食品毒理學(xué)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)學(xué)院

1、食品 毒 理 學(xué)高斌食品 毒 理 學(xué)高斌第七章食品毒理學(xué)實驗基第七章食品毒理學(xué)實驗基7.1 常用實驗動物選擇和處食學(xué)7.2 食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原7.3 毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分常用實驗動物選擇和處常用實驗動物選擇和處一、常用實驗動物特實驗動物是指經(jīng)人工飼育，對其攜帶的微生物實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚的，用于科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)、檢驗以及其他科學(xué)實驗的動物。毒理學(xué)常用的實驗動物有小鼠、大鼠兔等食學(xué)常用實驗動物選擇和處常用實驗動物選擇和處（一）小外貌特征：嚙齒類實驗動物中最小的動物，面部尖突，嘴臉前有19根觸須，耳聳立呈半圓形，眼睛大而鮮紅，尾長約與體長相等，有平食學(xué)衡、散熱、自衛(wèi)等功能常

2、用實驗動物選擇和處常用實驗動物選擇和處生長發(fā)育特征12年，易于飼養(yǎng)食學(xué)出生時體重1.5g左右，哺乳飼養(yǎng)11.5個月即達(dá)1820g，可供實驗使用發(fā)育成熟時體長905mm，體重20g。雄鼠450日齡性成熟，雌鼠450日齡性成熟。妊娠期19d，哺乳期20d，每胎產(chǎn)仔數(shù) 815只，年產(chǎn)仔69胎，小鼠的性活動可持續(xù)1年左右常用實驗動物選擇和處生活習(xí)常用實驗動物選擇和處生活習(xí)性：小鼠飼料消耗少，一只成量48g/d；飲水量37mL/d；排糞量1.42.8g/d；排尿量為13mL/d。小鼠對外界環(huán)境反應(yīng)敏感，在飼養(yǎng)條件食學(xué)對各種病原體及毒素具有易感性，物感，自發(fā)腫瘤多。溫度超過32，會造喜居光線暗淡的安靜環(huán)境

3、，喜歡啃咬，習(xí)于晝伏夜動。；常用實驗動物選擇和處解剖生理特征常用實驗動物選擇和處解剖生理特征：小鼠脾臟有明顯的造食學(xué)骨髓為紅骨髓而無黃骨髓，終生造血汗腺，尾有4條明顯，尾的背腹面各有條靜脈和一條動脈小鼠胃容量?。?1.5 mL），功能差，耐饑餓。腸道較短，盲腸不發(fā)達(dá)，故飼料為主常用實驗動物選擇和處（常用實驗動物選擇和處（二）大外貌特征：大鼠外貌特征與小鼠相似食學(xué)較大。一般成年大鼠體長要大于1820cm。大巴上有短毛和環(huán)狀鱗片，鱗片的數(shù)量比小鼠常用實驗動物選擇和處生長常用實驗動物選擇和處生長發(fā)育特征：大23年。成年食學(xué)重，雄性300400g，雌性250300g大鼠繁殖力強(qiáng)，雄鼠2月齡，雌鼠2.5

4、月齡性成熟，性周期45 d，妊娠期21，哺乳期21。每胎平均產(chǎn)仔8只，為全年動物常用實驗動物選擇和處生常用實驗動物選擇和處生活習(xí)性：大鼠喜歡夜間活動，喜啃咬、食多。對營養(yǎng)缺乏非常敏感，特別是維生素食學(xué)和氨基酸時，可發(fā)生典型的缺乏癥因此適于營養(yǎng)學(xué)研究對環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)，成年鼠很少患病。但對飼養(yǎng)環(huán)境中的濕度、粉塵、氨氣和硫化氫等極為敏常用實驗動物選擇和處解剖生理特常用實驗動物選擇和處解剖生理特征：大鼠汗腺極不發(fā)達(dá)食學(xué)上有汗腺，不耐高溫，不，無膽囊，臟再生能力強(qiáng)，切除6070的肝葉仍有再能力。腸道較短，盲腸較大，但不發(fā)維生素C。神經(jīng)系統(tǒng)比較饑餓與人類相似，包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外統(tǒng)常用實驗動物選擇和處常用實

