實驗必背知識

1、海門實驗學校2013屆高三 查漏補缺 回歸基礎- PAGE 9 -實驗必背知識一、檢測生物組織中的還原糖、脂肪和蛋白質1、實驗原理：還原糖與斐林試劑，水浴加熱，會生成磚紅色沉淀。脂肪可以被蘇丹 = 3 * ROMAN 染液染成橘黃色，或被蘇丹 = 4 * ROMAN IV染液染成紅色。蛋白質與雙縮脲試劑，產生紫色反應。2、實驗注意點：斐林試劑（甲液：0.1g/mlNaOH，乙液：0.05g/ml CuSO4）混合使用 雙縮脲試劑（A液：0.1g/mlNaOH ，B液：0.01g/ml CuSO4）分開使用 還原糖是鑒定需要水浴加熱 脂肪的鑒定需要顯微鏡3、實驗結果及其分析：還原糖的鑒定：結果：

2、有磚紅色沉淀； 分析：組織樣液中有還原糖脂肪的鑒定：結果：有橘黃色或紅色；分析：花生組織中有脂肪蛋白質的鑒定：結果：溶液呈紫色； 分析：組織樣液中有蛋白質二、觀察植物細胞的質壁分離和復原1、實驗原理：原生質層相當于一層半透膜，當原生質層兩側的液體具有濃度差時，細胞就會發(fā)生滲透作用失水或吸水，細胞壁的伸縮性比原生質層的伸縮性小。2、實驗結果及其分析：結果：質壁分離（液泡變小，顏色變深）； 分析：細胞液濃度外界溶液濃度 質壁分離復原（液泡變大，顏色變淺）：分析：細胞液濃度外界溶液濃度 質壁分離不能復原； 分析：外界溶液濃度太高，細胞已經死亡三、探究影響酶活性的因素1、實驗原理：溫度或pH等能夠影響

3、酶的催化活性，在一定范圍內，隨著溫度或pH的升高酶活性升高；越過這一范圍酶活性下降，甚至失活。2、方法步驟 = 1 * ROMAN I探究溫度對酶活性的影響步驟項目試管1試管2試管31加入可溶性淀粉溶液2mL2mL2mL2放置在不同溫度環(huán)境下5分鐘0100603加入新配置的-淀粉酶溶液（已在相應溫度下保溫一段時間）1mL1mL1mL4完成反應5min5滴入碘液2滴2滴2滴觀察結果變藍變藍不變藍注： = 1 * GB3 實驗室使用的-淀粉酶最適溫度為5070； = 2 * GB3 由于H2O2不穩(wěn)定，因此探究溫度對酶活性影響，不選擇H2O2作為反應物。由于斐林試劑要水浴加熱，所以探究T對酶活性影

4、響時，用碘液作為鑒定試劑。為確保實驗結果的準確性，酶和反應底物分別在相應溫度下保溫一段時間，再混合反應。 = 2 * ROMAN II探究pH對酶活性的影響步驟項目試管1試管2試管31加入過氧化氫溶液2mL2mL2mL2加入蒸餾水1mL-3加入鹽酸-1mL-4加入NaOH溶液-1mL5滴加肝臟研磨液2滴2滴2滴637水浴5min5min5min7檢驗放入帶火星的木條不能夠復燃能夠復燃不能夠復燃試管內氣泡產生量很少少很少3、實驗結果及其分析 (1)說明溫度過高和過低均不利于酶活性的發(fā)揮，在適宜溫度下酶的活性才最高(2)產生氣泡多的試管中酶活性越高。只有在適宜PH條件下酶的活性才最高注： = 1

5、* GB3 先加底物，再加酸或堿，最后加酶。四、葉綠體中色素的提取和分離1、實驗原理：提取原理：色素能溶解在無水乙醇中，可用無水乙醇提取色素；分離原理：不同的色素在層析液中的溶解度不同，溶解度高的在濾紙上擴散得快，反之則慢，達到將色素分離的目的。2、實驗結果分析：加入二氧化硅有助于研磨充分，加入碳酸鈣是防止研磨中色素被破壞。應注意不能讓濾液細線觸及層析液，防止色素色素溶入層析液。（橙黃色） 最快（溶解度最大）（黃色）（藍綠色） 最寬（最多）（黃綠色） 最慢（溶解度最?。?、實驗注意點：無水乙醇的用途是提?。ㄈ芙猓┤~綠體中的色素，層析液的的用途是分離葉綠體中的色素；石英砂的作用是為了研磨充分，碳

