腦膜炎細(xì)菌課件

1、流行性腦脊髓膜炎及細(xì)菌性腦脊髓膜炎實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)檢測(cè)方法山東省立醫(yī)院檢驗(yàn)科李平9/8/2022山東省立醫(yī)院病理學(xué)基礎(chǔ)腦脊髓膜：由三層膜組成，保護(hù)腦和脊髓軟腦膜蛛網(wǎng)膜硬腦膜腦（脊髓）膜炎: 軟腦膜和蛛網(wǎng)膜炎癥，腦脊液呈化膿性改變（腦膜）腦炎：腦組織炎癥，多為病毒引起。9/8/2022山東省立醫(yī)院細(xì)菌性腦膜炎常見病原 腦膜炎奈瑟菌流感嗜血桿菌肺炎鏈球菌葡萄球菌大腸桿菌豬鏈球菌隱球菌B組鏈球菌結(jié)核桿菌單增李斯特菌9/8/2022山東省立醫(yī)院形態(tài)學(xué)觀察生物化學(xué)特征和鑒定血清分型及免疫學(xué)分類分子生物學(xué)相關(guān)檢測(cè)技術(shù)細(xì)菌檢測(cè)技術(shù)9/8/2022山東省立醫(yī)院腦膜炎奈瑟菌奈瑟菌屬（Neisseria）屬于-變形菌

2、類，為革蘭氏陰性菌。 腦膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis） 乳糖奈瑟菌（Neisseria lactamica） 粘液奈瑟菌（Neissetia mucosa） 深黃色奈瑟菌（Neisseria perflava） 咽奈瑟菌（Neisseria pharyngis） 多糖奈瑟菌（Neisseria polysaccharea） 干燥奈瑟菌（Neisseria sicca） 微黃色奈瑟菌（Neisseria subflava） 淋病奈瑟菌（Neisseria gonorrhoeae）9/8/2022山東省立醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室常用方法細(xì)菌形態(tài)鏡下觀察菌落形態(tài)觀察乳膠凝集試驗(yàn) CSF

3、沉淀物的革蘭染色和乳膠凝集試驗(yàn)可以作為腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌（三種病原體）引起的細(xì)菌性腦膜炎的初步診斷。9/8/2022山東省立醫(yī)院乳膠試劑盒在待檢標(biāo)本上滴加乳膠懸液混勻輕搖反應(yīng)觀察結(jié)果9/8/2022山東省立醫(yī)院腦膜炎奈瑟菌鏡下是革蘭陰性雙球菌，成卵圓形和腎形，0.8m0.6m常成對(duì)排列腦膜炎奈瑟菌鏡下觀察9/8/2022山東省立醫(yī)院菌落形態(tài)觀察腦膜炎奈瑟菌在培養(yǎng)1824小時(shí)后菌落直徑約13mm、圓形、表面突起、光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、半透明、不溶血、無色素、有莢膜黏液樣。在血瓊脂上是灰白色比在巧克力瓊脂培養(yǎng)基上更不透明。9/8/2022山東省立醫(yī)院生化實(shí)驗(yàn)糖類產(chǎn)酸奈瑟球菌屬和

4、嗜血菌屬鑒定拭條（API NH）9/8/2022山東省立醫(yī)院結(jié)果判定腦膜炎奈瑟菌API NH試劑盒流感/副流感嗜血桿菌9/8/2022山東省立醫(yī)院流感嗜血桿菌病原學(xué)：流感嗜血桿菌簡(jiǎn)稱流感桿菌，屬孤菌科嗜血桿菌屬。形態(tài)呈無色透明（或灰白色），圓形、光滑，邊緣整齊，露滴狀，且散出鼠穴的氣味菌落，有莢膜菌株的菌落呈輕度粘稠。有莢膜菌株形成光滑的菌落，并且該菌落比同樣過夜培養(yǎng)的無莢膜的菌落大9/8/2022山東省立醫(yī)院流感嗜血桿菌鏡下形態(tài)流感嗜血桿菌是一大群無動(dòng)力、無芽胞和鞭毛、呈球桿狀、桿狀或長(zhǎng)絲狀等多形性的革蘭陰性桿菌，兩端鈍圓，長(zhǎng)0.3m1.5m，寬為0.3m-0.4m在無CO2環(huán)境中培養(yǎng)則菌落