5、驗動物選擇和處二、實驗動物的選擇和處（一）實驗動物的選1、實驗動物的選擇原選擇恰當(dāng)，可以節(jié)約人力、動物和時間。以最 小的代價最大限度地獲得可靠的實驗結(jié)果。否則，不僅會造成不必要的浪費(fèi)，而且會影響實驗結(jié)果的判斷食學(xué)常用實驗動物選擇和處實常用實驗動物選擇和處實驗動物的選擇原廣泛查閱文獻(xiàn)，積極進(jìn)行交進(jìn)行必要的動物預(yù)實驗相似性原則 ：結(jié)構(gòu)、功能及代謝方面與食學(xué)類應(yīng)具有相似性上要具有近似方面要具有相似性；生態(tài)或健康狀況近似性常用實驗動物選擇和處型、表常用實驗動物選擇和處型、表食學(xué)代謝型、易感性等特點上的差別也是性內(nèi)容。如不同種屬動物對病原微生性差異豬瘟兔化。易化性原簡單，又便于實驗分析的動物相容或相匹配

6、原則：所選用的動物要與實驗設(shè)計、實驗條件、實驗者的技術(shù)、方法及試劑性能等相匹配。常用實驗動物選擇和處可獲性常用實驗動物選擇和處可獲性原則：在不影響實驗質(zhì)量的選用最易獲得、最經(jīng)濟(jì)、最易飼養(yǎng)管理的動物是實驗研究必須堅持的原則。重復(fù)性和均一性原則：定的重要保證食學(xué)韓春雨：一種新編輯技術(shù)NgAgo-在科學(xué)研究中應(yīng)杜絕使用隨意交雜種動任何微生物控制的非標(biāo)準(zhǔn)動常用實驗動物選擇和處2010年常用實驗動物選擇和處2010年12月期間，東學(xué)院由于相關(guān)教師在實驗中使動物醫(yī)食學(xué)，導(dǎo)致自2011年3月至5月，學(xué)校27名學(xué)和1名教師陸續(xù)確布魯氏菌常用實驗動物選擇和處2、實驗常用實驗動物選擇和處2、實驗動物的選擇方實驗動

7、物物種選擇食學(xué)理學(xué)特征上與人最接近；自不太長；易飼養(yǎng)和實驗操作；經(jīng)濟(jì)并易于獲得的物種。常選擇是利用兩個物種：嚙齒類、非嚙如以與人相同接觸方式、大致相同劑量，兩個物種反應(yīng)，則人有可能以相同方式生毒性反應(yīng)；如不同物種毒性反應(yīng)差異很大，須研究外源化學(xué)物在不同物種中的代謝、動力學(xué)及毒作用機(jī)制，才可將實驗結(jié)果外推到人。常用實驗動物選擇和處常用實驗動物選擇和處實驗動物品系選擇食學(xué)法，獲于共同祖先的一群動物學(xué)控制分類可分為近交系、雜交群和近交系是指全同胞兄妹或親子之間連續(xù)交配20代以上而培育的純品系動物，如小鼠的津白、津白。雜交群（雜交1代，F(xiàn)1）是指兩個不交系之間有目的地進(jìn)行交配，所產(chǎn)生的第1代動物。7.

8、1用實驗動物選擇和處7.1用實驗動物選擇和處封閉群是指一個種群在5年以上不從外部進(jìn)新血緣，僅由同一品系的動物在固食學(xué)種小鼠、Wistar機(jī)交配繁殖的動物群，鼠、SD大鼠等 常用實驗動物選擇和處常用實驗動物選擇和處根據(jù)實驗動物遺傳的均一性排序，近交最高，雜交群次之，封閉群較食學(xué)版納微型豬近交系完成26世代的選育，近交系數(shù)常用實驗動物選擇和處常用實驗動物選擇和處實驗動物微生物控制的選擇：可將實驗動物分為4級。對于毒性試驗及毒理學(xué)研究應(yīng)適用級(或級以上)的動物。級/普通動物(CVA) ，應(yīng)沒有傳染給人的病食學(xué)級/清潔動物(CLA) ，種系清楚，沒有該物特有的疾病7.1用實驗動物選擇和處級/7.1用實

9、驗動物選擇和處級/無特定病原體動物(SPF) ，飼育在系統(tǒng)中，是通過無菌動物、食學(xué)障和無特定病原體動物獲得的，可有不叢，沒有致病病原體級/無菌動物(GFA) ，在自然界中并不在，是用無器中經(jīng)人工剖宮產(chǎn)取得代乳或人工哺乳，經(jīng)凈化培育得動物體內(nèi)不帶任何微生物。常用實驗動物選擇和處選擇：實驗常用實驗動物選擇和處選擇：實驗動物對外來化學(xué)物食學(xué)應(yīng)還存差異，應(yīng)注意實驗動物選擇重點：動物、體重、生態(tài)和健康狀況常用實驗動物選擇和處此外，同常用實驗動物選擇和處此外，同一物種、同一品系的實驗動物雄兩性通常對相同外源化學(xué)物毒性反應(yīng)類似，但雌雄兩性對化學(xué)物毒性敏感性上存在差別。食學(xué)毒理學(xué)試驗選用實驗動物的類型取決于同

