艾滋病病毒hiv抗體檢測(cè)解讀

1、HIV抗體檢測(cè)第1頁HIV介紹HIV是HIV感染及艾滋病（AIDS）病原體，主要經(jīng)過性接觸和體液傳輸，HIV主要侵犯和破壞輔助性T淋巴細(xì)胞（CD4+T淋巴細(xì)胞），使機(jī)體細(xì)胞免疫功效受損，最終并發(fā)各種嚴(yán)重機(jī)會(huì)性感染和腫瘤。HIV可分為HIV-1和HIV-2兩個(gè)型，均為單鏈RNA病毒。前者分布廣泛，后者主要局限于非洲一些國(guó)家和地域。第2頁HIV介紹人體感染HIV后，血液中最先出現(xiàn)HIV抗原，然后很快消失直到疾病后期才重新出現(xiàn)。幾周后出現(xiàn)IgM抗體并很快消失，今后IgG抗體出現(xiàn)并一直存在。HIV感染試驗(yàn)室診療以抗體檢測(cè)為主，病毒及相關(guān)抗原檢測(cè)為輔，后者要求高，僅限于一些研究試驗(yàn)室中進(jìn)行。第3頁HIV

2、介紹HIV-抗體檢測(cè)分為篩查試驗(yàn)和確認(rèn)試驗(yàn)兩種，篩查試驗(yàn)為陽性血清必須深入確認(rèn)，確認(rèn)為陽性方可匯報(bào)HIV感染陽性。篩查試驗(yàn)要求是敏感性高，理論上要求到達(dá)100%（97%-99%），盡可能防止遺漏可能陽性對(duì)象，相對(duì)來說，對(duì)特異性（99%）要求不是太高，允許有少許假陽性，這些假陽性能夠經(jīng)過重復(fù)檢測(cè)和確認(rèn)試驗(yàn)排除。第4頁HIV抗體檢測(cè)適用范圍適合用于各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)、采供血機(jī)構(gòu)及衛(wèi)生保健機(jī)構(gòu)?？勺鳛閷?duì)HIV感染者/AIDS病人診療、匯報(bào)和處理試驗(yàn)室依據(jù)。第5頁 HIV抗體檢測(cè)試驗(yàn)室 應(yīng)符合全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作規(guī)范（1997年版）中對(duì)檢測(cè)試驗(yàn)室人員、建筑設(shè)施和設(shè)備等條件要

3、求。應(yīng)符合試驗(yàn)室 生物安全通用要求（GB 19489-）對(duì)II級(jí)生物安全試驗(yàn)室（BSL-2）各項(xiàng)要求。試驗(yàn)室質(zhì)量確保和試驗(yàn)室安全防護(hù)按全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范要求執(zhí)行。第6頁 HIV抗體檢測(cè)目標(biāo) HIV抗體檢測(cè)可用于監(jiān)測(cè)、診療、血液篩查。以監(jiān)測(cè)為目標(biāo)檢測(cè)是為了解不一樣人群HIV感染率及其改變趨勢(shì)而進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)人群包含各類高危人群和普通人群。以診療為目標(biāo)檢測(cè)是為了確定個(gè)體HIV感染情況而進(jìn)行檢測(cè)，包含臨床檢測(cè)和自愿咨詢檢測(cè)、術(shù)前檢測(cè)、依據(jù)特殊需要進(jìn)行體檢等。以血液篩查為目標(biāo)檢測(cè)是為了預(yù)防輸血傳輸HIV而進(jìn)行檢測(cè)，包含獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。第7頁HIV抗體檢測(cè)關(guān)鍵點(diǎn)篩查試驗(yàn)陽性不能出陽性匯報(bào)。

