同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科ISO15189體系文件02微生物檢驗(yàn)標(biāo)本采集指導(dǎo)書(shū)

1、同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科標(biāo)本采集及處理流程指導(dǎo)書(shū)TJYYJYK/CJZ02第2版標(biāo)題： 微生物檢驗(yàn)標(biāo)本采集指導(dǎo)書(shū)第 02 號(hào)第 PAGE 6 頁(yè) 共 NUMPAGES 6 頁(yè)目的：微生物檢測(cè)標(biāo)本總類(lèi)繁多，標(biāo)本采集的影響因素也非常多，所以必須針對(duì)微生物標(biāo)本的采集制定標(biāo)準(zhǔn)，形成指導(dǎo)書(shū)，以利于消除影響因素，提高微生物標(biāo)本的檢測(cè)質(zhì)量。適應(yīng)范圍：微生物檢測(cè)標(biāo)本的采集3 血液標(biāo)本的采集 3.1 收集血液做培養(yǎng)時(shí)，因皮膚表面固有微生物包括表皮葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、類(lèi)白喉?xiàng)U菌等多為污染菌，應(yīng)該盡量避免污染樣本。患者體溫高峰或有嚴(yán)重感染的任何時(shí)候抽血23次，每次間隔0.51小時(shí)（僅抽血1次的分離率為80%，

2、2次為90%，3次為99%）。3.2 先以肥皂洗去皮膚污垢后（如需要），將穿刺靜脈上的皮膚周?chē)?、血液培養(yǎng)瓶口及抽血者的手指以酒精（70%）碘酒（2%）作用1-2分鐘酒精（70），三道手續(xù)加以消毒。3.3 系上止血帶，無(wú)菌抽取患者靜脈血注入BACTEC-9050全自動(dòng)血培養(yǎng)儀配套血培養(yǎng)瓶中， 迅速輕搖混勻，以防血液凝固。抽血最適量為8-10ml，允許范圍3-10ml; 小兒專(zhuān)用1-3ml。3.4 常規(guī)血培養(yǎng)應(yīng)每次抽兩個(gè)血瓶（灰色蓋嗜氧瓶和黃色蓋厭氧瓶）；嬰兒或小孩則將血液放入PedPlus血液瓶?jī)?nèi)（粉紅色瓶蓋）。3.5 疑似分枝桿菌感染或霉菌感染之病人則抽取血液5ml，注人MYCo/FLYTIC

3、培養(yǎng)瓶中（紅色瓶蓋），并上下?lián)u動(dòng)數(shù)次。3.6 注意事項(xiàng)3.6.1 每一發(fā)燒病人抽血次數(shù)以每天三次為原則，且至少要抽兩套，其中間隔至少30分鐘。如果患者情況危急，同時(shí)亦可采集身體不同部位血液做兩套培養(yǎng)。但是不可由血管導(dǎo)管抽取血液樣本。3.6.2 抽取血液后，無(wú)須要更換針頭及可注入血瓶中，以避免針扎及污染率提高。3.6.3 抽血前，確認(rèn)血瓶貼有條碼（檢驗(yàn)信息）并核對(duì)患者信息，但不可覆蓋血液培養(yǎng)瓶原有的條碼（產(chǎn)品條碼）。3.6.4 若不能立刻送至微生物檢驗(yàn)室，應(yīng)置于35溫箱或室溫，絕不可置于冰箱。4 尿液4.1 中段尿采集法：將患者外陰部消毒、清洗后，讓患者排尿，棄去前半部尿液，收集中段尿約10ml

4、左右，置無(wú)菌容器中立即送檢。4.2 導(dǎo)尿法：采用導(dǎo)尿術(shù)取尿液10ml左右，置無(wú)菌容器立即送檢。4.3 左、右腎盂采集法：由泌尿外科醫(yī)師采集，注明左、右部位，立即送檢。5 痰液5.1 所采取的痰樣本，必須真正能代表肺部之分泌物者，通常清晨時(shí)痰液最多，且可能含較多量病原菌，如肺結(jié)核分枝桿菌。5.2 以清水或牙刷清潔口腔及牙齒，不可用牙膏。指導(dǎo)患者用力自氣管深部咳出痰液，置無(wú)菌容器內(nèi)送檢。應(yīng)盡可能防止唾液及鼻咽部分泌物混入樣品。5.3 孩童常將痰吞入胃中，可抽取其胃容物送檢，而且最好在清晨未進(jìn)任何食物或水以前進(jìn)行。5.4 在收集支氣管分泌物時(shí)，可用支氣管鏡（Bronchoscope）取得。6 化膿及

