草珊瑚總黃酮提取及含量檢測

1、草珊瑚總黃酮提取及含量檢測【摘要】目的研究草珊瑚總黃酮的提取工藝。方法以草珊瑚為原料，用乙醇為溶劑，利用超聲波輔助提取和水浴法提取草珊瑚總黃酮，利用L933正交實驗方法優(yōu)化總黃酮提取工藝，采用單因素實驗，測定了乙醇濃度、料液比、提取時間、提取溫度等單因素實驗，考察總黃酮提取率與各因素的關(guān)系。根據(jù)單因素實驗得出的顯著條件進展正交設(shè)計，確定最正確工藝條件。結(jié)果超聲波法的最正確工藝條件為乙醇濃度50%、料液比115、提取時間45in，根據(jù)確定的最正確工藝條件，按實驗中的測定方法測得提取的總黃酮含量為69.25g/g。水浴法的最正確工藝條件為乙醇濃度50%、料液比120、提取溫度80、提取時間2h，按

2、實驗中的測定方法測得提取的總黃酮含量49.60g/g。結(jié)論超聲波提取不僅在時間上比水浴提取大大縮短，而且實驗過程易于控制，黃酮提取率也比水浴提取進步28.38%?！娟P(guān)鍵詞】草珊瑚；總黃酮；提取工藝；含量AbstratbjetiveTptiizetheextratinpressftheflavnidsfrsarandraglaber.ethdsUsedsarandraglaberasraaterials，tkethanlextratinethdsandusedultrasniaterbathtextrattheflavnids，thenusedL933Keyrdssarandraglaber；f

3、lavnids；extratinpress；ntent隨著草珊瑚在醫(yī)藥、獸藥、保健食品及保健用品領(lǐng)域中的應用越來越廣泛，對其有效成分的提取別離顯得越來越重要。黃酮類化合物是草珊瑚中含量最多、最主要的活性成分之一。目前，對草珊瑚總黃酮的提取別離工藝技術(shù)研究尚未見有詳細報道，本學位論文擬對草珊瑚總黃酮提取別離工藝技術(shù)進展較系統(tǒng)的研究并挑選最正確新技術(shù)新工藝。采用正交實驗方法考察沸水提取法及乙醇提取法對草珊瑚總黃酮提取效果的影響；采用中藥高新工程技術(shù)大孔吸附樹脂對草珊瑚總黃酮進展別離純化研究，以確定草珊瑚總黃酮最正確提取別離工藝條件及方法。以確定的草珊瑚總黃酮最正確提取工藝對不同季節(jié)采收的草珊瑚中總

4、黃酮含量的動態(tài)變化，草珊瑚自然存放時間不同對總黃酮含量的影響，貴州草珊瑚根、莖、葉中總黃酮的不同含量進展動態(tài)變化研究，以確定草珊瑚原料的最正確利用時機。從而為消費中最有效的開發(fā)利用草珊瑚，獲得草珊瑚總黃酮的最大提取率，發(fā)揮草珊瑚的最大經(jīng)濟效益提供實驗根據(jù)及指導，以到達提升草珊瑚藥、食用產(chǎn)品的質(zhì)量檔次，使其更具三效高效、速效、長效，三小劑量孝毒性孝不良反響小，三便便于貯藏，便于攜帶，便于服用的特點，使其產(chǎn)品能走出國門、出口創(chuàng)匯，有著重要的經(jīng)濟和社會意義1。1材料與方法1.1實驗材料原料：草珊瑚購于貴陽花果園藥材市場；NaN2固體重慶北碚精細化工廠；95%的乙醇溶液分析純遵義國營化學試劑廠；AlN

5、33固體匯源化工；NaH固體天津市化學試劑六廠三分廠。1.2實驗器材HH-S2s型恒溫水浴鍋金壇市環(huán)保儀器廠；UV2755B紫外可見分光光度計上海分析儀器總廠；抽濾機金宇機械；JY8896-IIN型數(shù)控超聲波細胞粉碎機寧波新芝生物科技；FA1004型電子分析天平上海天平儀器廠。1.3實驗方法參加乙醇，放入準備好的燒杯中，超聲波提取，抽濾液體，取0.3l參加25l容量瓶中，再在25l容量瓶中參加1l5%的NaN2溶液，等待6in后，再在25l容量瓶中參加0.5l5%的AlN33溶液，等待6in后，再在25l容量瓶中參加10l5%NaH溶液，并參加60%乙醇溶液定容。等待15in后在500n處檢測

