漿膜腔積液有形成分檢查顯微鏡檢查法作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

1、漿膜腔積液有形成分檢查顯微鏡檢查法作業(yè)指導(dǎo)書(shū)1. 實(shí)驗(yàn)原理在顯微鏡下對(duì)漿膜腔積液有形成分進(jìn)行計(jì)數(shù)和分類(lèi)檢查。2. 標(biāo)本采集：2.1 標(biāo)本種類(lèi)：漿膜腔積液標(biāo)本由臨床醫(yī)師行胸腔穿刺術(shù)，腹腔穿刺術(shù)或心包穿刺術(shù)分別采集。2.2 標(biāo)本要求：送驗(yàn)標(biāo)本最好留取中段液體于消毒容器試管或消毒瓶?jī)?nèi)，常規(guī)及細(xì)胞學(xué)檢查約留取2毫升。2.3 為防止出現(xiàn)凝塊，細(xì)胞變性、細(xì)菌破壞自溶等，除應(yīng)即時(shí)送驗(yàn)及檢查外，常規(guī)及細(xì)胞學(xué)檢查宜用EDTAK2抗凝，加留1管不加任何抗凝劑用以觀察有無(wú)凝固現(xiàn)象。3. 標(biāo)本儲(chǔ)存：立即送檢。4. 標(biāo)本運(yùn)輸：室溫運(yùn)輸。5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：污染，久置標(biāo)本。6. 實(shí)驗(yàn)材料：細(xì)胞計(jì)數(shù)板；紅細(xì)胞稀釋液；瑞氏血

2、細(xì)胞染色液，生產(chǎn)廠家：（臺(tái)資）珠海貝索生物技術(shù)有限公司。7. 實(shí)驗(yàn)儀器：7.1 儀器名稱(chēng)： OLYMPUS 顯微鏡7.2 儀器廠家：OLYMPUS7.3 儀器型號(hào)：OLYMPUS CH308. 操作步驟8.1 細(xì)胞總數(shù)：細(xì)胞計(jì)數(shù)方法與腦脊液相同，計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)把全部有核細(xì)胞（包括間皮細(xì)胞）都列入細(xì)胞計(jì)數(shù)中。8.2 白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)應(yīng)在抽出后立即離心沉淀，用沉淀物涂片經(jīng)瑞氏染色進(jìn)行分類(lèi)。8.3 觀察其它有形成分：結(jié)晶：寄生蟲(chóng)，脫落細(xì)胞等。9. 結(jié)果判斷與分析9.1 細(xì)胞計(jì)數(shù)：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)滲出液與漏液的鑒別意義不大。文獻(xiàn)報(bào)告惡性腫瘤引起的積液壓中血性者占50-85%。當(dāng)積液中的紅細(xì)胞大于0.11012/L

3、時(shí)應(yīng)考慮可能是惡生腫瘤、肺栓塞或創(chuàng)傷所致，也要考慮結(jié)核病和穿刺損傷的可能。紅細(xì)胞增多時(shí)不能使用血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)，因積液中沉渣會(huì)引起假性增加，以及纖維蛋白存在而堵塞計(jì)數(shù)小孔。白細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)滲出液中和漏出液和鑒別有參考價(jià)值?，F(xiàn)認(rèn)為漏出液中的白細(xì)胞數(shù)常不超過(guò)100106/L，如果超過(guò)500106/L多為滲出液。結(jié)核性與癌性積液中的白細(xì)胞通常超過(guò)200106/L。而化膿性積液時(shí)往往1000106/L。9.2 白細(xì)胞分類(lèi)：漏出液中細(xì)胞較少，以淋巴及間皮細(xì)胞為主。滲出液則細(xì)胞較多，各種細(xì)胞增加的臨床意義如下。 9.2.1 中性分葉核粒細(xì)胞增多：常見(jiàn)于化膿性滲出液，細(xì)胞總數(shù)也常超過(guò)1000106/L。在結(jié)核性

