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文檔簡介

1、健腦膠囊防治潑尼松性大鼠神經系統(tǒng)損傷的作用研究【關鍵詞】潑尼松;,糖皮質激素;,神經系統(tǒng);,健腦膠囊;,大鼠摘要:目的討論長期大量應用潑尼松對大鼠中樞神經系統(tǒng)的毒性作用,同時觀察中藥復方健腦膠囊對潑尼松性神經系統(tǒng)損害的防治作用。方法4月齡SD雄性大鼠50只隨機分成5組,除正常組外其余4組予潑尼松2.7gkg1灌胃,1次/d,連續(xù)12周。健腦膠囊治療組同時予健腦膠囊3種劑量提取液(2.5,5.0,10.0gkg-1d-1)予治療。實驗中測試大鼠的應激記憶力,測定腦勻漿中A,SD,AhE、DA的含量以及對大腦進展組織學檢查。結果單用潑尼松大鼠的三臂電迷宮正確率、腦勻漿中的SD含量顯著下降而A含量上

2、升P0.01;腦神經元發(fā)生水腫變性,皮質厚度變薄,皮層和海馬構造紊亂,而健腦膠囊可有效保護神經元及升高SD的含量及降低A的含量以及進步迷宮正確率P0.05。結論潑尼松長期應用可造成大鼠中樞神經系統(tǒng)功能減退,健腦膠囊對其有較好的對抗作用,但量效關系不明顯。關鍵詞:潑尼松;糖皮質激素;神經系統(tǒng);健腦膠囊;大鼠ThePreventiveEffetsfJiannaapsulenerebraDaageInduedbyPrednisneinRatsAbstrat:bjetiveTstudytheerebraldaageinduedbylng-teradinistratinfprednisne,andinv

3、estigatethepreventineffetsfJiannaapsulenrats.ethdsFiftyfurnthSDaleratsererandlydividedint5grupsith10ratspergrup.Grup1astreatedrallyithvehileasntrl(NSgrup),thergrupsereadinisteredralyithprednisne(2.7gkg-1d-1)first,andthenithvehile(PDgrup),raterextratfJiannaapsuleiththreedifferentdses(2.5,5.0,10.0gkg-

4、1d-1),neadayfr12eeks.Thenthe10%erebrusinhgenateasusedttestthententfnainexidase(A),superxidedisutase(SD)andaetylhlinesterase(AhE).Therighthalfferebrusasusedfrtestingthehistlgialbservatin.ResultsBiheialparaetersferebrusplasshedthatthenentratinfAinreased,SDandAhEdereasedsignifiantlyinPDgrup.rever,histp

5、athlgyshedthatthestrutureferebrurtexbeaethinnerandhippapiasindisrder.Drpsialandnertinerveellserefund.TheaterextratfJiannauldpreventthehangesfnerveentreinprednisnerats.nlusinThetreatentfJiannaapsuleanpreventthedaagefnerveentrehihausedbyprednisne.Keyrds:Prednisne;Glurtiid;erebradaage;Jiannaapsule;Rats

6、糖皮質激素是有腎上腺皮質分泌的一種具有神經活性的甾體激素,其產生直承受到下丘腦垂體腎上腺軸的影響,可對神經系統(tǒng)的發(fā)育和功能有深入的影響1。研究說明,超生理劑量的糖皮質激長期應用不但損害外周的免疫系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)等,還會對中樞神經系統(tǒng)尤其是對海馬神經元產生毒性作用2,臨床上也觀察到某些患者在承受大劑量的糖皮質激素長期治療后出現記憶力下降、精神失常、甚至癡呆的現象。由于糖皮質激素對神經系統(tǒng)的作用尚未明了,因此在本實驗中研究了潑尼松長期超生理量應用對動物智力和腦組織構造的影響,以討論糖皮質激素對中樞神經系統(tǒng)損傷的可能作用原理以及研究中藥健腦膠囊對其的防治作用。1材料與方法1.1動物4月齡未交配的Sp