6、酸鈣的作用是防止研磨時葉綠體中的色素受到破壞；層析液不能沒及濾液線；濾液細線要細且直，而且干燥后要重復劃幾次；五、探究酵母菌細胞呼吸的方式1、實驗原理： = 1 * GB3 酵母菌屬于兼性厭氧微生物，有氧時進行有氧呼吸將葡萄糖徹底分解成二氧化碳和水，并釋放大量能量，無氧時進行無氧呼吸將葡萄糖分解成酒精和二氧化碳，釋放較少的能量。 = 2 * GB3 CO2可使澄清的石灰水變渾濁，也可以使溴麝香草酚藍水溶液由藍變綠再變黃。根據(jù)石灰水混濁程度或溴麝香草酚藍水溶液變成黃色的時間長短，可以檢測酵母菌培養(yǎng)液中CO2的產生情況。 = 3 * GB3 橙色的重鉻酸鉀溶液，在酸性條件下可與乙醇發(fā)生化學反應，變

7、成灰綠色。2、實驗結果及其分析：結果： = 1 * GB3 甲、乙兩裝置中石灰水都變渾濁，且甲中渾濁程度高且速度快；分析：酵母菌在有氧呼吸條件下產生的CO2比無氧呼吸條件下產生的多且快； = 2 * GB3 2號試管中溶液由橙色變成灰綠色，1號試管不變色；分析：酵母菌在無氧條件下分解葡萄糖產生酒精六、觀察植物細胞的有絲分裂1、實驗原理： = 1 * GB2 高等植物的分生組織有絲分裂較旺盛。 = 2 * GB2 有絲分裂各個時期細胞內染色體的形態(tài)和行為變化不同，可用高倍顯微鏡根據(jù)各個時期內染色體的變化情況，識別該細胞處于哪個時期。 = 3 * GB2 細胞核內的染色體易被堿性染料（如龍膽紫、醋

8、酸洋紅）染成深色。2、方法步驟：取材：取根尖2-3 解離液：質量分數(shù)為為15%的鹽酸和體積分數(shù)為95%的酒精混合液（1：1）解離 目的：使組織中的細胞分離開 時間：3-5min 漂洗液：清水漂洗 目的：洗去解離液，便于染色 時間：10 min 染液：0.01g/mL或0.02g/mL的龍膽紫溶液或醋酸洋紅液染色 目的：使染色體（質）著色 時間：3-5min 用鑷子將根尖弄碎，蓋上蓋玻片，復加一塊載玻片用拇指輕壓制片 目的：使細胞分散開來觀察 = 1 * ROMAN I低倍鏡觀察：找到分生區(qū)細胞，其特點是細胞呈正方形，排列緊密，有分裂細胞 = 2 * ROMAN II高倍鏡觀察：在低倍鏡觀察的基

9、礎上換高倍鏡，直到看清細胞的物象為止 = 3 * ROMAN III仔細觀察：先找中期，再找前期、后期、末期，最后找間期，注意染色體特點 = 4 * ROMAN IV移動觀察：慢慢移動裝片，完整地觀察各個時期3、實驗結果及其分析：視野中看到的細胞90%95%處于間期，所觀察到的細胞都是死細胞七、調查人群中的遺傳病實驗1、方法：抽樣調查法2、調查注意： 調查時選取群體中發(fā)病率較高的單基因遺傳病（紅綠色盲、白化病、高度近視）調查的群體要足夠大（可先分組實施，再將數(shù)據(jù)匯總處理）。 根據(jù)匯總數(shù)據(jù)，計算每種遺傳病的發(fā)病率。 在人群中調查遺傳病的發(fā)病率，在家族中調查遺傳病的遺傳方式。八、培養(yǎng)液中酵母種群數(shù)

10、量的動態(tài)變化1、實驗原理：（1）用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)酵母菌，種群的增長受培養(yǎng)液的成分、空間、pH、溫度、有害代謝產物等因素的影響。 （2）在理想的無限環(huán)境中，酵母菌種群的增長呈“J”型曲線；在有限的環(huán)境下，酵母菌種群的增長呈“S”型曲線。（3）在含糖的液體培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）中酵母菌繁殖很快，迅速形成一個封閉容器內的酵母菌種群，通過細胞計數(shù)可以測定封閉容器內的酵母菌種群隨時間而發(fā)生的數(shù)量變化。2、實驗結果及其分析：（1）根據(jù)表格平均值作出培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量7天中的變化曲線。（2）培養(yǎng)液酵母菌種群數(shù)量隨時間呈S型增長變化。3、實驗討論a.從試管中吸出培養(yǎng)液進行計數(shù)之前，建議你將試管輕輕震蕩幾次，這是