5、較小。 9/8/2022山東省立醫(yī)院B-H培養(yǎng)基鑒定（ XV 因子鑒定）0.5麥?zhǔn)蠁挝粦腋∫海荒X心浸液（B-H）瓊脂平板上；V因子，X因子，XV因子9/8/2022山東省立醫(yī)院乳膠凝集試驗(yàn)9/8/2022山東省立醫(yī)院鏈球菌鏈球菌分類甲型溶血性鏈球菌：稱甲型溶血或溶血，溶血環(huán)中的紅細(xì)胞并未完全溶解。多為條件致病菌。乙型溶血性鏈球菌：稱乙型溶血或溶血，溶血環(huán)中的紅細(xì)胞完全溶解，致病力強(qiáng)丙型鏈球菌：無溶血環(huán)，一般不致病9/8/2022山東省立醫(yī)院鏈球菌鏈球菌分類蘭氏分類：按多糖類抗原（C抗原）將鏈球菌分成A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S和T群(其中缺I、J群) ，近

6、年又增加U、V群，共20群，每個(gè)群有1個(gè)或多個(gè)種。其中引起人類感染的90%鏈球菌屬于A群，而A群鏈球菌大部分是乙型溶血性鏈球菌。9/8/2022山東省立醫(yī)院鏈球菌肺炎鏈球菌在血瓊脂培養(yǎng)基上可形成細(xì)小、灰色、有光澤的扁平菌落，菌落周圍有草綠色溶血環(huán)。豬鏈球菌形成直徑l2毫米的細(xì)小菌落，灰白色，半透明，邊緣整齊，凸起，光滑，溶血（有時(shí)呈弱溶血或溶血不明顯），48小時(shí)后可有草綠色色素沉著。9/8/2022山東省立醫(yī)院鏈球菌鏡下特征肺炎鏈球菌呈矛頭狀，成雙排列，故又名肺炎雙球菌 ，革蘭染色陽性 9/8/2022山東省立醫(yī)院鏈球菌鏡下特征剛分離的豬鏈球菌，典型的革蘭氏陽性鏈球菌，鏈長(zhǎng)達(dá)二十多個(gè)9/8/2

7、022山東省立醫(yī)院鏈球菌生化特征鏈球菌生化特性往往差異較大，一般難以作為分類依據(jù)梅里埃API生化鑒定系統(tǒng)API 20 strep可鑒定9/8/2022山東省立醫(yī)院奧普托欣敏感性試驗(yàn)如果一個(gè)溶血菌株分離物暈輪大于14mm時(shí)，即為肺炎鏈球菌；分離物暈輪介于12mm與14mm之間，還應(yīng)該進(jìn)行膽汁溶解試驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)。9/8/2022山東省立醫(yī)院膽汁溶解試驗(yàn)肺炎鏈球菌3537培養(yǎng)2小時(shí)后，所有的混濁都消失，細(xì)胞溶解。相反，質(zhì)控管仍然混濁9/8/2022山東省立醫(yī)院金黃色葡萄球菌鏡下形態(tài)典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8m左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。顯微圖像金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，

8、革蘭氏染色陽性。9/8/2022山東省立醫(yī)院金黃色葡萄球菌生化特征血漿凝固酶試驗(yàn)： 玻片法：5min內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊或顆粒狀凝塊時(shí)，而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固現(xiàn)象者為陽性，如兩者均無凝固現(xiàn)象則為陰性。凡玻片試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)或鹽水滴與血漿滴均有凝固現(xiàn)象，再進(jìn)行試管凝固酶試驗(yàn)。加3過氧化氫數(shù)滴；或直接滴加3過氧化氫于不含血液的細(xì)菌培養(yǎng)物中，立即觀察結(jié)果。有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性。9/8/2022山東省立醫(yī)院大腸桿菌大腸埃希氏菌(E. coli)通常稱為大腸桿菌，是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的，在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)，一直被當(dāng)作正常腸道菌群的組成部分，認(rèn)為是非致病菌。直到20世紀(jì)中葉，才認(rèn)識(shí)到一些特殊血