7、ragueDaleySD雄性大鼠50只,SPF級,平均體重(22810)g,由廣東醫(yī)學院實驗動物中心提供廣東省實驗動物質量合格證編號:2002A014。飼養(yǎng)在(251)的恒溫及濕度為40%70%的空調環(huán)境中,隔日換墊料,專室飼養(yǎng),專人負責;使用經嚴格消毒后的標準飼料和純潔過濾水進展喂養(yǎng),所有動物分籠飼養(yǎng),確保實驗動物有足夠的活動空間,可自由攝食、攝水。1.2藥物與試劑醋酸潑尼松:原料,浙江仙居制藥股份消費批號981220;健腦膠囊水提液高、中、低劑量:由廣東醫(yī)學院醫(yī)藥科技開發(fā)中心提供030807。單胺氧化酶測試盒A測定試劑盒、DA丙二醛測定試劑盒、乙酰膽堿酯酶THE測定試劑盒、超氧化物歧化酶S

8、D測試盒、考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒均由南京建成生物工程公司提供。1.3儀器LEiAQIN圖象分析儀德國萊卡;752紫外分光光度計(上海第三醫(yī)學儀器廠消費);電感偶合等離子體直讀光譜儀日本島津;梅特勒托利多AE240電子天平梅特勒托利多儀器公司上海分公司;G2型迷宮刺激器張家港市生物醫(yī)學儀器廠。動物分組及處理:50只SD大鼠的體重按照irsftExel帶的宏程序Analys32.x11產生隨機數列,并利用產生的隨機數列進展分組,一共分為5組,每組10只,詳細為1NS組:正常對照組,每天先予NS按5lkg1灌胃1次,1h后重復。2PD組:潑尼松模型組,每天予潑尼松2.7gkg1灌胃,后灌予NS5l

9、kg1。3健腦膠囊高劑量組JLH:予潑尼松2.7gkg1d1灌胃,后予健腦膠囊高劑量提取液含淫羊藿,丹參,甘草等,每100l含生藥量100g按5lkg1灌胃給藥;4健腦膠囊中劑量組JL:潑尼松2.7gkg1d1灌胃,后予健腦膠囊中劑量提取液含淫羊藿,丹參,甘草等,每100l含生藥量50g按5lkg1灌胃給藥。5健腦膠囊低劑量組JLL:潑尼松2.7gkg1d1灌胃,后予健腦膠囊低劑量提取液含淫羊藿、丹參、甘草等,每100l含生藥量25g按5lkg1灌胃給藥。所有動物按照隨機原那么分組后觀察1d,第2天開場灌胃給藥,qd,連續(xù)12周。1.4觀察指標1.4.1三臂迷宮正確率大鼠在實驗完畢前1周用G2

10、型三臂迷宮刺激器檢測其對刺激的記憶反響才能,實驗前先測試大鼠在受到電刺激后首先逃避的方向,如逃向左側常見,那么以左側定為電擊區(qū)如區(qū),右側為平安區(qū)如區(qū);實驗正式開場時,臂為起步區(qū),其中和帶電,而不帶電,第1天先訓練動物建立記憶痕跡,每只大鼠先跑20次,記錄其正確率,24h后重復,但此次電擊前先延時5s,同時給紅燈提示,觀察大鼠受激反響情況,72h后再重復,記錄實驗中大鼠的正確次數和錯誤次數,計算其正確率。1.4.2腦指標測定在低溫條件下條件下迅速取左側大腦于20急凍,用于制成10%勻漿測定A、SD、AhE、DA的含量,并取右側大腦用Buin液固定,常規(guī)石蠟包埋后切片,HE染色,腦切片用于觀察海馬