11、為什么？使酵母菌在試管里分布均勻。b.本探究實驗需要設置對照嗎？為什么？不需要。該實驗在時間上形成前后對照。c.需要做重復實驗嗎？需要，提高數(shù)據(jù)的準確性。d.如果一個小方格內酵母菌過多，難以數(shù)清，應當采取怎樣的措施？增加稀釋的倍數(shù)。e. 對于壓在小方格界限上的酵母菌，應遵循“取上不取下，取左不取右”的原則計數(shù)。注：血球計數(shù)板在使用時，先將蓋玻片放在計數(shù)室上，用吸管吸取培養(yǎng)液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入。九、探究植物生長調節(jié)劑對扦插枝條生根的作用1、實驗原理：植物插條經植物生長調節(jié)劑處理后，對植物插條的生根情況有很大的影響，而且用不同濃度、不同時間處理其影響程度亦不同。其影響存在一個最適濃

12、度，在此濃度下植物插條的生根數(shù)量最多，生長最快。2、結果分析：（1）分析不同插條的生根情況。不能生出不定根：有可能是枝條上沒有芽、枝條倒插等。都能生出不定根：促進扦插枝條生根是指刺激枝條的下端生出不定根，而不是刺激根生長。不同的枝條可能生出的不定根的數(shù)目多少不一樣，如枝條上芽多，則產生的生長素就多，就容易促使不定根的萌發(fā)。（2）分析與本實驗相關的其他因素。溫度要一致。設置重復組。即每組不能少于3個枝條。設置對照組，清水空白對照；設置濃度不同的幾個實驗組之間進行相互對照。注意：處理插條：枝條的形態(tài)學上端為平面，下端要削成斜面，這樣在扦插后可增加吸收水分的面積，促進成活。每一枝條留3-4個芽，所選

13、枝條的芽數(shù)盡量一樣多。處理方法：1）浸泡法：把插條的基部浸泡在配制好的濃度較低溶液中，深約3cm，處理幾小時至一天。 2）沾蘸法：把插條基部在濃度較高的藥液中蘸一下（約5s），深約1.5cm即可。可先設計一組梯度比較大的預實驗進行摸索，再在預實驗的基礎上設計細致的實驗。本實驗的單一變量是生長素類似物的濃度，因變量是不同濃度生長素類似物處理后枝條生根情況，如生根條數(shù)，最長與最短根的長度等每一枝條留3-4個芽，【有芽是產生生長素，但你使用的是枝條，首先要確保它是活的，可以繼續(xù)生長】所選枝條的芽數(shù)盡量一樣多【保證所帶芽自身提供的生長素含量相同，也是無關變量的一種】用顯微鏡觀察多種多樣的細胞 注意：先

14、用低倍鏡觀察，找到對象，移至中央（偏哪向哪移），再換用高倍鏡觀察。 使用低倍鏡時用粗準焦螺旋，使用高倍鏡時用細準焦螺旋。 使用低倍鏡時視野較亮，使用高倍鏡時視野較暗，可調節(jié)反光鏡和光圈。 十一、觀察細胞的減數(shù)分裂 注意：選用雄性的精巢或花粉，不選用雌性的卵巢（因為細胞數(shù)量少，分裂不連續(xù)）選修一、果酒制作的原理1、所需菌種：酵母菌；其代謝類型：兼性厭氧型。2、菌種的生活特點（1）在有氧條件下，進行有氧呼吸，大量繁殖； 酶反應式：C6H12O6 + 6CO2 + 6H2O6CO2 + 12H2O + 能量。（2）在無氧條件下，進行無氧呼吸。 酶反應式：C6H12O6 2C2H5OH + 2CO2

15、+ 少量能量（3）發(fā)酵條件溫度：18-25；時間：10-12天。自然發(fā)酵的菌種來源：附著在葡萄皮上是野生酵母菌。在缺氧、呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都受到抑制。二、果醋制作的原理1、所需菌種：醋酸菌；其代謝類型：好氧型。2、菌種的生活特點（1）當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；（2）當缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變成乙醛，再將乙醛變?yōu)榇姿?。反應簡式：C2H5OH + O2CH3COOH + H2O（3）發(fā)酵條件溫度：30-35；時間：7-8天。3、果酒、果醋的制作流程挑選葡萄 沖洗 榨汁 酒精發(fā)酵 醋酸發(fā)酵 果酒 果醋4、酒精可用酸性重鉻酸鉀檢驗，

