C級制備間 制備潔凈室內(nèi)的溫度和濕度應(yīng)符合下列規(guī)定GB50457-2008生產(chǎn)工藝對溫度和濕度無特殊要求時(shí)，以穿著潔凈工作服不產(chǎn)生不舒服感為 宜。100級、10000級區(qū)域：溫度為2024，（A級C級）100000級區(qū)域：（D級）相對濕度為4560%。 溫度為1828相對濕度為5065%。噪音控制GB50457-2008非單向流醫(yī)藥潔凈室的噪聲級不應(yīng)大 于60dB，單向流和混合流醫(yī)藥潔凈室 的噪聲級不應(yīng)大于65dB。單向流：百級風(fēng)幕下方為回風(fēng)系統(tǒng)。潔凈室內(nèi)應(yīng)保持一定的新鮮空氣量室內(nèi)每人新鮮空氣

11、量不應(yīng)小于40m3/h 。實(shí)際使用中減少新風(fēng)，以節(jié)約能耗，但前 提是要保證人員舒適度，不能覺得悶。 也 可選用總風(fēng)量的15%左右作為新風(fēng)量。新風(fēng)口過濾網(wǎng)要經(jīng)常更換，應(yīng)易于更換。潔凈室必須維持一定的正壓不同空氣潔凈度的潔凈區(qū)之間以及潔凈區(qū) 與非潔凈區(qū)之間的靜壓差不應(yīng)小于10Pa。同級別制備間和潔凈走廊前者壓力高于后 者。要考慮外排式生物安全柜開啟后，增加的排氣量對壓差的影響。工藝設(shè)計(jì)體細(xì)胞生產(chǎn)的工藝流程不同于傳統(tǒng)藥物，規(guī)模 小，多批同時(shí)進(jìn)行，人為操作多，為了防止交 叉錯(cuò)誤，一個(gè)制備間同期只制備同一批樣品為 好。分別設(shè)置人員和物料的進(jìn)出口通道。制備區(qū)不設(shè)上下水。如一更室設(shè)洗手池，則排 出的潔凈空氣

12、不要回風(fēng)，直接外排不參加再循 環(huán)為好。涉及病毒污染樣品，或應(yīng)用病毒轉(zhuǎn)基因細(xì)胞制 劑，應(yīng)考慮人和物單向流。其他考慮消毒設(shè)施（臭氧、UV燈、過氧化氫等）。CO2管路，接口閥門。閉路監(jiān)視系統(tǒng)，壓差、細(xì)胞庫氮?dú)獗O(jiān)控。塵埃粒子監(jiān)控對講系統(tǒng)物料、試劑、耗材等庫房（待檢、合格區(qū)）。雙路供電。消防：消防設(shè)備，消防通道。防鼠和蚊蟲污水處理純水制備密閉 安全門 或設(shè)備門制備病毒轉(zhuǎn)染細(xì) 胞制劑生物安全柜為外 排式壓差監(jiān)控溫濕度監(jiān)控溫濕度懸浮粒子監(jiān)控組合式凈化空調(diào)監(jiān)控系統(tǒng)細(xì)胞庫液氮罐儲(chǔ)存區(qū)氧氣氣體監(jiān)控報(bào)警，空氣外排干細(xì)胞臨床研究備案 單位抽查中發(fā)現(xiàn)細(xì)胞制劑車間存在的問題依據(jù)細(xì)胞制劑特性和生產(chǎn)制備工藝考慮 細(xì)胞制劑間設(shè)計(jì)框架1、非病毒細(xì)菌污染個(gè)體化細(xì)胞制備間，可與同級別潔 凈走廊直接相通。垃圾可在潔凈走廊設(shè)統(tǒng)一的污物 傳遞窗。2、病毒陽性細(xì)胞，以及病毒轉(zhuǎn)