10、一試驗中，組間體重差異應(yīng)小10%，各組間平均體重差異不應(yīng)超過5% 應(yīng)選用未產(chǎn)未孕的雌性動物。雌雄動物應(yīng)分籠飼養(yǎng)。但在某些試驗如顯性致死試驗、致畸試驗及繁殖試驗等，則需有計劃地合籠交配常用實驗動物選擇和處常用實驗動物選擇和處（二）實驗動物的處1、健康檢購進(jìn)后將雌雄分開飼養(yǎng)，一般進(jìn)行57d檢疫2、實驗動物的抓取和固定方小鼠的抓取固定方大鼠的抓取固定方食學(xué)常用實驗動物選擇和處3常用實驗動物選擇和處3鑒食學(xué)4、實驗動物染色法：品紅打耳孔標(biāo)牌烙印和標(biāo)記方等5、實驗動物被毛的去除方剪毛拔毛剃毛脫毛常用實驗動物選擇和常用實驗動物選擇和處食學(xué)常用實驗動物選擇和處6、實驗動物常用實驗動物選擇和處6、實驗動物的麻

11、常用麻醉劑：乙醚、戊巴比妥鈉/全麻 ；普魯食學(xué)乙醚麻醉特點：缸內(nèi)麻醉，動后即取出，此時肌肉松弛、角膜反射遲痛，可進(jìn)行實驗操作常用急救藥：中樞神經(jīng)系統(tǒng)-；心臟急救-腎上腺素、可常用實驗動物選擇和處三、實常用實驗動物選擇和處三、實驗動物的染毒和處食學(xué)（一）實驗動物染不同途徑吸收率：靜脈注射吸入腹腔注射皮下注射經(jīng)口皮內(nèi)注射他途徑常用實驗動物選擇和處常用實驗動物選擇和處1、經(jīng)口（胃腸道）染喂灌胃：小鼠0.21ml/次，大鼠14ml/經(jīng)口滴咽膠2、經(jīng)呼吸道染靜式吸入染毒：密閉染毒動式吸入染毒：染毒柜、機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)、配氣系氣管內(nèi)注食學(xué)常用實驗動物選擇和常用實驗動物選擇和處3、經(jīng)皮膚染4、注射染皮內(nèi)注射：表

12、皮-真皮下注腹腔注肌肉注靜脈注5、各種途徑染毒最大容經(jīng)口20ml/g（空腹）、經(jīng)皮2ml/g、靜脈 1ml/g（5min以上）、肌肉注射0.5ml/g/部位、吸入2mg/。食學(xué)常用實驗動物選擇和處常用實驗動物選擇和處（二）實驗動物處1、生物標(biāo)生物標(biāo)本：血液、尿液、膽汁、糞便常用采血部位及方法：割尾采血（小鼠次、大鼠0.30.5ml/次）；眼眶后靜脈叢釆（小鼠0.2l/次、大鼠0.5l/次）；心臟采血；摘眼球采血；斷頭采血；兔-耳緣靜脈/中央動脈。食學(xué)常用實驗動物選擇和處尿：常用實驗動物選擇和處尿：代謝籠法、導(dǎo)尿管食學(xué)膽：糞：常用實驗動物選擇和處常用實驗動物選擇和處2、安死術(shù)及其操作方安死術(shù)指用

13、公認(rèn)的、人道主義的方法處死動物的過程，即達(dá)到?jīng)]有驚恐或焦慮而安靜地、無大鼠小鼠的處死：脊椎脫臼法、斷頭法、打擊法、急性失血法、化學(xué)藥物（乙醚、氯仿）致等豚鼠、兔的處死：空氣栓塞法、急性食學(xué)破壞延腦法、化學(xué)藥物（10%KCl）等常用實驗動物選擇和處3、常用實驗動物選擇和處3、病理解剖和標(biāo)本留大體解剖。肉眼觀查，計算臟器系食學(xué)組織病理學(xué)檢查：10倍體積的10%福液固定，常規(guī)制片，鏡下觀察食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原體內(nèi)實食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原體內(nèi)實驗是以實驗動物物對實驗動物的毒性反應(yīng)，向人（原型）外推食學(xué)以期評估外源化學(xué)物對人的危性體外實驗則主要用于篩選制研究試驗設(shè)計是指為試驗研究制定出一個周密的、安排

