3質(zhì)量規(guī)格要求、生產(chǎn)使用工藝和檢驗(yàn)方法,食品中該添加劑的檢驗(yàn)方法或者相關(guān)情況說(shuō)明

1、產(chǎn)品名稱： 產(chǎn)品分類： 產(chǎn)品定義： 下加熱制成；不使用銨復(fù)合物 主要成分：焦糖色150b是通過(guò)對(duì)蔗糖按照控制的溫度進(jìn)行加熱處理，在鈉鹽存在 下，而制成的。產(chǎn)品描述： 深棕色至黑色液體或固體，氣味猶如燒焦的糖 理化要求： 溶解性：著色鑒定：1）焦糖色 150b 的質(zhì)量規(guī)格要求：焦糖色150b （堿性亞硫酸鹽焦糖色）著色劑碳水化合物中混入亞硫酸鹽復(fù)合物后，在添加或不添加酸或堿的條件。純度固體物質(zhì)含量 色度 總氮 總硫 二氧化硫 氨態(tài)氮易溶于水 通過(guò)測(cè)試 與二乙氨乙基纖維素結(jié)合的色素大于 50%，吸光率大于 50。 注意：砷、鉛等金屬的限量規(guī)定適用于各類焦糖，并以產(chǎn)品原 樣為基礎(chǔ)計(jì)算。其他限制及相應(yīng)

2、范圍按相關(guān)指示適用于個(gè)別種 類的焦糖，除非另有說(shuō)明，均以固體計(jì)算。65-72%0.06-0.10不超過(guò) 0.2%1.3 - 2.5%不超過(guò) 0.2%4-甲基咪唑（ MEI）: - 2-乙?；?4- 羥基-丁基咪唑（ THI）： - 砷：不超過(guò)1mg/kg （方法II ）鉛：不超過(guò) 2mg/kg焦糖的礦物質(zhì)含量 重金屬 （用鉛表示）：25mg/kg * 汞：1mg/kg *鎘：1mg/kg * 硒：1mg/kg * 鉛：2mg/kg *A砷1mg/kg *a銅5mg/kg鐵10mg/kg鉻1mg/kg注： *： 參照歐洲標(biāo)準(zhǔn)9545八：參照國(guó)際食品法典：蔗糖由于無(wú)法系統(tǒng)地控制以上數(shù)值，但為了定期

3、檢查這些數(shù)值，我們制定年度控 制規(guī)劃。焦糖的抗菌能力 鑒于合成于高干燥物質(zhì)，以及成酸性 PH 值，焦糖色有抵抗微生物的能力。但是， 當(dāng)焦糖色在與低干燥物質(zhì)在一起， PH 值成中性，并且稍有焦化時(shí)，焦糖色對(duì)抵抗 微生物的能力比較脆弱。 他們大部分屬于耐高滲酵母，容易在低潮濕的環(huán)境中生長(zhǎng)，同時(shí)，桿狀菌孢子可以 在惡劣的環(huán)境中成活。 通過(guò)對(duì)微生物的控制，以及人工感染試驗(yàn)（或者過(guò)度感染試驗(yàn)），以確定以下焦糖 色的抗菌能力： 由于在生產(chǎn)過(guò)程中的高度焦化，液體焦糖色或者粉狀的焦糖色有很強(qiáng)的抗菌能力， 使其避免受到微生物的威脅。 好氧性細(xì)菌和嗜溫性細(xì)菌總數(shù)： 10 UFC / g 孢子好氧性細(xì)菌和嗜溫性細(xì)菌

4、： 10 UFC /g 真菌： 10 UFC/g2）焦糖色 150b 的生產(chǎn)工藝： 供應(yīng)商 / 原材料： 我們的原材料來(lái)自可信的供應(yīng)商。每當(dāng)建立供應(yīng)關(guān)系時(shí)，我們會(huì)根據(jù)公司在相關(guān)質(zhì) 量，食品安全，過(guò)敏原，轉(zhuǎn)基因，以及電離化的相關(guān)規(guī)定，要求供應(yīng)商提供有效文 件。根據(jù)原材料的重量，我們的供應(yīng)商會(huì)定期接受審查。對(duì)每一種原材料進(jìn)行分析。按 照原材料分類，進(jìn)行年度采樣。生產(chǎn)工藝流程： 在生產(chǎn)過(guò)程中，對(duì)每一批產(chǎn)品進(jìn)行理化分析，檢測(cè)包括白利糖度，顏色，PH 值，及其密度。終產(chǎn)品： 每一批次的生病都是按照相關(guān)規(guī)定進(jìn)行監(jiān)控，只有符合規(guī)定后才能發(fā)貨。 根據(jù)年度抽樣計(jì)劃中的焦糖類型，我們嚴(yán)格進(jìn)行定時(shí)分析。（詳見后附技