4、嚴(yán)格恪守試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）。嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。注意預(yù)防樣品間交叉污染。第8頁常規(guī)HIV抗體檢測(cè)方法 HIV抗體檢測(cè)分為篩查試驗(yàn)（包含初篩和復(fù)檢）和確認(rèn)試驗(yàn)。HIV抗體檢測(cè)篩查試驗(yàn)篩查試劑：必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)同意、批批檢合格、在使用期內(nèi)試劑。推薦使用經(jīng)臨床質(zhì)量評(píng)定敏感性和特異性高試劑。篩查方法：慣用篩查方法是酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELISA）。當(dāng)前國(guó)內(nèi)外主要使用第三代（雙抗原夾心法）試劑，第四代ELISA HIV抗原抗體聯(lián)合測(cè)定試劑已在有些國(guó)家和地域用于血源篩查，同時(shí)檢測(cè)抗原抗體，可將檢出時(shí)間提前49.1d，有利于降低血源篩查殘余危險(xiǎn)度。 第9頁其它簡(jiǎn)便快速HIV檢測(cè)方

5、法 明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）：PA是HIV血清抗體檢測(cè)一個(gè)簡(jiǎn)便方法，是將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體，與待檢樣品作用，混勻后保溫（普通為室溫）。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時(shí)，經(jīng)抗原致敏明膠顆粒與抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，依據(jù)明膠顆粒在孔中凝集情況判讀結(jié)果。HIV-1和HIV-2抗原共同致敏PA試劑（AFD HIV-1/2 PA），已經(jīng)我國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）注冊(cè)同意。斑點(diǎn)EIA或稱斑點(diǎn)ELISA（dot-EIA）：以硝酸纖維膜為載體，將HIV抗原滴在膜上成點(diǎn)狀，即為固相抗原。加血清樣品作用，以后步驟同ELISA。陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點(diǎn)。反應(yīng)時(shí)間在10 min以內(nèi)，使用抗原

6、量少。第10頁其它簡(jiǎn)便快速HIV檢測(cè)方法斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗(yàn)：與斑點(diǎn)EIA相同，也是以硝酸纖維膜為載體。區(qū)分在于不用酶標(biāo)識(shí)抗體，而代之以紅色膠體金（或膠體硒）A蛋白，用滲濾法作為洗滌方法。試劑穩(wěn)定，可室溫長(zhǎng)久保留。試驗(yàn)時(shí)不需任何設(shè)備，快速、簡(jiǎn)便、特異性很好，敏感性約相當(dāng)于中度敏感ELISA，適合用于應(yīng)急檢測(cè)、門診急診個(gè)體檢測(cè)。當(dāng)前已經(jīng)有在國(guó)內(nèi)被SFDA同意注冊(cè)國(guó)外進(jìn)口試劑和國(guó)內(nèi)產(chǎn)品。普通可在1030min內(nèi)判讀結(jié)果。第11頁其它簡(jiǎn)便快速HIV檢測(cè)方法艾滋病唾液檢測(cè)卡：在硝酸纖維膜上包被人工合成HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同時(shí)檢測(cè)含在唾液中HIV-1/HIV-2抗體，原理為

7、酶免疫間接法。主要檢測(cè)唾液中HIV IgA與IgG抗體，敏感性特異性與ELISA相近，可防止靜脈穿刺。第12頁幾個(gè)常規(guī)HIV抗體檢測(cè)方法比較第三代ELISA第四代ELISAPA膠體硒WB 檢測(cè)是總抗體，第四代ELISA可同時(shí)檢測(cè)P24抗原主要包含IgM、 IgG抗體IgG抗體P24抗原消失、抗體產(chǎn)生時(shí)敏感性高感染早期P24抗原出現(xiàn)時(shí)敏感性高操作方便易行，敏感性特異性均可敏感性低于第三代、第四代ELISA和PAIgG抗體出現(xiàn)時(shí)特異性高第13頁幾個(gè)常規(guī)HIV抗體檢測(cè)方法比較在感染早期，IgM抗體出現(xiàn)時(shí)第三代、第四代ELISA、PA、膠體硒方法優(yōu)于WB，而在方法學(xué)上，硒標(biāo)敏感性要低于第三代、第四代E