14、合理的、科學(xué)性強(qiáng)的設(shè)計方案，將試驗對象隨機(jī)地分配到兩個或多個組中，對試驗急性對象施加某種干預(yù)或處理的效應(yīng)，觀察比較不同食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原在毒理學(xué)研究試驗設(shè)計時必須遵循統(tǒng)計學(xué)食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原在毒理學(xué)研究試驗設(shè)計時必須遵循統(tǒng)計學(xué)食學(xué)隨機(jī)、重復(fù)、對照是統(tǒng)計學(xué)3個基本原則樣本的代表性要求具有同質(zhì)性對照組的非實的條件均一致；在利用態(tài)學(xué)指標(biāo)的毒理學(xué)試驗，必須采用盲法觀察果，以消除實驗者觀察結(jié)果的偏性食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原樣本應(yīng)有足夠食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原樣本應(yīng)有足夠的大小和適當(dāng)?shù)闹貜?fù)次數(shù)食學(xué)計處理之間內(nèi)間的為此，各實（動物或培養(yǎng)物）組及整個試驗的全部操作都應(yīng)遵循隨機(jī)化一般可根據(jù)顯著性水準(zhǔn)、檢驗把

15、握度差、總體標(biāo)準(zhǔn)差等來估計樣本的大小食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原一食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原一、體外試驗設(shè)（一）溶劑/賦形所用溶劑/賦形劑不應(yīng)與受試物并對細(xì)胞（細(xì)菌）存活率、S9（etoni，表面活性劑）活性無影響。食學(xué)采用水作溶劑/賦形劑，若必須使用媒時，應(yīng)盡可能使溶媒濃度降低，以免影響細(xì)（細(xì)菌）存活率和增殖率食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（二）食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（二）受試首先了解受試物的結(jié)構(gòu)式、相對分子食學(xué)溫常壓下的狀態(tài)、沸點、密度揮發(fā)度、蒸氣壓、水溶性和脂溶性等理化特生產(chǎn)批號及純度，雜質(zhì)成分與含量等考慮受試物在試驗介質(zhì)中的溶解性、對細(xì)（細(xì)菌）的毒性和pH或滲透壓溶解性限度是出現(xiàn)沉淀的最低濃度。受物應(yīng)新

16、，除非穩(wěn)定性資料證實。食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（三）受試對選用的細(xì)胞系（菌株組）應(yīng)有本底資料證實此試驗系統(tǒng)穩(wěn)定，且對化學(xué)致突變物敏感，對處理產(chǎn)生的試驗效應(yīng)具有一定的特異性、反應(yīng)較穩(wěn)定代謝活化系統(tǒng)兩種情況食學(xué)食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（四食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（四）劑量設(shè)1、通過預(yù)試驗，在無代謝活化條件下利用細(xì)胞完整性和細(xì)胞生長（如融合程度、存活細(xì)胞計數(shù)食學(xué)或有和溶解性指數(shù)）等指標(biāo)來確定受試物細(xì)菌毒性可利用回變菌落數(shù)減少、背景菌減少，或細(xì)菌存活率下降等指標(biāo)來確定食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原2食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原2、對可溶性受試物，濃度高于10 mmol/L時因高滲透壓在哺乳動物細(xì)胞引起

17、損傷或人工假象，對細(xì)菌則無此影響。由于受試物的相對分子質(zhì)量并不清楚數(shù)情況下對可溶性無細(xì)胞/細(xì)菌毒性的受試物最食學(xué)：哺乳動物細(xì)胞試驗為10mmol/L劑5mg/L ；對細(xì)菌試驗為5mg/皿。當(dāng)受試或非常昂貴（如生物藥劑），最高劑量低10mmol/L或5mg/mL是可以接受的食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原3、對食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原3、對不溶性受試物最高劑量有爭食學(xué)本學(xué)者的資料表明，有的受試物僅在在細(xì)菌試驗畸變試驗中出現(xiàn)遺傳毒性哺乳動物細(xì)胞具有吞噬作用，細(xì)菌不具噬作用一般認(rèn)為無毒性的可溶于適當(dāng)?shù)娜軇┒蝗苡谠囼炁囵B(yǎng)液（介質(zhì)）中的受試物，最高劑量應(yīng)是溶解性限度（即產(chǎn)生沉淀的最低濃度）應(yīng)干擾終點的計數(shù)食品毒理