5、創(chuàng)傷感染標(biāo)本：對(duì)于已破潰的化膿灶或開(kāi)放性創(chuàng)傷部位，先用無(wú)菌生理鹽水擦凈表面污染雜菌，然后用棉拭子采集深部膿液分泌物。對(duì)未破潰的膿腫，可采用無(wú)菌穿刺取樣。7 腦脊髓液7.1 腦脊髓液通常取自腰椎穿刺，由醫(yī)師以如下方法操作：以70%酒精或20碘酊消毒背部下方，先行麻醉，然后以一特制的通管針（stylet），輕輕地由第三與第四節(jié)腰椎間的中線部位穿刺入脊髓蜘蛛膜，整個(gè)過(guò)程需以最嚴(yán)格的無(wú)菌操作技術(shù)進(jìn)行。7.2 若病患為嬰兒或孩童，則將其頭手?jǐn)[放于折疊的床罩、毛毯上，或?qū)⒄眍^墊于其腹部下，如此可使醫(yī)師易于做腰椎穿刺。7.3 抽取出之腦脊髓液分置于三根無(wú)菌試管內(nèi)，第一或第二管迅速送至微生物室；病毒、霉菌、分

6、枝桿菌培養(yǎng)樣本可置于4保存待送。8 生殖道標(biāo)本8. 生殖道樣本應(yīng)取兩支無(wú)菌棉花拭子，分兩次收集，一支用來(lái)作直接抹片，另一支作培養(yǎng)。8. 發(fā)育期或成年婦女，分別由尿道口、子宮頸或直腸（如懷疑此部份有淋病雙球菌時(shí)為之）采樣。8. 若懷疑年幼女童有淋病性陰道炎時(shí)，則樣本由陰道外圍部位取得。8. 男性疑有急性淋病時(shí)，則由尿道取分泌物樣本作涂片及培養(yǎng)，若懷疑有慢性淋病，樣本可由醫(yī)師采自前列腺或精囊。8. 以棉花拭子采集的樣本，可直接接種于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，如MTM平板。9糞便與直腸拭子樣本9. 微生物檢查的糞便，由病人排出后，取約碗豆大小含有黏液、膿、血液或組織碎片的部份的糞便，直接裝入無(wú)菌容器送檢。 9.

7、 糞便樣本，亦可從直腸指診時(shí)，于手套上取得。9. 欲采集直腸樣本時(shí)，須以肥皂，水和70%酒精，將肛門(mén)周?chē)磧?，然后用一根浸過(guò)無(wú)菌生理食鹽水或液體攜送培養(yǎng)基之棉花拭子，插入肛門(mén)約5cm處，輕輕旋轉(zhuǎn)，以便使之與直腸鉆膜之表層接觸，然后取出置于運(yùn)送培養(yǎng)管，并立刻送至檢驗(yàn)室，如果無(wú)法馬上送出，則置于4冰箱保存待送。9. 醫(yī)師發(fā)現(xiàn)懷疑腹瀉病原菌彎曲菌、艱難梭菌、耶爾森菌、弧菌和大腸埃希菌（0157:H7）等的病例，送檢前請(qǐng)與微生物聯(lián)系，并于申請(qǐng)檢驗(yàn)單上特別注明，以便提高此菌的分離率。9. 糞便與直腸拭子樣本作微生物檢查時(shí)，要特別注意攜送與接種的迅速性。如有拖延，可能會(huì)有一些非病原性的腸內(nèi)細(xì)菌，生長(zhǎng)速度超