5、術(shù)文件 NT06 和 NT09） 每一產(chǎn)品和包裝的原材料，我們將所有原材料的批號(hào)記錄在冊(cè)。本標(biāo)準(zhǔn)根據(jù) HACCP 以及 GMP （并參照附件 HACCP 操作規(guī)程） 根據(jù)國(guó)際食品法典的規(guī)定，我們有建立了 HACCP 體系，以及 HACCP 監(jiān)督管理人 員。公司還遵循 GMP 優(yōu)良生產(chǎn)規(guī)范。根據(jù)英國(guó)的食品安全標(biāo)準(zhǔn)， NIGAY 公司獲得英國(guó)零售商協(xié)會(huì)（ BRC British Retails Con sortium ）的認(rèn)證。獨(dú)立的審批單位“法國(guó)質(zhì)量協(xié)會(huì)”（ AFAQ： Association Francaise Pour Iassurance Qualit ）每年對(duì)NIGAY公司的生產(chǎn)進(jìn)行檢查

6、，以保證其生產(chǎn)符合IS090001標(biāo)準(zhǔn)和ISO140001標(biāo)準(zhǔn)。NIGAY已獲得ISO9000認(rèn)證和ISO140001認(rèn)證。 實(shí)施內(nèi)部監(jiān)控 （如內(nèi)部審計(jì) ），檢查產(chǎn)品是否符合標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)客戶的要求，客戶可以定期或不定期來(lái)對(duì)工廠的生產(chǎn)進(jìn)行審查。生產(chǎn)工藝流程圖3）焦糖色150b檢驗(yàn)方法，a）二乙氨乙基纖維素結(jié)合的色素在本規(guī)范中，二乙氨乙基纖維素結(jié)合的色素是由二乙氨乙基纖維素處理后的焦糖色素溶液在560nm波長(zhǎng)處吸光度降低的百分比來(lái)確定的。特殊反應(yīng)物：容量為0.7meq/gram的二乙氨乙基（DEAE纖維素；例如：由 Bio-Rad生產(chǎn)的Cellex D纖維素，或其他等效的二乙氨乙基纖維素，用量的大小

7、對(duì)應(yīng)于吸收容量的高低。步驟：在100毫升容量瓶中加入適量焦糖色素，用 0.025 N鹽酸溶解后制成在560nm波 長(zhǎng)處約為0.5吸光度單位的焦糖色素溶液，并用 0.025N的鹽酸稀釋定容；若溶液 渾濁，可通過(guò)離心或過(guò)濾去除難溶物。從中取出20毫升的焦糖色素溶液，加入200毫克二乙氨乙基纖維素，充分混合數(shù)分鐘，離心或過(guò)濾后取出上層清液。采用 適當(dāng)?shù)姆止夤舛葍x，以0.025N鹽酸作為參照進(jìn)行校準(zhǔn)后，在 560nm波長(zhǎng)處用1厘 米的比色皿測(cè)定焦糖色素溶液與上層清液的吸光度。按以下公式計(jì)算二乙氨乙基纖 維素結(jié)合色素的百分比：其中：人為焦糖色素溶液在560nm波長(zhǎng)處的吸光度；X 2為經(jīng)二乙氨乙基纖維素處

8、理后的上層清液在560nm波長(zhǎng)處的吸光度.b）磷?；w維素結(jié)合的色素在本規(guī)范中，磷酰基纖維素結(jié)合的色素是由磷?；w維素處理后的焦糖色素溶液在560nm波長(zhǎng)處吸光度降低的百分比來(lái)確定的。特殊反應(yīng)物： 容量為0.85meq/gram的磷酰基纖維素；例如：由Bio-Rad生產(chǎn)的Cellex P纖維素, 或其他等效的磷?；w維素，用量的大小對(duì)應(yīng)于吸收容量的高低。步驟：在100毫升容量瓶中加入200-300毫克焦糖色素，用0.025 N鹽酸稀釋定容；若 溶液渾濁，可通過(guò)離心或過(guò)濾去除難溶物。從中取出40毫升的焦糖色素溶液，加入2克磷?；w維素，充分混合數(shù)分鐘，離心或過(guò)濾后取出上層清液。采用適當(dāng)?shù)?分光光