6、吸光度，然后記錄數(shù)據(jù)做空白比照的不加AlN33。超聲波提取過程：1稱取草珊瑚5g分別裝入準備好了的燒杯中，在燒杯上填上編號，并記錄好數(shù)據(jù)。2用95%乙醇分別配制50%、60%、70%、80%的乙醇，按正交實驗設(shè)計搭配裝入對應號的錐形瓶中。3根據(jù)以上配置好的原料，放入超聲波儀器中進展提齲4將以上提取物過濾，將濾液按照實驗方法測出吸光度，并記錄好數(shù)據(jù)。參加乙醇，放入錐形瓶中，水浴鍋加熱，抽濾液體，取0.3l參加25l容量瓶中，再在25l容量瓶中參加1l5%的NaN2的乙醇溶液，等待6in后，再在25l容量瓶中參加0.5l5%的AlN33的乙醇溶液，等待6in后，再在25l容量瓶中參加10l5%Na

7、H的乙醇溶液，并參加60%乙醇溶液定容。等待15in后在500n處檢測吸光度，然后記錄數(shù)據(jù)作空白比照的不加AlN23。水浴提取的實驗過程為：1稱取草珊瑚5g分別裝入準備好了的錐形瓶中，在錐形瓶上填上編號，并記錄好數(shù)據(jù)；2用95%乙醇分別配制50%、60%、70%、80%的乙醇，按正交實驗設(shè)計搭配裝入對應號的錐形瓶中，并用保鮮膜密封好；3把錐形瓶放入已準備好的一定溫度的水浴中加熱，2h后取出抽濾液體轉(zhuǎn)入干凈的燒杯中，并用保鮮膜密封好；4將以上的提取物過濾，將濾液按照實驗方法測出吸光度，并記錄好數(shù)據(jù)。2實驗結(jié)果與討論2.1標準曲線的制備見圖1。從蘆丁對照儲藏液中分別汲取1l，放入1號、2號容量瓶中

8、25l，各加60%乙醇至5l，加5%NaN2溶液1.0l，搖勻放置6in，再加10%AlN33溶液0.5l空白對照不加，搖勻再放置6in，加4%NaH溶液10l，搖勻放置15in，從400600n處測吸光值：可得出蘆丁在500n處存在最大吸收峰?；貧w方程：A=0.0095+0.0016,線性范圍為059.82g/l，相關(guān)系數(shù)R2=0.9991圖1標準工作曲線N33溶液0.5l，搖勻再放置6in，加4%NaH溶液10l，搖勻放置15in，在500n波長處測定吸光度值，以同法配制空白不加硝酸鋁對照。顯色劑的配置：含量測定，標準曲線的繪制。所用試劑均為分析純，4%NaH乙醇溶液200l：稱取8gNa

9、H置入燒杯中，用200l60%乙醇溶解。10%AlN33乙醇溶液25l：稱取2.5gAlN33置于燒杯中，用25l60%乙醇溶解。5%NaN2乙醇溶液50l：稱取2.5gNaN2置于燒杯中，用50l60%乙醇溶液溶解2。2.2黃酮提取過程1超聲波提?。壕毞Q取枯燥、粉碎的草珊瑚粉末5g置于燒杯中，按實驗要求的料液比參加乙醇溶液浸泡，然后用超聲波提齲2水浴法提?。壕毞Q取枯燥、粉碎的草珊瑚粉末5g置于錐形瓶中，按實驗要求的料液比參加乙醇溶液浸泡并用保鮮膜密封好，然后放在水浴鍋上加熱2h，濾去殘渣。參加60%的乙醇6l，再參加5%NaN21.0l，搖勻放置6in，參加10%AlN330.5l做空白

10、對照的不加，搖勻放置6in，參加4%NaH10.0l，參加60%的乙醇定容至刻度。搖勻放置15in在500n處測吸光度，利用標準回歸方程計算出濃度。得到標準曲線回歸方程：A=0.0095+0.0016，相關(guān)系數(shù)R2=0.9992，根據(jù)標準方程可以推導出=A-0.0016/0.0095，為物質(zhì)濃度單位為g/l，提取黃酮的質(zhì)量g=25/310V10-3,提取總黃酮含量=提取黃酮的質(zhì)量g/原料草珊瑚質(zhì)量g。2.3超聲波法提取黃酮的單因素實驗設(shè)計及正交實驗數(shù)據(jù)處理說明：隨著乙醇濃度的增加，黃酮的提取率也逐漸增加，但是當乙醇濃度超過60%的時候，黃酮的提取率反而降低，是因為隨著乙醇濃度的增大，會使提取粗