8、LISA和PA。所以，當(dāng)兩種篩查試驗(yàn)均陽性或一陰一陽而WB陰性時(shí)，不能輕易匯報(bào)陰性，要同WB不確定反應(yīng)一樣，最少隨訪6個(gè)月，以防漏檢。提議將WB和膠體硒法檢測(cè)“窗口期”最少定為6個(gè)月。第14頁 樣 品初篩檢測(cè) 篩查試劑 陽性反應(yīng) 陰性反應(yīng) 重復(fù)檢測(cè) 原有試劑加另外一個(gè)篩查試劑 一陰一陽 均陰性反應(yīng)均陽性反應(yīng)送確認(rèn)試驗(yàn)室確認(rèn) 匯報(bào)陰性 HIV抗體篩查檢測(cè)流程 第15頁 HIV抗體初篩試驗(yàn) 試驗(yàn)準(zhǔn)備：將試劑和樣品放置在室溫(20)平衡, 按試驗(yàn)室SOP做好試劑準(zhǔn)備。試驗(yàn)操作 ：按試劑盒說明書以及質(zhì)控和安全防護(hù)要求進(jìn)行篩查檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果 ：NC、PC符合試劑盒試驗(yàn)成立條件，Cut off值 = 陰性

9、對(duì)照均值 + C，小于Cut off為陰性，大于或等于Cut off為陽性。匯報(bào)：對(duì)呈陰性反應(yīng)樣品，可由實(shí)施檢測(cè)試驗(yàn)室出具HIV抗體陰性匯報(bào)；對(duì)呈陽性反應(yīng)樣品，須進(jìn)行復(fù)檢，不能出陽性匯報(bào)。第16頁HIV抗體復(fù)檢試驗(yàn) 對(duì)初篩呈陽性反應(yīng)樣品用原有試劑和另外一個(gè)不一樣原理或不一樣廠家篩查試劑重復(fù)檢測(cè)。如兩種試劑復(fù)測(cè)均呈陰性反應(yīng)，則匯報(bào)HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)試驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn) （蛋白印跡試驗(yàn)）。對(duì)HIV抗體篩查試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)者可出具“HIV抗體陰性”匯報(bào)；對(duì)初篩試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)者不能出陽性匯報(bào)，可出具“HIV抗體待復(fù)查”匯報(bào)。初篩試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)樣品轉(zhuǎn)送時(shí)需填寫“HIV抗

10、體復(fù)測(cè)送檢單” 。 對(duì)篩查陰性和陽性者，均需做好檢測(cè)后咨詢。 第17頁HIV抗體確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果匯報(bào)HIV抗體陰性：無HIV抗體特異帶出現(xiàn)。排除因“窗口期”而出現(xiàn)假陰性結(jié)果，提議高危行為后3個(gè)月時(shí)再做抗體檢測(cè)。也可進(jìn)行HIV-1 P24抗原或HIV核酸檢測(cè)，作為輔助診療。HIV抗體不確定（）： 出現(xiàn)HIV抗體特異帶，但不足以判定陽性，在備注中應(yīng)注明“3個(gè)月后復(fù)檢”。隨訪復(fù)檢：每3個(gè)月隨訪復(fù)檢1次，連續(xù)2次，共6個(gè)月。假如檢測(cè)時(shí)暴露時(shí)間已超出3個(gè)月，則在3個(gè)月后隨訪1次即可。必要時(shí)可做HIV-1 P24抗原或HIV核酸測(cè)定，但檢測(cè)結(jié)果只能作為輔助診療依據(jù)，確認(rèn)匯報(bào)要依據(jù)血清學(xué)隨訪結(jié)果。第18頁HIV

11、陽性結(jié)果判定HIV-1抗體陽性（+）：最少有2條env帶（gp41和gp160/gp120）出現(xiàn),或最少1條env帶和p24帶同時(shí)出現(xiàn)。HIV-2抗體血清學(xué)陽性（+）：同時(shí)符合試劑盒提供陽性判定標(biāo)準(zhǔn)和WHO陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，即出現(xiàn)最少2條env帶(gp36和gp140/gp105)。第19頁WB確認(rèn)試驗(yàn)中HIV抗體特異帶HIV-1抗體特異帶：env帶:gp160/gp120、 gp41；gag帶:p55、p24、p17(或p18)；pol帶:p66(或p65)、p51、p31。HIV-2抗體特異帶：env帶:gp140/gp105、gp36（也可為gp125/gp80、gp36）；gag帶:p56

