姜黃素類化合物的分離及其抗肝癌和子宮內(nèi)膜癌的研究

1、姜黃素類化合物的別離及其抗肝癌和子宮內(nèi)膜癌的研究【關(guān)鍵詞】姜黃素類化合物；,肝癌；,子宮內(nèi)膜癌摘要：目的從中藥姜黃提取3種姜黃素類化合物并對(duì)它們進(jìn)展抗肝癌細(xì)胞和子宮內(nèi)膜癌作用研究。方法采用柱層析法從姜黃提取物中別離出3種姜黃素類化合物，用TT法測(cè)定其抗肝癌細(xì)胞和子宮內(nèi)膜癌作用。結(jié)果3種姜黃素化合物分別鑒定為姜黃素脫甲氧基姜黃素和雙脫甲氧基姜黃素。0.01g/l雙脫甲氧基姜黃素，0.01g/l和0.001g/l脫甲氧基姜黃素能明顯抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)；0.01g/l和0.001g/l雙脫甲氧基姜黃素，0.01g/l脫甲氧基姜黃素,0.01g/l和0.001g/l姜黃素能明顯抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的生長(zhǎng)

2、。結(jié)論一定濃度的姜黃素化合物能明顯抑制肝癌和子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。關(guān)鍵詞：姜黃素類化合物；肝癌；子宮內(nèi)膜癌IslatinfuruinidsanditsEffetsnLiveranerandEndetrialarinaAbstrat：bjetiveTextratthreeuruinidsfrurualangaandstudythereeffetsnliveranerandendetrialarina.ethdsThreeuruinidseregtfrtheextratfurualangaithlunhratgraphyandthEireffetsnliveranerandendetrialari

3、naeredeterinedbyTT.ResultsThreeuruinidsereidentifiedasuruin,deethxyuruinandbisdeethxyuruin.Itshedthat0.01g/luruin，0.01g/land0.001g/ldeethxyuruinuldresistliveraner,0.01g/land0.001g/lbisdeethxyuruin，0.01g/ldeethxyuruin,0.01g/land0.001g/luruinuldresistendetrialarinaells.nlusinItisaneffetiveethdthaturui

4、nidsareseparatedfrurualangaithlunhratgraphyinthisexperient.Thethreeuruinidshavegdantitureffetsnliveranerandendetrialarinaells.Keyrds：uruinid;Liveraner;Endetrialarina近年來(lái)，姜黃素類化合物(uruinids)的研究工作在國(guó)內(nèi)外都頗受重視。它們是中藥姜黃的主要有效成分，主要包括姜黃素(uruin)、脫甲氧基姜黃素(deethxyuruin)和雙脫甲氧基姜黃素(bisdeethxyuruin)3種。這3種酚類色素相近的構(gòu)造使它們具有多方

5、面相似的藥理作用，如抗炎、抗氧化、降血脂，特別是它的抗誘變和抗腫瘤作用1。但是構(gòu)造上的微小差異又使3種姜黃素在抗腫瘤、抗氧化作用等方面的才能有較大差異2。因此從姜黃中提取出較為純潔的3種姜黃素混合物，再進(jìn)一步將它們別離，對(duì)于實(shí)際藥品消費(fèi)將會(huì)具有良好的指導(dǎo)作用和應(yīng)用價(jià)值。本文就姜黃素類化合物的別離純化和構(gòu)造鑒定提供了一種很好的途徑并就這3種姜黃素類化合物的抗肝癌和子宮內(nèi)膜癌作用作出詳細(xì)的研究。1儀器與材料XT4雙目顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀未校正，UV用HP8453紫外光譜儀測(cè)定，S用HP5973質(zhì)譜儀測(cè)定，EI離子源.VarianINV400Hz型核磁共振儀TS內(nèi)標(biāo)。薄層色譜硅(G)和柱層析硅膠(2003

6、00目)均為青島海洋化工廠產(chǎn)品。中藥姜黃購(gòu)于四川仙森公司，其品種及來(lái)源為urua.LangaL的根莖。RPI1640培養(yǎng)液華美公司分裝；TT制劑華美公司分裝二甲基亞砜DS由上海金山華工廠提供，分析純，批號(hào)：20020514。姜黃素(J1)、脫甲氧基姜黃素(J2)和雙脫甲氧基姜黃素(J3)用50%DS配制，再用RPI1640培養(yǎng)液稀釋成0.01，0.001，0.0001g/l備用；DS用RPI1640稀釋成5%，0.5%，0.05%用作溶媒對(duì)照。子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞及肝癌細(xì)胞均為貼壁生長(zhǎng)型細(xì)胞，細(xì)胞株由遵義醫(yī)學(xué)院微生物教研室提供。2方法與結(jié)果2.1姜黃素類化合物的別離2.1.1提娶別離與純化姜黃的枯燥