11、品中雜質(zhì)含量增加，黃酮成分含量反而降低。表1乙醇濃度對草珊瑚黃酮提取的影響別離，因此選擇浸提固液比在115較為適宜。到達一定時間后，提取率增加緩慢或呈下降趨勢的原因可能是在長時間超聲作用下，提取率逐漸向極限值靠近，致使提取率增幅降低。同時超聲作用時間太長，會使提取粗品中雜質(zhì)含量增加，有效成分含量反而降低，影響提取物有效含量。故45in提取時間是最好的工藝條件。由以上單因素實驗可得出幾個在實驗過程中，對實驗結(jié)果有顯著作用的因素，他們分別是乙醇濃度50%、60%、70%，料液比110、115、120，提取時間15in、30in、45in，運用這些條件做出提取工藝參數(shù)設(shè)計表表4，為下面的正交實驗做好

12、準備條件。見表5、6。由表5可看出R料液比R乙醇濃度R提取時間，所以本實驗料液比作為主要因素，K1、K2、K3中數(shù)據(jù)最大者對應的程度為最正確程度，即轉(zhuǎn)化率最高。本實驗的最正確程度組合是A1B23，即最正確工藝條件為乙醇濃度50%、料液比115、提取時間45in。表4提取工藝參數(shù)設(shè)計表表5L933提取工藝條件正交實驗結(jié)果表表6最正確工藝條件提取由表6可看出黃酮含量69.25g/g，比正交實驗中的A1B22乙醇濃度50%、料液比115、提取時間30in所提取出的黃酮含量還高，證明本次正交設(shè)計實驗結(jié)論是合理的。2.4水浴法提取黃酮的單因素實驗設(shè)計及其正交實驗數(shù)據(jù)處理表7。表7乙醇濃度對水浴法提取效果

13、的影響由表7可看出：隨著乙醇濃度的增加，黃酮的提取率也逐漸增加，但從60%70%，吸光度增長幅度變小即提取的黃酮含量增長幅度變小，當乙醇濃度超過80%的時候，黃酮的提取率反而降低，提取的黃酮含量變小，是因為隨著乙醇濃度的增大，會使提取粗品中雜質(zhì)含量增加，有效成分含量反而降低，影響提取物有效含量。表8。由表8可看出在乙醇濃度60%、料液比120的不變條件下，隨著提取溫度的升高，吸光度值也在不斷的增長，6070的增長程度是最大的，吸表8提取溫度對水浴法提取黃酮效果的影響光度增長最大，但隨著溫度的繼續(xù)升高，吸光度的增長程度越來越小，是因為隨著溫度的增加，提取出來的黃酮參與了其他的反響，故提取的增長率

14、變小了溫度也不易太高，體積將會大量減少。表9。表9料液比對水浴法總黃酮提取效果的影響表9可見，浸提固液比在115至120的范圍內(nèi)，吸光度最高，但隨后增加溶劑的量對吸光度的變化不大，在實際操作中，當浸提固液比過小時，提取液偏少，不利于過濾別離，因此選擇浸提固液比在120較為適宜。由以上單因素實驗可得出幾個在實驗過程中，對實驗結(jié)果有顯著作用的因素，他們分別是乙醇濃度50%、60%、70%，料液比115、120、125，提取溫度60、70、80，運用這些條件做出提取工藝參數(shù)設(shè)計表表10，為下面的正交實驗做好準備條件，見表11、12。表10提取工藝參數(shù)設(shè)計表表11水浴法提取黃酮L933實驗表表12最正

15、確工藝條件確定表由表11可看出R料液比R提取溫度R乙醇濃度，所以本實驗料液比作為主要因素，K1、K2、K3中數(shù)據(jù)最大者對應的程度為最正確程度，即轉(zhuǎn)化率最高。本實驗的最正確程度組合是A1B23，即最正確工藝條件為乙醇濃度50%、料液比120、提取溫度80。由表12可看出黃酮含量49.60g/g，比正交實驗中的A1B22乙醇濃度60%、料液比120、提取溫度80所提取出的黃酮含量還高，證明本次正交設(shè)計實驗結(jié)論是合理的。3結(jié)論本文是通過對兩種不同的提取方法對草珊瑚進展總黃酮的提取的研究，以便為以后的提取研究找出適宜的實驗條件及設(shè)計。兩種不同的方法，同樣的浸提試劑，所提取的黃酮量是超聲波法提取的多于水浴法提取的，實驗得出結(jié)果：超聲波法的最正確工藝條件為乙醇濃度50%、料液比115、提取時間45in，根據(jù)確定的最正確工藝條件，按實驗中的測定方法測得提取的總黃酮含量為69.25g/g。水浴法的最正確工藝條件為乙醇濃度50%、料液比120、提取溫度80、提取2h，按實驗中的測定方法測得提取的總黃酮含量49.60g/g。超聲波輔助提取的優(yōu)點有：1所用的提取時間較水浴法縮短了兩倍多；2實驗過程中不用像水浴法一樣，要注意溫度的控制3；3所提取的黃酮含量比水浴提取高了28.38%。提取黃酮量,超聲波法提取的多于水浴法,分析