9、度儀，以0.025N鹽酸作為參照進(jìn)行校準(zhǔn)后，在 560nm波長(zhǎng)處用1厘米的比 色皿測(cè)定焦糖色素溶液與上層清液的吸光度。按以下公式計(jì)算磷酰基纖維素結(jié)合色 素的百分比：麗其中：人為焦糖色素溶液在560nm波長(zhǎng)處的吸光度X 2為磷?；w維素處理后的上層清液在 560nm波長(zhǎng)處的吸 光度c）吸光率在本規(guī)范中，吸光率是指焦糖色素溶液在 280nn波長(zhǎng)處的吸光度與焦糖色素溶液在 560nn波長(zhǎng)處的吸光度之比。步驟：用適量的純水溶解100毫克焦糖色素，并轉(zhuǎn)移至100毫升的容量瓶中，稀釋定容后 充分混勻；若溶液渾濁，可通過(guò)離心去除難溶物。用吸量管取出5.0毫升清液，轉(zhuǎn)移至100毫升容量瓶中，加水稀釋定容，混合

10、均勻。采用適當(dāng)?shù)姆止夤舛葍x，以純 水作為參照進(jìn)行校準(zhǔn)后，在560nm波長(zhǎng)處用1厘米的比色皿測(cè)定0.1%焦糖色素溶 液的吸光度，并在280nm波長(zhǎng)處用1厘米的比色皿測(cè)定1:20焦糖稀釋液的吸光度。（適當(dāng)?shù)姆止夤舛葍x是指含有一個(gè)單色器，光譜帶寬不超過(guò)2nm且雜散光特性不超過(guò)0.5%的分光光度儀。）280nm波長(zhǎng)處所測(cè)得的吸光單位乘以20 （稀釋因子） 后，再除以560nm波長(zhǎng)處所測(cè)得的吸光單位，即可算出最終的吸光率。d）純度測(cè)試：固體含量焦糖色素的固體成分含量可以通過(guò)以下方法測(cè)得：將能通過(guò)40目濾網(wǎng)但無(wú)法通過(guò)60目濾網(wǎng)的純石英砂組成載體，將焦糖色素溶液置于載體上進(jìn)行干燥。用作載體 的石英砂須事先用

11、鹽酸煮解，隨后將酸洗凈，烘干、灼燒后備用。精確稱量30.0克經(jīng)上述處理的石英砂以及1.5-2.0克的焦糖色素，混合后在60度、低壓（50毫 米汞柱，6.7千帕）的條件下干燥至恒定重量，記錄干燥后石英砂與焦糖的總重量。 按以下公式計(jì)算固體百分比含量：%固體含量=Wf Ws 100WC其中：WF =最終石英砂與焦糖的總重量W S =石英砂的重量W c =最初添加的焦糖重量以固體計(jì)算： 總氮、總硫、氨態(tài)氮、二氧化硫、 4-甲基咪唑（4-MHI）和2-乙酰基-4-羥基-丁基 咪唑（THI）的含量均以固體計(jì)算。各種雜質(zhì)的濃度（Ci ）均按照原樣測(cè)得，隨后 按以下公式，換算出以固體計(jì)算的濃度（Cs）:Ci

12、 x 100Cs = %固體含量e）色度在本規(guī)范中，色度是指0.1%（質(zhì)量-體積百分比濃度）的焦糖色素水溶液在610 nm波長(zhǎng)處用1厘米的比色皿測(cè)得的吸光度。步驟：將100毫克焦糖色素轉(zhuǎn)移至100毫升的容量瓶中，用純水稀釋定容后充分混勻；若 溶液渾濁，可通過(guò)離心去除難溶物。采用適當(dāng)?shù)姆止夤舛葍x，以純水作為參照進(jìn)行 校準(zhǔn)后，在610nm波長(zhǎng)處用1厘米的比色皿測(cè)定清液的吸光度（AQ,按以下公 式計(jì)算焦糖色素的色度：A610 x 100色度=_、固體含量百分體含的測(cè)定方法如“固體含量”一節(jié)中所述。以等色度計(jì)：對(duì)于以等色度計(jì)的 4-甲基咪唑（4-MHI）和2-乙?；?羥基-丁基咪 唑（THI）的附加限