7、根莖，粉碎，過(guò)40目篩，用石油醚3060回流5h2次脫脂。殘?jiān)眉状祭浣崛?2h，得黃色膏狀物，膏狀物進(jìn)展柱色譜。于=15，L=1200的玻璃層析柱中，以氯仿、甲醇和甲酸9640.1的混合溶液為淋洗劑，分別將3個(gè)黃色色帶洗脫下來(lái)。將Rf值一樣的溶液合并，得到3種姜黃素類化合物溶液，記為J1,J2和J3。參照文獻(xiàn)方法3，用少量丙酮分別溶解3種姜黃素類化合物，向溶液中快速參加三蒸水至混濁，然后劇烈振蕩至混濁液透明并有絮狀沉淀出現(xiàn)，再以13000r/in離心5in，棄去上層清液，用氮?dú)獯蹈沙恋砦铩Ｖ貜?fù)上述操作3次。2.1.2構(gòu)造鑒定化合物J1：黃色晶體,p183184,UVlaxH3H422n，1

8、HNR(D3D,400Hz)pp：4.13(6H,s),6.85(2H,s),7.58(4H,dd,8.0,2.0),7.95(2H,d,2.0),8.12(2H,s),8.34(2H,d,8.0),10.41(2H,bs).EIS/z：368(+,20),350(24),320(11),272(18),232(18),217(32),202(6),177(100),145(67),117(18),89(36),52(8),32(23),14(15)，與文獻(xiàn)4對(duì)照確定為姜黃素,其分子式為21H206?；衔颙2：黃色晶體,p163185,UVlaxH3H418n，1HNR(D3D,400Hz)

9、pp：4.633H,s,7.58(2H,dd,8.0,20),7.63(4H,d,8),7.94(2H,d,2),8.13(1H,s),8.33(2H,d,2),8.38(2H,d,2),10.47(1H,s),10.86(1H,s).EI-Sz：338(+,65),320(80),305(10),277(7),242(28),217(33),191(64),177(57),161(21),147(100),119(37),91(32),69(28),43(26),18(66)，與文獻(xiàn)5對(duì)照確定為脫甲氧基姜黃素，其分子式為20H185。化合物J3：黃色晶體,p208213,UVlaxH3H41

10、2n，1HNR(D3D,400Hz)pp：7.434H,dd,8.0,2.0,7.57(4H,s),8.32(6H,s),10.81(2H,s).EI-S/z：308(+,100),290(20),262(6),202(28),187(26),160(50),147(80),133(15),107(29),83(24),57(32),43(38),28(26)，與文獻(xiàn)6對(duì)照確定為雙脫甲氧基姜黃素，其分子式為19H164。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2姜黃素類化合物的抗腫瘤作用2.2.1體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)分為不同濃度的試藥組、不同濃度的DS組作溶媒對(duì)照、空白對(duì)照組。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞及肝癌細(xì)

11、胞用RPI1640培養(yǎng)液配成5104/l的細(xì)胞懸液，接種于96孔板上，200l/孔，置37，5%2環(huán)境下培養(yǎng)24h，待細(xì)胞貼壁后參加不同濃度的試藥及不同濃度的DS，每孔均為20l，6h后用TT法檢測(cè)細(xì)胞活性。2.2.2TT法測(cè)定細(xì)胞毒培養(yǎng)完畢后，每孔參加5g/l的TT應(yīng)用液20l/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，去上清液，參加200l/孔DS，震動(dòng)，待結(jié)晶完全溶解后用酶標(biāo)儀測(cè)定每孔D值，測(cè)量波長(zhǎng)為490n。2.2.3結(jié)果各種試藥對(duì)肝癌細(xì)胞的作用結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，0.01g/l雙脫甲氧基姜黃素，0.01g/l和0.001g/l脫甲氧基姜黃素能明顯抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。表1各種試藥對(duì)肝癌細(xì)胞的影響略與空白對(duì)

12、照組比擬，*P0.05，*P0.01各種試藥對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的作用結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，0.01g/l和0.001g/l雙脫甲氧基姜黃素，0.01g/l脫甲氧基姜黃素,0.01g/l和0.001g/l姜黃素能明顯抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。表2各種試藥對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的影響略與空白對(duì)照組比擬，*P0.05，*P0.013討論淋洗劑和展開(kāi)劑中參加微量的甲酸對(duì)姜黃素類化合物起離子抑制作用，使得別離不拖尾，保證它們完全別離。關(guān)于姜黃素類化合物抗腫瘤作用報(bào)道較多，但報(bào)道大多是藥材總提取物的藥理活性及其在臨床上的應(yīng)用,而對(duì)其物質(zhì)根底化學(xué)成分和藥效、作用機(jī)理及二者的相關(guān)性的研究卻少有報(bào)道。尋找與中醫(yī)用藥功能主治根本吻合的有效成分來(lái)控制藥材的品質(zhì)是研究的關(guān)鍵。我們用硅膠柱層析從姜黃中別離出3種姜黃素類化合物分別進(jìn)展了抗肝癌和子宮內(nèi)膜癌研究，為姜黃素類化合物的抗腫瘤作用研究提供直接根據(jù)，也為姜黃素類化合物抗其他方面的腫瘤提供了新的思路。參考文獻(xiàn)：1AnHPT,ahlA.PharalgyfurualngaJ.Plantaed,1991，57:1.2.Rasussen,K.Kvist.ASipleandeffiientseparatinftheuruins,theAntiprt-zalnstituentsfurualngaJ.Plataed,