16、出現(xiàn)灰綠色。注意：1、教材P4旁欄思考題2、為了提高果酒的品質，更好地抑制其他微生物的生長，可以直接在果汁中加入人工培養(yǎng)的酵母菌。三、腐乳的制作1、所需菌種：多種微生物參與豆腐的發(fā)酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，起主要作用的是毛霉，其代謝類型是好氧型，其是一種真菌。2、菌種的作用特點（原理）：產生蛋白酶將豆腐中的蛋白質分解成小分子的肽和氨基酸；產生 脂肪酶將脂肪水解成甘油和脂肪酸。3、腐乳制作的實驗流程讓豆腐長出毛霉 加鹽腌制 加鹵汁裝瓶 密封腌制注意：1、教材P7旁欄思考題2、腐乳的制作過程中，加鹽的作用是殺菌、調味、使豆腐析水成型。3、配制鹵湯時，加酒的作用是殺菌和調味。酒的含量控制在12

17、%左右。4、鹵湯中的香辛料有殺菌、調味的作用。5、可以通過味道、形狀和色澤等方面來評價腐乳的質量。四、加酶洗衣粉及酶制劑的種類1、加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉。2、常用的酶制劑包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶，其中效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。五、酵母細胞的固定化（一）固定化細胞技術1、概念：固定化酶和固定化細胞是利用物理或化學方法將酶或細胞固定在一定空間內的技術。2、方法：包括包埋法、物理吸附法和化學結合法。3、酶更適合采用物理吸附法和化學結合法固定化，因為酶分子太小，容易從包埋材料中漏出。細胞多采用包埋法固定化。（二）制備固定化酵母細胞1、酵母細胞的活化 配置物質的量濃度為

18、0.05mol/L的CaCl2溶液配置海藻酸鈉溶液海藻酸鈉溶液與活化的酵母細胞混合固定化酵母細胞2、可通過觀察凝膠珠的顏色和形狀來評價實驗結果。如果凝膠珠顏色過淺、呈白色，說明海藻酸鈉溶液濃度過低或酵母細胞太少；如果形成的凝膠珠不是圓形或橢圓形，則說明海藻酸鈉濃度過高。3、比較類型優(yōu)點不足直接使用酶催化效率高、低耗能、低污染對環(huán)境條件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很難回收，不能再次利用；提高了生產成本；混合在產物中的酶會影響產品質量固定化酶既能與反應物接觸，又容易與產物分離；還可以反復利用一種酶只能催化一種化學反應固定化細胞成本低，操作更容易大分子反應物不易與酶接近，反應效率降低七、DNA的粗

19、提取與鑒定（一）提取DNA的方法1、思路：利用DNA與RNA、蛋白質和脂質等在物理和化學性質方面的差異，提取DNA，去除其他成分。2、原理（1）利用DNA的溶解性：DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度的NaCl2中溶解度不同，鹽濃度為 0.14mol/L時，DNA的溶解度最小；DNA不溶于酒精，而蛋白質溶于酒精，利用這一原理，可以將 DNA與蛋白質進一步分離。（2）利用DNA的耐受性：蛋白酶能水解蛋白質，但對DNA無影響；大多數(shù)蛋白質不能忍受60-80的高溫，而DNA在80以上才會變性；洗滌劑能夠瓦解細胞膜，但對DNA無影響。（二）實驗設計一利用雞血細胞提取DNA并鑒定方法步驟加入物質目的1、制

20、備雞血細胞檸檬酸鈉防止血液凝固2、提取雞血細胞的細胞核物質蒸餾水使細胞吸水漲破3、溶解細胞核內的DNA2mol/L的NaCl溶液溶解DNA4、析出含DNA的黏稠物蒸餾水降低DNA溶解度，使DNA析出5、濾取含DNA的黏稠物去除溶解在鹽溶液中的雜質6、將DNA的黏稠物再溶解2mol/L的NaCl溶液再次溶解DNA7、過濾含DNA的NaCl溶液去除不溶解在鹽溶液中的雜質8、提取含雜質較少的DNA加同體積95%的冷酒精提純DNA9、DNA的鑒定A：（1）向試管中加入2mol/L的NaCl溶液5ml （2）加入DNA （3）加入二苯胺4mlB：（1）向試管中加入2mol/L的NaCl溶液5ml （2）加入二苯胺4ml沸水浴加熱5分鐘DNA在水浴加熱的情況下，與二苯胺反應呈藍色（三）實驗設計二利用新鮮菜花提取DNA并鑒定ADNA的粗提?。?）準備材料：將新鮮菜花和體積分數(shù)為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室，至少24小時。（2）取材：稱取30 g菜花，去梗取花，切碎。（3）研磨：將碎菜花放入研缽中，倒入10 mL研磨液（加洗滌劑和NaCl2），充分研磨10 min。（4）過濾：在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液濾入燒杯中，在4冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。（5）加冷酒精：將