9、清型的大腸桿菌對(duì)人和動(dòng)物有病原性9/8/2022山東省立醫(yī)院大腸肝菌菌落特征在血瓊脂平板上，有些菌株產(chǎn)生型溶血。在鑒別性或選擇性培養(yǎng)基上形成有顏色、直徑23mm的光滑型菌落。 9/8/2022山東省立醫(yī)院大腸桿菌鏡下形態(tài)革蘭氏陰性短桿菌，大小0.513微米。周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無芽孢9/8/2022山東省立醫(yī)院大腸桿菌生化學(xué)鑒定 該菌在雙糖鐵斜面上經(jīng)培養(yǎng)后，斜面和底層均為黃色，產(chǎn)酸產(chǎn)氣；或僅產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，無動(dòng)力 API 20E生化鑒定系統(tǒng)9/8/2022山東省立醫(yī)院新型隱球菌新型隱球菌（Cuyitococcus Neofonmans ）又名溶組織酵母菌(Torula Histolytica )，是

10、土壤，鴿類，牛乳、水果等的腐生菌，也可存在人口腔中，可侵犯人和動(dòng)物，一般為外源性感染，但也可能為內(nèi)源性感染，對(duì)人類而言，它通常是條件致病菌。氟胞嘧啶新型隱球菌性腦膜炎(cryptococcalmeningitis)是由新型隱球菌感染腦膜及腦實(shí)質(zhì)所引起的亞急性或慢性腦膜炎。是真菌性腦膜炎最常見的一種。9/8/2022山東省立醫(yī)院新型隱球菌菌落特征在沙保氏瓊脂及血瓊脂培養(yǎng)基上，于25及37不能生長(zhǎng)，而非病原性隱球菌在37不能繁殖。培養(yǎng)數(shù)日后生成酵母型菌落，初呈白色，1周后轉(zhuǎn)淡黃或棕黃、濕潤(rùn)粘稠，狀似膠汁。9/8/2022山東省立醫(yī)院新型隱球菌墨汁染色本菌在組織液或培養(yǎng)物中呈較大球形，直徑可達(dá)5-2

11、0um，菌體周圍有肥厚的莢膜，折光性強(qiáng)，一般染料不易著色，用墨汁陰性顯影法鏡檢，可見到透明莢膜包裹著菌細(xì)胞，菌細(xì)胞常有出芽，但不生成假菌絲。9/8/2022山東省立醫(yī)院“腦炎腦膜炎癥候群”涉及病原菌匯總篇9/8/2022山東省立醫(yī)院按革蘭染色分類 革蘭染色陽性球菌：肺炎鏈球菌、豬鏈球菌、金黃色葡萄球菌革蘭染色陰性桿菌：大腸桿菌、流感嗜血桿菌革蘭染色陰性球菌：腦膜炎奈瑟菌新型隱球菌？9/8/2022山東省立醫(yī)院按血平板溶血狀況 型溶血：肺炎鏈球菌、（豬鏈球菌、大腸桿菌）型溶血：金黃色葡萄球菌、豬鏈球菌型溶血：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌 9/8/2022山東省立醫(yī)院“腦炎腦膜炎癥候群”涉及病原菌疑問篇9/8/2022山東省立醫(yī)院幾個(gè)質(zhì)控的問題 培養(yǎng)基的質(zhì)控：生化反應(yīng)的質(zhì)控：9/8/2022山東省立醫(yī)院幾個(gè)非典型的問題 菌落生長(zhǎng)狀況不典型：生化反應(yīng)結(jié)果不典型：9/8/2022山東省立醫(yī)院幾個(gè)細(xì)節(jié)的問題 抗生素使用前后革蘭染色OP實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)條件培養(yǎng)基的更細(xì)節(jié)問題9/8/2022山東省立醫(yī)院菌株標(biāo)本上送菌株：菌種保存管、牛奶管、硅膠袋腦脊液、血清檢測(cè)陰性標(biāo)本標(biāo)