18、學(xué)試驗的設(shè)計原4、食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原4、對性的受試物，細(xì)菌試驗中最食學(xué)量應(yīng)該是有細(xì)菌毒性的劑量；哺乳動最高劑量應(yīng)該是有細(xì)胞毒性的劑量驗細(xì)胞應(yīng)達(dá)到1020存活率，畸和UDS試驗（程序外50存活率則可按5mg/皿或10mmol/L 進(jìn)行試驗以檢測雜質(zhì)試驗）細(xì)胞應(yīng)達(dá)食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原6食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原6、細(xì)菌試驗受試物至少設(shè)5個劑量組可為半對數(shù)，研究劑量-反應(yīng)關(guān)系時，可以選較小間距。哺乳動物細(xì)胞0 試驗受試物至少設(shè)5個量組，濃度范圍應(yīng)覆蓋2個10倍稀釋系列食學(xué)突變試驗至少設(shè)4個劑量組，組間距為10 倍畸變和SCE試驗（姐妹染色單體交間試驗）至少設(shè)3個劑量組，組間距為2 10倍。個劑量檢

19、測點至少有23個平行樣本食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（五）代謝活細(xì)胞（細(xì)菌）應(yīng)在有或無代謝活化的條件下暴露于受試物。代謝活化系統(tǒng)常用的是經(jīng)酶誘導(dǎo)劑誘的雄性成年大鼠肝勻漿9000 g離心上清液食學(xué)及相應(yīng)的輔因子H再生系統(tǒng)）。S9在養(yǎng)液中終濃度范圍為110(V/V)代謝活化系統(tǒng)的選擇和條件依賴于受試物的類別。對體外哺乳動物細(xì)胞試驗，還可利用大鼠肝原代培養(yǎng)細(xì)胞等作為代謝活化系統(tǒng)食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（六）食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（六）對1、每個試驗應(yīng)包括在有和無食學(xué)時進(jìn)行的陽性(溶劑/賦形劑在利用代謝活化時，陽性對照應(yīng)是間接致變物(需代謝活化致突變反應(yīng)的2、陽性對照的劑量應(yīng)選擇其劑量

20、-反應(yīng)部分，并歷史性資料(歷史其作為試驗質(zhì)量控制的措施之食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原3(食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原3(溶劑/賦形劑)食學(xué)對照的處理方法除無受試物外在處理與劑量組相同也應(yīng)包括未處理(空白)對照組，除非資料證明，所選用的溶劑/賦形劑無細(xì)胞致突變性食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（七）重食學(xué)由質(zhì)量控質(zhì)良好的實驗得到明陽性結(jié)果，不強(qiáng)調(diào)要求重復(fù)可疑結(jié)果則應(yīng)重復(fù)試驗，最好改變劑量范圍/量間隔、改變S9濃度或改變試驗方法進(jìn)行重復(fù)食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原二食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原二、體內(nèi)毒理學(xué)試驗設(shè)（一）實驗動1、動物選首選的實驗動物應(yīng)該是其對受試物的代謝過程、生理反應(yīng)和生化特性基本上與人接近，

21、對受試物食學(xué)處較敏感，對處產(chǎn)生的試驗效應(yīng)有一定的特異性，產(chǎn)生的反應(yīng)較穩(wěn)定，如無此資料，則應(yīng)選毒性反應(yīng)最大的實驗動物，同時要考慮價格便宜、易于獲取、易飼養(yǎng)和繁殖。食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原、食學(xué)、體重、健康狀況及病理模型的等食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原2、動物數(shù)食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原2、動物數(shù)動物數(shù)量是重復(fù)原則的重要體食學(xué)多越能減差異的誤差樣本的研究結(jié)果推斷總體參數(shù)的統(tǒng)計毒理學(xué)研究中各組動物數(shù)取決于很，實驗?zāi)康暮驮O(shè)計，要求的敏感度、實性等，統(tǒng)計學(xué)上有專門公式進(jìn)行樣本含量計算。食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原各組動物食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原各組動物數(shù)的設(shè)計應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求食學(xué)性試驗的動物性規(guī)定為小