4、漿膜腔炎早期的滲出液中，也可見(jiàn)以中性粒細(xì)胞增加為主。9.2.2 淋巴細(xì)胞增多：主要提示慢性炎癥、如結(jié)核、梅毒、腫瘤或結(jié)締組織病所致滲出液。有條件者可測(cè)定T細(xì)胞亞群，一般積液中T淋巴細(xì)胞數(shù)大于外周血中T細(xì)胞。若胸水中見(jiàn)到漿細(xì)胞樣淋巴細(xì)胞可能是增殖型骨髓瘤。少量漿細(xì)胞則無(wú)臨床意義。9.2.3 嗜酸性粒細(xì)胞增多：常見(jiàn)于變態(tài)反應(yīng)和寄生蟲(chóng)所致的滲出液。此外多次反復(fù)穿刺刺激、結(jié)核性滲出液的吸收期、人工氣胸、手術(shù)后積液、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、間皮瘤等積液中嗜酸性粒細(xì)胞亦增多。9.2.4 間皮細(xì)胞增多：提示漿膜刺激或受損，該細(xì)胞在瑞氏染色后，大小約為15-30m，圓形、橢圓形或不規(guī)則形，核在中心或偏位，多為一個(gè)核，

5、也可見(jiàn)兩個(gè)或多個(gè)核者，均紫色，胞質(zhì)多呈淡藍(lán)色有時(shí)有空泡。間皮細(xì)胞在滲出液中退變，使形態(tài)不規(guī)則，還有幼稚型間皮細(xì)胞，染色質(zhì)較粗糙致密，但核仁不易見(jiàn)到，都應(yīng)注意與癌細(xì)胞區(qū)別。9.2.5 其它細(xì)胞：炎癥情況下，在大量出現(xiàn)中性粒細(xì)胞的同時(shí)，常伴有組織細(xì)胞出現(xiàn)。紅斑狼瘡細(xì)胞可偶見(jiàn)于漿膜腔積液中。在陳舊性出血的積液中可見(jiàn)到含鐵的血黃色細(xì)胞。9.3 結(jié)晶：膽固醇結(jié)晶呈無(wú)色透明，缺陷角四方形板狀，可見(jiàn)于陳舊的性胸水中脂肪性及膽固醇性胸膜炎的胸炎中，漿膜腔出血后可見(jiàn)到含鐵血黃素顆粒。偶見(jiàn)夏科-萊登結(jié)晶。9.4 寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)：可將乳糜樣漿膜腔積液離心沉淀后，將沉淀物倒在玻片上檢查有無(wú)微絲蚴。包蟲(chóng)病胸水可以檢查出棘球

6、蚴的頭節(jié)和小鉤。阿米巴病的積液中可以找到阿米巴滋養(yǎng)體。9.5 細(xì)胞學(xué)檢查：懷疑惡性腫瘤時(shí)可用細(xì)胞玻片離心沉淀儀收集積液中細(xì)胞，作巴氏或H-E染色，如見(jiàn)有多量形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞胞體大小不等，核偏大并可見(jiàn)核仁及胞質(zhì)染色較深的細(xì)胞應(yīng)高度重視，認(rèn)真鑒別。必要時(shí)用多克隆或單克隆抗體作免疫組織化學(xué)檢查。必要時(shí)作染色體檢查，這是診斷惡性腫瘤有效檢查方法之一，陽(yáng)性率可達(dá)75%左右。染色體分析多數(shù)為非整倍體，以超過(guò)2倍體及多倍體為主。常伴有特殊形態(tài)的染色體，如巨大染色體、微小染色體、有時(shí)有染色體斷裂、移位、鑲嵌現(xiàn)象。10. 質(zhì)量控制：進(jìn)行室內(nèi)工作人員比對(duì)分析，要求差異在10以?xún)?nèi)。11. 方法學(xué)評(píng)價(jià)：參見(jiàn)漿膜腔積液化學(xué)檢查作