8、過(guò)病原菌，影向病原菌的分離。10鼻腔及咽喉樣本10. 若從鼻腔采樣本作培養(yǎng)，可用一支無(wú)菌棉花拭子（其尖端之棉花必須緊密）直接插入鼻腔，應(yīng)避免用大而疏松的棉花拭子，因其可能滑落，甚至陷于病人鼻腔中。10.2若從咽喉采集樣本作培養(yǎng)，須在光線充足下，采集兩根拭子，分二次收集，收集完立即送檢，或置于運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)，以防樣本干燥，采集時(shí)盡量避免接觸舌頭唾液。11 鼻咽樣本11.1 所謂鼻咽是指軟顎后方咽喉上半部，欲由此處取樣本，須用一根細(xì)長(zhǎng)的拭子，由鼻腔穿入咽喉處，輕輕旋轉(zhuǎn)擦拭，然后取出，再?gòu)牧硪槐强状┤氡茄侍帯?1.2 樣本收集后，迅速送檢，整個(gè)采集過(guò)程，須避免唾液污染。12 膿或傷口標(biāo)本12.1 膿瘍

9、與癤中的膿，可由排液法取得，先用70%酒精擦拭患部，干燥之后，再用一無(wú)菌刀片將其切開(kāi)，然后以無(wú)菌拭子采取樣本，若創(chuàng)傷范圍廣時(shí)，應(yīng)盡可能將傷口之表面部位割除，只取深層部位之樣本。否則所取得的樣本，可能受到表層微生物污染，取得樣本后，拭子立即置于運(yùn)送管內(nèi)送檢。12.2 如作厭氧培養(yǎng)，最好以針筒直接抽取，以無(wú)菌塞子塞住針頭，迅速送至檢驗(yàn)室，避免樣本在運(yùn)送過(guò)程中，暴露在有氧環(huán)境中，而使厭氧菌死亡。13 體液樣本13.1 包括胸腔液、腹腔液、心包液或關(guān)節(jié)腔液，通常由醫(yī)師以無(wú)菌技術(shù)采集，即以一根套管腔針或特殊設(shè)計(jì)的針，插入欲采集的部位，抽取液體5ml左右，注入無(wú)菌含抗凝劑的管內(nèi)混勻送檢.13.2 體液標(biāo)本

10、均需作厭氧培養(yǎng)，可直接注入?yún)捬跹囵B(yǎng)瓶送檢。14 血管導(dǎo)管14.1 標(biāo)準(zhǔn)方法是先作周?chē)南?，以無(wú)菌剪刀取下約5cm長(zhǎng)度，置于無(wú)菌容器送檢。14.2 實(shí)驗(yàn)室將導(dǎo)管于培養(yǎng)基上滾動(dòng)數(shù)次后進(jìn)行培養(yǎng)，如果菌落數(shù)大于15 CFU以上，則認(rèn)為血流感染可能與導(dǎo)管有關(guān)。 眼結(jié)膜樣本 可用一根浸過(guò)無(wú)菌生理食鹽水的拭子采集。采集時(shí)須小心地避免感染蔓延至眼部鄰近區(qū)域，采集后拭子及時(shí)送檢，以防樣本干燥。16 采集注意事項(xiàng)16.1 采集真正病灶處的標(biāo)本，避免鄰近區(qū)域微生物的污染。16.2 盛標(biāo)本的容器須先經(jīng)滅菌，但不得用消毒劑或酸類(lèi)處理。16.3 在病患感染的急性期、使用抗生素或傷口局部治療前收集樣本。16.4 采集好

11、的標(biāo)本，容器上應(yīng)貼有信息條碼或檢驗(yàn)申請(qǐng)單上撕下的聯(lián)號(hào)，加注病人姓名床號(hào)。16.5 標(biāo)本采集完畢應(yīng)盡快送檢，擱置時(shí)間長(zhǎng)會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果。如不能立即送檢。通常放冰箱暫存（血培養(yǎng)除外），某些標(biāo)本如淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌，在送檢過(guò)程中應(yīng)注意保溫。16.6 注意采集的時(shí)機(jī)和部位，如傷寒沙門(mén)菌的陽(yáng)性檢出率，發(fā)病的第一周采集血液，第二周采集糞便，第三周采集尿液，陽(yáng)性檢出率較高。16.7 由于病人標(biāo)本很可能含有大量致病菌，故在采集、包裝和送檢時(shí)都必須注意安全，防止污染，傳播和自身感染。同時(shí)，標(biāo)本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必須蓋緊包好，防止送檢過(guò)程中倒翻或碰破流出。16.8 采取適當(dāng)?shù)慕馄饰恢?、技術(shù)與容器收集足量的樣