12、、p26、p16；pol帶:p68、p53、p34。第20頁HIV抗體檢測(cè)替換策略 第21頁 送檢樣品 用兩種不一樣原理或不一樣廠家試劑復(fù)測(cè)（其中包含進(jìn)口第三代ELISA試劑 進(jìn)口第三代ELISA試劑復(fù)測(cè)S/CO比值6.0 進(jìn)口第三代ELISA試劑復(fù)測(cè)S/CO比值1.05.9 確認(rèn)試驗(yàn) 判定陽性，上報(bào)疫情 兩種均陽性 兩種均陰性 一陰一陽 陽性反應(yīng) 陰性反應(yīng) 選取篩查試劑 陽性 陰性不確定，隨訪 判定陰性替換策略（HIV感染疫情匯報(bào)檢測(cè)策略）檢測(cè)流程 第22頁替換策略（高危人群VCT檢測(cè)策略）檢測(cè)流程第23頁替換策略（普通人群VCT策略）檢測(cè)及結(jié)果匯報(bào)流程圖第24頁HIV抗體檢測(cè)情況季報(bào)流程

13、艾滋病篩查中心試驗(yàn)室艾滋病確認(rèn)中心試驗(yàn)室省衛(wèi)生行政部門同級(jí)衛(wèi)生行政部門未設(shè)置艾滋病篩查中心試驗(yàn)室地域艾滋病篩查試驗(yàn)室和艾滋病檢測(cè)點(diǎn) 每季首月5日前匯報(bào)上季檢測(cè)情況 每季首月10日前匯報(bào)上季檢測(cè)情況 每季首月5日前匯報(bào)上季檢測(cè)情況 艾滋病確認(rèn)試驗(yàn)室每季首月15日前匯報(bào)上季檢測(cè)情況每季首月10日前匯報(bào)上季檢測(cè)情況 中國(guó)CDC性艾中心艾滋病參比試驗(yàn)室 第25頁HIV核酸定性檢測(cè) 要求了核酸檢測(cè)、核酸序列測(cè)定試驗(yàn)室條件、檢測(cè)方法及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 結(jié)果匯報(bào) ： HIV核酸檢測(cè)陰性:只可匯報(bào)此次試驗(yàn)結(jié)果陰性。 HIV核酸檢測(cè)陽性:可作為診療HIV感染輔助指標(biāo)，不單獨(dú)用于HIV感染診療。嚴(yán)格試驗(yàn)室管理制度（分

14、區(qū)、儀器和材料專用、單向流向、廢棄物處理） 第26頁HIV RNA定量測(cè)定（病毒載量測(cè)定） 試驗(yàn)室條件 試驗(yàn)室功效分區(qū) （試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) ） 人員 (含有艾滋病試驗(yàn)室上崗資格并接收省級(jí)以上艾滋病試驗(yàn)室安全及試驗(yàn)操作技術(shù)培訓(xùn)) 設(shè)施和設(shè)備 （區(qū)域性專用 ）方法 慣用HIV RNA定量測(cè)定方法有逆轉(zhuǎn)錄PCR試驗(yàn)（RT-PCR）、核酸序列擴(kuò)增試驗(yàn)（NASBA）、分支DNA雜交試驗(yàn)（bDNA）。 第27頁不一樣病毒載量檢測(cè)方法比較第28頁HIV核酸定量檢測(cè)意義輔助診療：當(dāng)RNA測(cè)定出現(xiàn)較高拷貝數(shù)陽性結(jié)果時(shí)（3，000c/ml），感染發(fā)生可能性非常大。應(yīng)綜合其它檢測(cè)數(shù)據(jù)和樣品背景情況進(jìn)行綜合判斷。 早期診療 ：HIV感染孕婦所生嬰兒 、殘余危險(xiǎn)度 病程監(jiān)控 ：確定疾病發(fā)展階段，以確定對(duì)應(yīng)治療方案。 指導(dǎo)治療方案及療效判定 ：通常在治療前后病毒水平降低0.5 log以上才被認(rèn)為臨床有效。 預(yù)測(cè)疾病進(jìn)程 第29頁適用范圍：HIV-1抗體不確定或窗口期輔助診療； HIV-1抗體陽性母親所生嬰兒早期輔助判別診療；第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測(cè)呈陽性反應(yīng)，但HIV-1抗體確認(rèn)陰性者輔助診療；監(jiān)測(cè)病程進(jìn)展和抗病毒治療