蠶豆根尖微核試驗檢驗花露水對人體及環(huán)境的危害

1、蠶豆根尖微核試驗檢驗花露水對人體及環(huán)境的危害朱園園 安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 09 生物科學(xué)類D00914035摘要 采用蠶豆根尖微核試驗技術(shù)，選取不同濃度的六神花露水為誘變劑 , 分別處理蠶豆根尖細(xì)胞, 計算蠶豆根尖細(xì)胞的微核率。發(fā)現(xiàn)蠶豆根尖經(jīng)過不同濃度的花露水處理液處理后 , 根尖細(xì)胞形態(tài)受到不同程度的損傷, 根尖長度明顯變短,顏色發(fā)黃、變黑。結(jié)果顯示, 不同濃度的花露水處理蠶豆根尖細(xì)胞可誘發(fā)不同頻率的微核率 , 在一定濃度范圍內(nèi) , 微核率隨花露水濃度升高而增高，達(dá)到一定濃度后，微核率出現(xiàn)下降趨勢。推斷一定濃度的花露水對蠶豆根尖細(xì)胞有一定的誘導(dǎo)作用。Abstract: By using th

2、e micronucleus test technique, we useddifferent concentrations of Liushen Florida Water, as mutagen, todispose the cells of Vicia faba root tip respectively, and calculatedthe rate of Vicia faba root tip cells micronucleus. We found apicalcell morphology in Vicia faba root tip cells was damaged to d

3、ifferentextent after the treatment of different concentrations of LiushenFlorida Water, while the root tip s length became shorter and thecolor became yellow or black. The result shows that differentconcentrations of Florida Water s treatment in root tip cells of Viciafaba could induce micronucleus

4、rate in different frequencies. Themicronucleus rate increases in a certain concentration range with the increasion in concentrations of Floridawater, but trends to decline when reaching a certain concentration.So we guess that Florida Water in a certain concentration range have some certain inducing

5、 effect on Vicia faba root tip cells.關(guān)鍵詞 蠶豆根尖 ; 微核試驗 ; 花露水 ; 微核千分率Key words: Vicia faba root tip; micronucleus test; Florida Water;micronucleus rate隨著生活水平的日益提高 , 由化工原料合成的生活日用品日益成為人類日常生活中必不可少的一部分。其中，花露水就是夏天人們使用頻率很高的生活用品之一，其對于防蚊蟲和止癢消腫都有不錯的功效。但是作為直接接觸皮膚類的化學(xué)產(chǎn)品，花露水中包含少量劣質(zhì)香精及75%左右的酒精，會引起某些過敏體質(zhì)產(chǎn)生過敏; 且花露水含有

6、一種叫“伊默寧”的成分，可使蚊蟲喪失對人叮咬的意識，但如果在患皮炎后涂抹花露水，“伊默寧”成分可導(dǎo)致皮膚出現(xiàn)過敏反應(yīng)，加重皮炎癥狀; 此外，根據(jù)網(wǎng)上查閱資料可得，芬芳劑部分成分有毒，制造芬芳劑至少需要5000 種化學(xué)成分，只有不到20%做過毒性試驗，結(jié)果是都含有毒性，被不少國家列為危險品，而每種香水的化學(xué)成分會多達(dá)600 多種。花露水也是一種香水類產(chǎn)品，其所有成分是否均做過毒性試驗，我們不得而知。蠶豆根尖微核試驗是一種世界范圍內(nèi)廣泛推廣運用的環(huán)境致突變性檢測技術(shù)。其具有材料方便、培養(yǎng)簡單、技術(shù)容易掌握、成本低等優(yōu)點 , 而成為目前研究和運用較多的、擬以代替動物培養(yǎng)細(xì)胞檢測環(huán)境致癌、致畸、致突變

7、物質(zhì)的高等植物體細(xì)胞檢測系統(tǒng)。本文即運用蠶豆根尖微核實驗方法, 研究花露水對蠶豆根尖遺傳毒性的作用 , 進(jìn) 而為花露水對人體及環(huán)境的影響提供一定的理論參考。材料與方法實驗材料蠶豆 （ 實驗室提供） ，六神花露水（ 超市購買 ）實驗試劑及工具乙醇，冰醋酸，醋酸地衣紅染液，改良苯酚染液，鹽酸，蒸餾水試劑 :95%工具 : 鑷子，培養(yǎng)皿，脫脂棉，燒杯，載玻片，蓋玻片，顯微鏡，試管，標(biāo)簽，滴管實驗方法蠶豆根尖培養(yǎng): 選擇無蟲、飽滿、大小均勻的蠶豆種子放入盛有蒸餾水的培養(yǎng)皿中， 26? 左右浸泡 24h, 其中換水 3 次。種子吸脹后，在培養(yǎng)皿中鋪一層脫脂棉，倒入少量蒸餾水，將種子置于其中培養(yǎng)2 天，大

8、部分初生根長至1,2cm 左右時進(jìn)行微核試驗。處理方法 :預(yù)實驗 : 將上述六神花露水分別配成0.1%， 1%， 10%， 20%， 30%， 40%， 50%，60%， 70%， 80%， 90%， 100% 十二種濃度的溶液（ 蒸餾水溶解） ，設(shè)蒸餾水為對照，選取生長良好、根長一致的幼苗隨機(jī)分組，對蠶豆進(jìn)行處理后，用蒸餾水恢復(fù)培養(yǎng)24 h 。預(yù)實驗后發(fā)現(xiàn)在20%以上的溶液中的蠶豆全部發(fā)黑死亡，故將濃度調(diào)整為1%，2%， 3%， 4%， 5%， 6%， 8%， 10%八種濃度花露水溶液，蒸餾水做對照，考慮花露水中含有大量酒精，故添加75%酒精溶液做對照。制片與觀察：取根尖用卡諾氏固定液固定2