22、動物(小鼠、大鼠、魚等)每組1030只，量資料不少于10只/組，計數(shù)資料每組動物數(shù)應(yīng)適當(dāng)增加；若按劑量分成35個劑量組時，8只/組也動物總數(shù)不少于30只可，但每中等動物(兔、豚鼠等)每組820只，計料每組不少于6只，計數(shù)資料每組不少于15只大動物(貓、犬、猴等)每組515只，計量資料每組不少于5只，計數(shù)資料每組不少于10只。食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（二食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（二）受試1、資應(yīng)首先了解受試物的結(jié)構(gòu)式、相對分食學(xué)常溫常壓下的狀態(tài)、沸點、密度、閃點揮發(fā)度、蒸氣壓、水溶性和脂溶性等理化特性生產(chǎn)批號及純度，雜質(zhì)成分與含量，在溶媒、形劑或飼料中的穩(wěn)定性等資料，對預(yù)估受試物毒性、選擇適當(dāng)?shù)娜軇?/p>

23、、給予方式、受試物的配制和有重要意義食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原2食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原2、處受試物需新鮮配制，如果有資料表明食學(xué)混懸穩(wěn)定，也可不必新鮮配制應(yīng)根據(jù)受試物的特性選擇合適的溶劑或（將受試物溶解或懸浮在合適的載體中）水，對于脂溶性物質(zhì)可選玉米油，不溶于水或油類物質(zhì)，應(yīng)選擇無毒賦形劑（如淀粉、甲基素、蔗糖酯等）配制混懸液，賦形劑用量盡可減至最少食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原受試物摻入飼料以不影響動物攝食、為原則，摻入量一般小于飼料的5(W/W)，必要時可達(dá)到10(W/W)，若摻入量大于飼料的5，應(yīng)調(diào)整對照組飼料營養(yǎng)素水平（食學(xué)基素等，摻入量等同高劑量），量組飼料營養(yǎng)素水平保持一

24、致食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原3、給予方因為食品毒理試驗中的研究對象是食品，故給予途徑以經(jīng)口為好。給予方法可通過灌胃、飲水、摻入飼料。灌胃量一般不超過動物體重的13，小鼠20g給0.4 mL，大鼠100g一般給1 mL計算。大鼠飼進(jìn)食量通常按體重的8-10折算食學(xué)食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（三）對1、對照條毒理學(xué)研究中設(shè)立對照的目的，是消食學(xué)非試的影響，減少試驗操作的誤差，對驗質(zhì)量進(jìn)行控制。因此，設(shè)立的對照必須具備下條件，否則對照無效，反而造成假象，導(dǎo)致錯誤的結(jié)論：對等（觀察對象、實驗條件、操作或觀察）同步、專門設(shè)置、例數(shù)相等食品毒理學(xué)試驗的設(shè)食品毒理學(xué)試驗的

25、設(shè)計原2、對照類應(yīng)該根據(jù)研究目的和研究條件，選擇適當(dāng)?shù)膶φ招问?，在一個試驗中至少要設(shè)立一個對照組。毒理學(xué)試驗常用的對照有4種：未處理(空白)對照組(必要時設(shè)食學(xué)食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（四）劑量分在毒理學(xué)試驗中，最重要的就是研究劑量-反應(yīng)(效應(yīng))關(guān)系。劑量-反應(yīng)(效應(yīng))關(guān)系的存在是確定受試物與有害作用的因果關(guān)系的重要依據(jù)，也可證明實驗結(jié)果的可靠性。因此，在毒理學(xué)試驗中，體內(nèi)試驗一般至少要設(shè)3個劑量組(即高劑量組、中劑量組、低劑量組)，希望能得到滿意的劑量-反應(yīng)(效應(yīng))食學(xué)食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原應(yīng)根據(jù)循序漸進(jìn)的原則設(shè)置劑量，即試驗為短期毒性試驗提供劑量依據(jù)

26、食學(xué)為亞慢性、慢性試驗提供劑量依據(jù)等食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原在設(shè)置食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原在設(shè)置3個劑量組的試驗中，一般要求，組應(yīng)出現(xiàn)明確的有害作用，但不會引起動食學(xué)（急性毒性試驗例外），即使，應(yīng)少于10的動物數(shù)，或者高劑量組劑量已可操作的極限劑量（如大鼠/小鼠灌胃最大容量低劑量組應(yīng)不出現(xiàn)任何可觀察到的有害作用（當(dāng)于E），由于整體動物的不敏感，低劑量組劑量應(yīng)當(dāng)高于人可能的接觸劑量，至少等于人可能的接觸劑量；中劑量組的劑量介于高劑量組和低劑量組之間，應(yīng)出現(xiàn)輕微的毒性效應(yīng)（當(dāng)于L）。食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原在食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原在急性毒性試驗測定LD50或LC50數(shù)根據(jù)選用的設(shè)計和統(tǒng)計學(xué)方法而定，可以

