t通則驗操作顯微鑒別法

1、1內(nèi)容：建立有顯微鑒別法操作方法。2適用范圍：本規(guī)程適用于檢查藥物在生產(chǎn)過程中的顯微鑒別法的操作。3標(biāo)準(zhǔn)：中國藥典 2010 版一部4責(zé)任：化驗員、QC 主管。5. 用途：化驗室6內(nèi)容：顯微鑒別法系指用顯微鏡對藥材（飲片）切片、粉末、解離組織或表面制片及含飲片粉末的制劑中飲片的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行鑒別的法。鑒別時選擇具有代表性的供試品，根據(jù)各品種鑒別項的規(guī)定制片。制劑根據(jù)不同劑型適當(dāng)處理后制片。6.1 藥材（飲片）顯微制片6.1.1 橫切片或縱切片制片：取供試品預(yù)觀察部位，經(jīng)軟化處理后，用徒手或滑走切片法切成1020m 的薄片，必要時可包埋后切片。選取平整的薄片置載玻片上，根據(jù)觀察對象

2、不同，滴加甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其他試液 12 滴，蓋上蓋玻片。必要時滴加水合氯醛試液后，在燈上加熱透化，并滴加甘油乙醇試液過稀甘油，蓋上蓋玻片。6.1.2 粉末制片：供試品粉末過四號篩，挑取少許置載玻片上，滴加甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其他適宜的試液蓋上蓋玻片。必要時，按上法加熱透化。6.1.3 表面制片：將供試品濕潤軟化后，剪取預(yù)觀察部位約 4mm2，一正一反置載玻片上，或撕取表皮，加適宜的試液或加熱透化后，蓋上蓋玻片。6.1.4 解離組織制片：將供試品切成長約 5mm、直徑約 2mm 的段或厚約 1mm 的片，如供試品中薄壁組織占大部分，木化組織少或分散存在，采用氫氧化鉀法，若供

3、試品質(zhì)地堅硬，木化組織較多或集成較大群束，采用硝鉻酸法或氯酸鉀法。6.1.4.1 氫氧化鉀法：將供試品置試管中，加 5%氫氧化鉀溶液適量，加熱至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾取堿液，加水洗滌后，取少量置載玻片上，用解剖針?biāo)洪_，滴加稀甘油，蓋上蓋玻片。6.1.4.2 硝鉻酸法：將供試品置試管中，加硝鉻酸試液適量，放置至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾取酸液，加水洗滌后，照上法裝片。6.1.4.3 氯酸鉀法：將供試品置試管中，加硝酸溶液（12）及氯酸鉀少量，緩緩加熱，待產(chǎn)生的氣泡漸少時，再及時加入氯酸鉀少量，以維持氣泡穩(wěn)定的發(fā)生，至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去酸液，加水洗滌后，照上法裝片。6.1.5 花粉粒

4、與孢子制片：取花粉、花藥（或小的花）、孢子或孢子囊群（干燥的供試品浸于冰醋酸中軟化），用玻璃棒研碎，經(jīng)紗布過濾至離心管中，離心，取沉淀加新配置的醋酐與硫酸（9:1）的混合液 1ml，置水浴上加熱 23 分鐘，離心，取沉淀，用水洗滌 2 次，取沉淀少量置載玻片上，滴加水合氯醛試液，蓋上蓋玻片，或加 50%甘油與 1%苯酚各 12 滴，用品紅甘油膠取明膠 1g，加水 6ml，浸泡至融化，再加甘油 7ml，加熱并輕輕攪拌至完全混勻，用紗布過濾至培養(yǎng)皿中，加堿性品紅溶液（堿性品紅 0.1g，加無水乙醇 600ml 及樟腦油 80ml，溶解）適量，混勻，凝固后即得。6.1.6 磨片制片：堅硬的動物、礦物

5、類藥，可采用磨片片。選取厚度約 12mm 的供試材料，置粗磨石（或磨砂玻璃板）上，加適量水，用食指、中指或壓住材料，在磨石上往返磨礪，待兩面磨平，且厚度約數(shù)百微米時，將材料移置細(xì)磨石上，加水，用軟木塞壓在材料上，往返磨礪至透明，用水沖洗，再用乙醇處理和甘油乙醇試液裝片。6.2 含飲片粉末的制劑顯微制片按供試品不同劑型，散劑、膠囊劑（內(nèi)容物為顆粒狀，應(yīng)研細(xì)），可直接取適量粉末；片劑取 23 片，水丸、糊丸、水蜜丸、錠劑等（包衣者出去包衣），取數(shù)丸或 12 錠，分別置乳缽中研成粉末，取適量粉末；蜜丸應(yīng)將藥丸切開，從切面由外至挑取適量樣品或用水脫蜜后，吸取沉淀物少量。根據(jù)觀察對象不同，分別按粉末制片