13、制，先按“以固體計(jì)算”一段中所述方法，測(cè)得以固體計(jì)算的 濃度，然后按以下公式，換算成以等色度計(jì)的濃度Cs等色度濃度=.1其中Cs =以固體計(jì)算的濃度。以等色度計(jì)其實(shí)就是以色度為0.1吸收度單位（AU）的產(chǎn)品為準(zhǔn)計(jì)算的色度f(wàn)）總硫?qū)?-3克MgO或等效的Mg（NO2. 6H2O （6.4 - 19.2克）、1克蔗糖粉，以及50毫升HNO置于電馬弗爐所能容下的最大的焙盤中，加入5-10克焦糖色素。將等量的反應(yīng)物放在另一個(gè)焙盤中作為空白對(duì)照。用蒸汽加熱直至反應(yīng)物變成糊狀。將 焙盤放在常溫（25度）電馬弗爐中，逐漸加熱直至出現(xiàn) NQ煙霧。用鹽酸（1+2.5） 冷卻、溶解和中和上述反應(yīng)物，添加 5毫升以

14、上的鹽酸；過(guò)濾后加熱至沸騰，隨后 逐滴加入5毫升10%的BaCl2 2H2O溶液；蒸發(fā)至100毫升后靜置過(guò)夜，然后過(guò) 濾、漂洗、灼燒并稱出BaSQ的重量。按空白對(duì)照中所測(cè)得的 BaSQ質(zhì)量對(duì)最終結(jié) 果進(jìn)行校正，并以每100克焦糖中含有xx毫克硫的形式來(lái)表示。除上述方法外， 還可使用力可（Leco）燃燒/滴定儀等專門用于分析總硫含量的商業(yè)儀器來(lái)進(jìn)行測(cè) 定，建議樣本大小為200毫克。g）二氧化硫裝置：使用經(jīng)改良的摩尼爾威廉（Moni er-Williams ）裝置（位于美國(guó)新澤西州 Bloomfield的5GA Scientific 股份有限公司有售）來(lái)測(cè)定硫酸，或按下圖所示自行 搭建一套裝置。圖

15、示裝置中包含一個(gè)1000毫升、帶24/40標(biāo)準(zhǔn)錐形磨口玻璃接頭的 三頸圓底蒸餾燒瓶。一個(gè)的30厘米Allihn球形冷凝管按回流方向與蒸餾燒瓶右側(cè)頸 部相連，冷凝管的另一端用1/4英寸的聚乙烯或硅膠管（事先用5%的鹽酸溶液煮沸 并用水漂洗）與吸收管裝置（擁有35/20球接頭或與之相當(dāng)?shù)慕宇^）相連。燒瓶中 央頸部連有一個(gè)125毫升的圓筒分離器，分離器的另一端通過(guò)一小段軟管與短U型管相連。蒸餾燒瓶的左側(cè)頸部連有彎曲的玻璃進(jìn)氣管，進(jìn)氣管下端插至燒瓶底部；使 用一小段軟管，將上述進(jìn)氣管與250毫升洗氣瓶的一端相連，洗氣瓶的另一端通過(guò) 軟管與氮?dú)飧紫噙B。在小號(hào)研缽中加入4.5克焦酚（焦棓酸）與5毫升水后

16、充分研磨成漿，并將液漿轉(zhuǎn)移至洗氣瓶中。繼續(xù)研磨 所剩殘?jiān)?，分兩次使?ml純水，將其定量轉(zhuǎn)移至洗 瓶中。從氮?dú)飧變?nèi)釋放氮?dú)庵料礆馄浚懦銎績(jī)?nèi)空氣。 在85毫升水中溶解65克氫氧化鉀并冷卻，使用長(zhǎng)頸漏 斗將上述氫氧化鉀水溶液轉(zhuǎn)移至洗氣瓶中。將瓶蓋放 回原位，并向瓶?jī)?nèi)釋放氮?dú)庖匀コ靠诓糠值目諝狻?用夾子夾起洗氣瓶?jī)啥说能浌?，并將洗氣瓶與蒸餾燒 瓶左側(cè)的玻璃進(jìn)氣管相連。須于使用當(dāng)天在洗氣瓶?jī)?nèi)加入上述新鮮焦酚溶液。 在吸收管裝置中的每一段U管內(nèi)加入：兩段直徑8毫米，長(zhǎng)度約25毫米的玻璃棒， 并在出口端加入10毫升 3毫米玻璃微珠，10.0毫升3%勺過(guò)氧化氫溶液，以及1滴甲基 紅試劑。按規(guī)定連接裝置中