27、是4組，也可以是57組。根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，希望所設(shè)計的中間劑量組的劑量與最后得到的50 (L50)接近。亞慢性毒性試驗的高劑量應(yīng)該用急性毒性LD50的某個分?jǐn)?shù)或LD01食學(xué)在長期試驗，最高劑量選擇為毒性試驗確定的最大耐受劑量(MTD)食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（五）食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（五）觀察指食學(xué)一般是通過適宜的、具體的指標(biāo)來觀受試物作用于整體動物產(chǎn)生的結(jié)果。指標(biāo)和測定方法是科研設(shè)，通常從以下幾個方面進(jìn)行考慮食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原1、指標(biāo)的有效2、指標(biāo)的客觀3、指標(biāo)的準(zhǔn)確度和精密4、指標(biāo)的靈敏5、指標(biāo)的特異6、選擇指標(biāo)的數(shù)7、指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)食學(xué)食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原食品毒理學(xué)試

28、驗的設(shè)計原（六）試驗期某些試驗（致畸試驗和多代繁殖試驗）的試驗期限是由受試動物物種或品系決定的。而其他毒性試驗的期限在某種程度上由定義所決定。如急性毒性是1次或1d14d，亞慢性毒性試驗規(guī)定為給予受試物持食學(xué)的10，對大鼠和小鼠為90d，實驗動狗應(yīng)為1年食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原慢性毒食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原慢性毒性試驗試驗一般規(guī)定為持續(xù)食學(xué)驗動的大部分。又可分為兩類試驗期限的試驗，或直到最敏某一水平（通常為80）的試驗食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計食品毒理學(xué)試驗的設(shè)計原（七）試驗設(shè)計常用方完全隨機(jī)設(shè)配對設(shè)隨機(jī)區(qū)組設(shè)析因設(shè)拉丁方設(shè)食學(xué)毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分統(tǒng)計學(xué)設(shè)計和分析的目標(biāo)是消除潛在

29、源和減少偶然性，通過對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行歸納整理和統(tǒng)計分析，概括出受試物對生物體作用的普遍規(guī)律，取得有價值的研究結(jié)論。在毒理學(xué)試驗的試驗設(shè)計和實施時食學(xué)數(shù)等方面應(yīng)遵循統(tǒng)計學(xué)原則的應(yīng)用毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分一、毒理學(xué)試驗的數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計食學(xué)通過對觀用定量的辦法測量某量大小所得到的資料，稱為計量資料。如動身長/cm、體重/kg等描述性指標(biāo)有平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差推斷性分析有t檢驗、u檢驗、方差分析、相關(guān)與回歸分析等。毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分2、分類資毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分2、分類資將觀食學(xué)按某物或類別分組點各組的觀數(shù)目所得到的資料，如實分雌/雄，實驗結(jié)果分陽性動物等描述性指標(biāo)誤等推斷性分析主

30、要有u檢驗、2檢驗、Poison分布等。比及率和相對比及毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分3、等級資食學(xué)按某種屬性的不同程度分?jǐn)?shù)目所得到的資料定為顯效、有效、無效；程度分輕、檢測結(jié)果分、 、等，描述性指標(biāo)是幾何均數(shù)、對數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差推斷性分析有Ridit毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分4、數(shù)據(jù)類型轉(zhuǎn)數(shù)據(jù)類型的相互轉(zhuǎn)化，如血紅蛋白屬計量資料，若將血紅蛋白按正常與異常分組，資料便轉(zhuǎn)換為計數(shù)資料，若按輕、中、重分組，資料便轉(zhuǎn)換為等級資料食學(xué)在分析中有時需要將定性指標(biāo)數(shù)量化如將多項效果按程度不同轉(zhuǎn)化為評分，分別用1，2，3表示，則可按計量資料處理毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分毒理學(xué)試驗結(jié)果處理