6、片（15 片）。6.3 細(xì)胞壁性質(zhì)的鑒別6.3.1 木質(zhì)化細(xì)胞壁：加間苯三酚試液 12 滴，稍放置，加鹽酸 1 滴，因木質(zhì)化程度不同，顯紅色或紫紅色。6.3.2 木栓化或角質(zhì)化細(xì)胞壁：加蘇丹試液，稍放置或微熱，顯橘紅色至紅色。6.3.3素細(xì)胞壁：加氯化鋅碘試液，或先加碘試液濕潤后，稍放置，再加硫酸溶液（3350），顯藍(lán)色或紫色。6.3.4 硅質(zhì)化細(xì)胞壁：加硫酸無變化。6.4 細(xì)胞內(nèi)含物性質(zhì)的鑒別6.4.1 淀粉粒：6.4.1.1 加碘試液，顯藍(lán)色或紫色。6.4.1.2 用甘油醋酸試液裝片，置偏光顯微鏡下觀察，未糊化的淀粉粒顯偏光現(xiàn)象；已糊化的無偏光現(xiàn)象。6.4.2 糊粉粒：6.4.2.1 加碘

7、試液，顯棕色或黃棕色。6.4.2.2 加硝酸試液，顯磚紅色。材料中如含有多量脂肪油，應(yīng)先用乙醚或石油醚脫脂后進(jìn)行試驗。6.4.3 脂肪油、揮發(fā)油、樹脂：6.4.3.1 加蘇丹試液，顯橘紅色、紅色或紫紅色。6.4.3.2 加 90%乙醇，脂肪油和樹脂不溶解（蓖麻油及巴豆油例外），揮發(fā)油則溶解。6.4.4 菊糖：加 10%-萘酚乙醇溶液，再加硫酸，顯紫紅色并溶解。6.4.5：加釕紅試液，顯紅色。6.4.6 草酸鈣結(jié)晶：6.4.6.1 加稀醋酸不溶解，加稀鹽酸溶解而無氣泡發(fā)生。6.4.6.2 加硫酸溶液（12）逐漸溶解，片刻后析出針狀硫酸鈣結(jié)晶。6.4.7 碳酸鈣結(jié)晶（鐘乳體）：加稀鹽酸溶液，同時又

8、氣泡發(fā)生。6.4.8 硅質(zhì)：加硫酸不溶解。6.5 顯微測量：系指用目鏡測微尺，在顯微鏡下測量細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物等的大小。6.5.1 目鏡測微尺：放在目鏡筒內(nèi)的一種標(biāo)尺，為一個直徑 1820mm 的圓形玻璃片，刻有精確等距離的平行線刻度，常為 50 格或 100 格（如圖 1）。圖 1目鏡測微尺6.5.2 載物臺測微尺：在特制的載玻片粘貼一刻有精密尺度的圓形玻片。通常將長 1mm（或2mm）精確等分成 100（或 200）小格，每一小格長為 10m，用以標(biāo)定目鏡測微尺（如圖 2）。圖 2載物臺測微尺6.5.3 目鏡測微尺的標(biāo)定：用以確定使用同一顯微鏡及特定倍數(shù)的物鏡、目鏡和鏡筒長度時，目鏡測微尺上

9、每一格所代表的長度。取載物臺測微尺置顯微鏡載物臺上，在物鏡（或低倍物鏡）下，將測微尺刻度一致視野中央。將目鏡測微尺（正面向上）放入目鏡鏡筒內(nèi)，旋轉(zhuǎn)目鏡，并移動載物臺測微尺，使目鏡測微尺的“0”刻度線與載物臺測微尺的某刻度線相重合，然后在找第二條重合刻度線，根據(jù)兩條重合線間兩種測微尺的小格數(shù)，計算出目鏡測微尺每一小格在該物鏡條件下相當(dāng)?shù)拈L度（m），如圖 3 所示，目鏡測微尺 77 個小格（077）與載物臺測微尺的 30 個小格（0.71.0）相當(dāng)，已知載物臺測微尺每一小格的長度為 10m。目鏡測微尺每一小格長度為：10m3077=3.8m。當(dāng)測定時要用不同的放大倍數(shù)時，應(yīng)分別標(biāo)定。圖 3表示視野中目鏡測微尺與載