11、和皮層的構造變化。1.5統(tǒng)計學處理所有測定指標均采用均數加減標準差的形式表示s,數據分析使用SPSS軟件中的方差分析ANVA進展檢驗,先用Levenestest對數據進展方差齊性檢驗,如方差齊用Bnferrni檢驗,如方差不齊那么用TahanesT2檢驗,以P0.05,P0.01表示具有統(tǒng)計學意義。2結果2.1健腦膠囊對潑尼松大鼠三臂迷宮檢測正確率的影響各組大鼠三臂迷宮正確次數T、錯誤次數ET和正確率%R見表1。表1健腦膠囊對潑尼松大鼠迷宮正確率的影響略與NS組比擬,PD組大鼠活動明顯減少,活動減少,對外界刺激的反響才能顯著下降,由表1可以看出,迷宮測試實驗中%R顯著下降P0.01,提示長期使

12、用潑尼松可使大鼠發(fā)生記憶力衰退。健腦膠囊治療3組中,%R雖然比NS組下降,但與PD組比,JLH組大鼠迷宮正確率卻顯著進步P0.01,JL組和JLL組也明顯進步P0.05,且JLH組的%R與NS組相比差異無顯著意義。提示健腦膠囊有效改善潑尼松所致的大鼠記憶才能衰退作用。轉貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2健腦膠囊對潑尼松大鼠腦勻漿生化指標的影響各組大鼠大腦重量及腦勻漿中A單胺氧化酶、SD超氧化物歧化酶、AhE乙酰膽堿酯酶、DA丙二醛含量影響見表2。表2健腦膠囊對潑尼松大鼠腦勻漿生化指標的影響略與NS組比擬,使用潑尼松后幾組大鼠的大腦重量有下降趨勢,但差異無顯著意義。在PD組中,腦勻漿中SD和AhE含量明

13、顯下降(P0.01),而A的含量顯著升高(P0.01),DA含量無明顯變化不大(P0.05)。與PD組比擬,健腦膠囊治療3組可顯著升高SD和AhE的含量而降低A的含量(P0.01),提示潑尼松長期應用可導致大鼠腦勻漿生化指標的變化,健腦膠囊可在一定程度上對抗?jié)娔崴傻闹袠行圆涣挤错憽?.3健腦膠囊對潑尼松大鼠腦組織構造影響各組大鼠海馬單位面積大錐體細胞數HN、大腦皮層厚度及分子層厚度和皮層的總厚度的比值(/)的影響結果見表3。表3健腦膠囊對潑尼松大鼠腦組織構造影響略各組大鼠大腦外觀無顯著差異,未見明顯的腫脹、萎縮或顏色變化。光鏡下可見長期應用潑尼松后大鼠紋狀皮質分子層厚度有增加趨勢而皮層總厚度(

14、)有減少趨勢,細胞排列紊亂,局部細胞發(fā)生明顯水腫,可見有細胞發(fā)生明顯變性壞死,海馬區(qū)神經元排列分散,胞體腫脹或皺縮,有較多的神經細胞發(fā)生核固縮甚至溶解死亡。與NS組比,長期應用潑尼松后大鼠分子層厚度和皮層的總厚度比值(/)上升,海馬A2區(qū)單位面積大錐體細胞數HN有下降趨勢,提示長期超生理劑量使用潑尼松可造成大鼠海馬皮層萎縮,神經元細胞腫脹壞死。與PD組相比,健腦膠囊治療組的大鼠皮層厚度增加,單位面積里神經細胞數目增加,變性壞死的程度也減少,提示健腦膠囊對潑尼松造成的神經細胞損傷有一定的預防作用。3討論下丘腦垂體腎上腺皮質軸HPA是機體內應激反響的根底,應激反響所導致的超生理劑量的糖皮質激素是加