31、和分5、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換的目的是穩(wěn)定方差；直線化；使分布正態(tài)化或接近正態(tài)，因為有許多檢驗廣泛適用食學(xué)于正態(tài)分布，而且這些檢驗方法相對較為簡毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分二、統(tǒng)計學(xué)意義和生物學(xué)意毒理學(xué)試驗結(jié)果評價步驟，考慮：是否具有計學(xué)意義有無生物學(xué)意義/真實效應(yīng)是否具有毒理學(xué)意義/有害效應(yīng)。綜合考慮生物學(xué)意義和統(tǒng)計學(xué)意義后，對毒理學(xué)實驗結(jié)果做出科學(xué)的判斷和解釋。食學(xué)毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分統(tǒng)毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分統(tǒng)計檢驗的假設(shè)方法是以統(tǒng)計量的抽樣分布為根據(jù)的食學(xué)結(jié)論是概率性的，不肯定或等同于有或無生物學(xué)/毒理學(xué)意義一般來說，具有統(tǒng)計學(xué)意義是具有生的必要條件之一。正確地利用統(tǒng)計學(xué)假設(shè)檢驗

32、的結(jié)果有助于確定實驗結(jié)果的生物學(xué)關(guān)聯(lián)。毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分（一）處理相關(guān)反應(yīng)的確當(dāng)處理組與對照組之間差別有顯著性時，首先需要確定這種差別是否反映了與受試物處理相關(guān)的真實效應(yīng)，還只是一個偶然結(jié)果。處理組與對照組是否存在顯著性差異決食學(xué)于一些相互關(guān)聯(lián)的影：包括劑系、可重現(xiàn)性、相關(guān)的發(fā)現(xiàn)、差異的型、在雌雄動物中均發(fā)生等毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分1、劑量相關(guān)趨劑量反應(yīng)關(guān)系是反映效應(yīng)與處理相關(guān)的最重要的指標(biāo)之一，即效應(yīng)大小隨劑量水平的增加而發(fā)生改變食學(xué)毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分2、反應(yīng)重現(xiàn)在研究中不同時間點，對照組與處理組之間都有差異，這個差異就很

33、可能與處理有關(guān)。如果在同一物種實驗動物其他的獨(dú)立研究中，受試物產(chǎn)生同樣的差異，或在另一個物種中發(fā)生相同差異，那么更證明差異與處理有關(guān)系。如研究結(jié)果不可重現(xiàn)，尤其是利用同物的時候，那么此差異很可能是偶然食學(xué)毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分3、相毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分3、相關(guān)發(fā)評價組間差異意義的另一個影響因子是相關(guān)的發(fā)現(xiàn)。例如，與對照組相比，處理組動物食學(xué)ALT活性升高，如伴隨AST及肝壞死，么這種效應(yīng)可能與處理有關(guān)影來進(jìn)行評價毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分4、組毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分4、組間差異的大小與類處理組與對照組之間差異的大小及類型也提示此差異與受試物處理可能關(guān)聯(lián)。例如，處理組食學(xué)重量是對照組的2倍要比增加

34、10更動考慮是與處理相關(guān)被處理動ALT活性顯著降低一無臨床意義，而同樣大小的活性增加毒性效應(yīng)的指征顯然，以大小和類型的估計一種改變的意義，需要知道數(shù)據(jù)的正常范圍與趨勢。毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分5毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分5差食學(xué)確定處理相關(guān)效應(yīng)的意義還需考慮這否在不的實驗動物中均出現(xiàn)因為與處理相關(guān)的效應(yīng)經(jīng)常在雌雄動以表現(xiàn)，如果處理組與對照組的差異僅在一種的動物中發(fā)生，那么這種受試物可能與效應(yīng)沒有關(guān)聯(lián)例如，雄性大鼠的P450依賴的單氧化酶系統(tǒng)活性較高，使它們對一些化學(xué)物的代謝解毒能力較強(qiáng)。所以，這些化學(xué)物在雄性大鼠引起的毒性效應(yīng)就會比雌性大鼠小毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分6、差異出現(xiàn)的時間大多數(shù)受試物一次給予后出現(xiàn)真正的食學(xué)是在幾天內(nèi)而不是。對于大多數(shù)受次給藥的真正差別可能發(fā)生僅僅在幾而不是在之后。也就是說，在處理后6個月有真實的差別，在3個月時完全缺乏是不常見的。毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分（二）參考毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分（二）參考范正如統(tǒng)計學(xué)的比較一樣，食學(xué)考范圍可用于評對照組與處理觀差別的工具。從事安全性評價毒理應(yīng)建立雖然來自文獻(xiàn)及其的歷史對照值范圍的對照動可能有幫助，但不能代替資料毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分一般來說毒理學(xué)試驗結(jié)果處理和分一般來說，的歷史對照值是食學(xué)的1012次實驗研究對照組均值計算對照值和標(biāo)準(zhǔn)差、最小值和最大值研究要用來自于同