9、4 h ,用1 mol?L鹽酸解離。用醋酸地衣紅染色后進(jìn)行制片鏡檢觀察。每組鏡檢 3個根尖，每個根尖計數(shù)1000個左右細(xì)胞。1.4數(shù)據(jù)處理根據(jù)觀測結(jié)果，計算各處理下微核的千分率：微核率（MCN尸測試樣品（或?qū)φ眨┯^察到的微核個數(shù)/測試樣品（或?qū)φ眨┯^察 細(xì)胞總數(shù)X 1000%“污染指數(shù)”判別：（實測微核率/標(biāo)準(zhǔn)（蒸儲水）微核率）污染指數(shù)在0,1.5區(qū)間為基本沒有污染；污染指數(shù)在1.5,2區(qū)間為輕度污染；污染指數(shù)在2,3.5區(qū)間為中度污染；污染指數(shù)在3.5以上為重度污染。結(jié)果與分析2.花露水對蠶豆根尖染色體的影響用不同濃度花露水處理蠶豆根尖后，可發(fā)生多種類型的染色體異常，包括細(xì)胞 核凸起、單微核

10、、雙微核、細(xì)胞核融合、染色體橋和染色體片斷等，且微核可出現(xiàn)在細(xì)胞有絲分裂的不同時期?；端畬πQ豆根尖染色體影響花露水對蠶豆根形態(tài)的影響蠶豆根經(jīng)不同濃度花露水處理后，顏色和形態(tài)發(fā)生變化，因花露水中大量的酒 精可以使細(xì)胞的蛋白質(zhì)變性而殺死細(xì)胞，所以在花露水濃度較高時，蠶豆變黑，根 尖不能生長。在花露水濃度超過 20淅，蠶豆根尖變黑變爛，無法繼續(xù)生長；10%- 20麻度間處理的蠶豆根尖出現(xiàn)變黑現(xiàn)象，但可以繼續(xù)生長；10%濃度以下處理的根尖雖有部分變黃變軟現(xiàn)象，但不影響生長。經(jīng)花露水處理后變色的蠶豆根尖花露水對蠶豆根尖細(xì)胞微核率的影響第一次觀察所得結(jié)果濃度 0% 1% 2% 3% 4% 5% 6% 8

11、% 10% 75%精編號1千2 2 5 5 7 10 14 19 14分率（%）編號2千3 3 4 5 8 11 17 16 15 分率（%）平均值 2.5 2.5 4.5 5 7.5 10.5 15.5 17.5 14.5（先）第二次觀察所得結(jié)果濃度 0% 1% 2% 3% 4% 5% 6% 8% 10% 75%精編號1千1 2 3 6 7 11 13 19 13分率（%）編號2千2 2 5 5 9 11 15 18 13分率（%）平均值 1.5 2 4 5.5 8 11 14 18.5 13（先）第三次觀察所得結(jié)果濃度 0% 1% 2% 3% 4% 5% 6% 8% 10% 75酒%精 編

12、號1千3 3 5 6 7 12 16 19 14分率（%）編號2千2 3 4 6 8 11 19 18 12分率（%）平均值 2.5 3 4.5 6 7.5 11.5 17.5 18.5 13（先）最終結(jié)果濃度 0% 1% 2% 3% 4% 5% 6% 8% 10%千分率平 均值 2.2 2.5 4.3 5.5 7.7 11 15.7 18.2 13.（%）5濃度 1% 2% 3% 4% 5% 6% 8% 10%1.14 1.95 2.50 3.50 5.00 7.07 8.27 6.14 污染指（無（輕（中（中（重（重（重（ 重數(shù) 污染 ） 度污度污度污染） 度污染 ） 度污染 ） 度污度污

13、染）染） 染） 染）20151050024681012 濃度小結(jié)與分析結(jié)果分析 :在從1%-8%的濃度范圍中，微核率為正相關(guān)，但是在10%這一濃度中，微核率突然下降。我們猜想原因可能是在這一濃度時花露水的主要成分酒精的含量過高，限制了根尖細(xì)胞的分裂，所以造成微核率的降低。實驗條件允許的話，希望以后可以對以上猜想進(jìn)行驗證。實驗方案改進(jìn)建議 :實驗中75%酒精對照組中的蠶豆苗全部死亡，猜想是酒精濃度過高所致，應(yīng)根據(jù)花露水的濃度梯度進(jìn)行對應(yīng)設(shè)立對應(yīng)濃度的酒精對照組。后期實驗內(nèi)容設(shè)想 :在 10%的濃度后設(shè)定12%， 14%， 16%幾組濃度，查看是否還是有千分率下降的情況發(fā)生 ;如果可以的話，希望可以將花露水中的酒精蒸發(fā)掉，用剩下的溶劑來看是否酒精是主要的影響因素;用不同種類、品牌的花露水進(jìn)行微核率的比較。致謝感謝尹老師的指導(dǎo)感謝實驗試劑準(zhǔn)備室老師對實驗物品的提供感謝薛純同學(xué)的改良苯