15、速大腦尤其是海馬老化的主要原因。海馬是與記憶和思維有關的主要腦區(qū),存在著高密度的糖皮質激素受體,假如體內的皮質激素的含量長期處在平衡失調的狀態(tài),那么可使海馬神經元易于發(fā)生應激性反響損傷,導致海馬神經元的變性和壞死3。三臂電迷宮法是常用的測試動物學習記憶力上下的方法,此法主要是通過觀察動物面對危險時所產生的被動和主動逃避反射獲得才能和再現才能來判斷藥物對學習記憶力的影響,在給提示和不給提示的測試中,假如用藥動物正確率比非用藥動物明顯進步,那么提示藥物具有顯著的益智作用,反之亦然。腦組織中A,SD和AhE是與生物體衰老之間關系親密的3種主要的酶。在新陳代謝過程中產生的自由基過量會造成DNA和其他大

16、分子損傷,引起生物體衰老死亡,機體對抗自由基損傷的機制主要有兩種,一是對損傷大分子的修復機制,二是消除自由基機制4。在體內,最有效的自由基消除劑就是SD,它的含量降低提示體內過氧化反響明顯,機體出現老化現象。A可降解腦內的兒茶酚胺含量,使腦活動降低,被認為是老化的標志。乙酰膽堿Ah是最古老的遞質,其主要功能是作為神經傳導的化學遞質,在體內的主要滅活方式是靠乙酰膽堿酯酶(AhE)的作用。文獻5報道在AlzhEier病患者中,發(fā)現主要與識別和記憶功能有關的基底前腦中膽堿能神經元發(fā)生選擇性退行性變,皮層和腦脊液中AhE活性降低。本實驗研究中予大鼠超生理劑量的潑尼松灌喂3個月后也觀察到大鼠記憶力和反響

17、性下降,海馬構造發(fā)生改變,神經細胞發(fā)生水腫和變性,皮層厚度下降,單位面積里的神經細胞數目減少,單胺氧化酶含量增加,超氧化物歧化酶和乙酰膽堿酯酶減少,提示長期超生理劑量應用潑尼松可造成自由基大量堆積,加速了腦內兒茶酚胺的降解,導致腦神經遞質含量紊亂,對大鼠神經系統(tǒng)產生明顯的毒性作用。健腦膠囊是由丹參、淫羊藿、黃芪、甘草為主的等幾種中藥組成的復方,實驗研究提示,健腦膠囊對由潑尼松引起的大鼠神經系統(tǒng)損傷具有良好的保護作用,可以明顯地進步三臂迷宮的成功率,增加腦勻漿中超氧化物歧化酶SD和乙酰膽堿酯酶AhE的含量,降低單胺氧化酶A的含量。在健腦膠囊中,丹參是經典的抗衰老的中藥,具有鎮(zhèn)靜安神,改善中樞神經

18、功能的作用,同時丹參可明顯改善腦部血液供給以及腦缺血后大腦中單胺類物質的代謝紊亂,對神經遞質和血管活性物質也有很好的調節(jié)作用6,可顯著改善神經肽和興奮性氨基酸的含量以及消除腦中氧自由基的含量7。淫羊藿是具有抗衰老作用的藥物,在體內可進步SD的含量,有效去除代謝產生的自由基,對機體有一定的保護作用;另一方面,淫羊藿8可增加腦血流量、降低腦血管阻力,從而增加神經細胞的血供,起到保護神經細胞的作用。黃芪具有延年益壽、直接抗衰老作用,可以增加血中和腦中SD的含量9,甘草性平和,有促進各種藥效的作用。因此,健腦膠囊對潑尼松大鼠的神經細胞保護作用主要是通過調節(jié)神經系統(tǒng)遞質的含量,改善腦血供,加速氧自由基的消除等方面而實現的。參考文獻:1Shuaher,RbelP,BaulieuE.Develpentandregeneratinfthenervussyste:arlefrneursteridJ.DevNeursi,1996,18:6.2eenBS,agarinsS.StresseffetsnrphlgyandfuntinfthehippapusJ.AnnNYAadSi,1997,821:271.3趙剛,蔡定芳.應激、皮質激素和海馬老化J.國外醫(yī)學老年醫(yī)學分冊,20

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