17、的各個(gè)組成部分，并通過(guò)與圓筒分離器頸部相連的軟管向內(nèi)輕輕 吹氣以檢查密封性；吹氣時(shí)須關(guān)閉分離器的活塞。靜置數(shù)分鐘后，若U型管內(nèi)的液體平面等高，請(qǐng)檢查并加固各個(gè)連接處的密封裝置，并再次測(cè)試。確定整個(gè)系統(tǒng)已 具有良好的密封性后，即可按以下步驟進(jìn)行檢測(cè)。步驟：準(zhǔn)確稱重25克樣品，加入300毫升剛剛經(jīng)過(guò)煮沸并冷卻的水中溶解分散，使用大口 漏斗將液漿轉(zhuǎn)移至燒瓶中，必要時(shí)可適量使用純水促進(jìn)液漿的轉(zhuǎn)移。用水稀釋至 400毫升，重新連上分離器并保持接口密封。在分離器中添加90毫升4N鹽酸，通過(guò)分離器頸部的軟管向內(nèi)吹氣，讓鹽酸進(jìn)入蒸餾燒瓶。關(guān)閉分離器的活塞。松開洗氣瓶?jī)啥塑浌苌系墓軍A，并開啟氮?dú)饬?，保持持續(xù)而穩(wěn)

18、定的氣泡。使用加熱罩加熱蒸餾燒瓶以產(chǎn)生回流，整個(gè)過(guò)程約需 20分鐘。實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定回流后，對(duì)加熱罩施 加線電壓以保持回流，持續(xù)約1小時(shí)45分鐘。關(guān)閉冷凝器中的水流，并繼續(xù)加熱， 直到第一個(gè)U型管中的進(jìn)氣接頭出現(xiàn)冷凝液并產(chǎn)生微熱。移除分離器并停止加熱。 待冷凝器頂端的接口冷卻后，取下與其相連的吸收裝置并進(jìn)行漂洗，直至液體進(jìn)入 至第二個(gè)U型管。將兩個(gè)U型管之間的連接管與第二個(gè) U型管的入口部分?jǐn)嚅_，但仍 與第一個(gè)U型管的出口部分相連。旋轉(zhuǎn)連接管，直至其另一端幾乎接觸到第一個(gè)1型管的入口部分。在第一個(gè)I型管中加入1滴甲基紅試劑，用0.1N氫氧化鈉溶液進(jìn)行滴 定，不時(shí)地輕輕晃動(dòng)促進(jìn)混合，直至溶液變?yōu)辄S色澄清

19、。第一個(gè)1型管內(nèi)的中和滴定完成后，移除連接管，將其連至第二個(gè)U型管的出口部分，并用相同的方法進(jìn)行滴定。將兩次滴定中所消耗的氫氧化鈉體積（以毫升計(jì)）相加，所得結(jié)果便是以下 公式中的S。再進(jìn)行一次空白試驗(yàn)，并算出滴定時(shí)所消耗的0.1N氫氧化鈉溶液的體積，所得結(jié)果為以下公式中的B。按以下公式計(jì)算樣品中的二氧化硫百分比含量： 其中W為所添加的樣品質(zhì)量，以克計(jì)。h）氨態(tài)氮在500毫升的接收瓶中加入25毫升0.1N硫酸，并將其與一套蒸餾裝置相連。上述蒸 餾裝置由一個(gè)凱氏（Kjeldahl ）連接球管和一個(gè)冷凝管組成，冷凝管的導(dǎo)管下端插 入接收瓶中硫酸溶液內(nèi)。正確稱重2克焦糖色素，轉(zhuǎn)移至800毫升的長(zhǎng)頸凱式

20、（Kjeldahl ）分解瓶中，并在瓶中添加2克氧化鎂（不含碳酸鹽），200毫升水，以 及少量沸石。旋動(dòng)分解瓶以混合上述添加物，并快速連接至蒸餾裝置。加熱分解瓶 直至液體沸騰，在接收瓶中收取約100毫升蒸餾物。用幾毫升水清洗導(dǎo)管頭，并用 收集瓶收集洗液；隨后在瓶?jī)?nèi)添加4、5滴甲基紅試劑（500毫克甲基紅溶于100毫升 酒精制成），并用0.1N的氫氧化鈉進(jìn)行滴定。記錄滴定時(shí)所消耗的氫氧化鈉體積（以毫升計(jì)），所的結(jié)果便是以下公式中的 S。然后再進(jìn)行一次空白試驗(yàn)，并記下 中和滴定時(shí)所消耗的0.1N氫氧化鈉的體積（以毫升計(jì)），所的結(jié)果便是以下公式中 的B。按以下公式計(jì)算樣品中氨態(tài)氮的百分比含量。氨態(tài)氮

21、=其中W為所添加的焦糖色素的質(zhì)量，以克計(jì)。i）4-甲基咪唑注：正在尋找改良方法本項(xiàng)試驗(yàn)需要用到以下器材與反應(yīng)物（如適用，反應(yīng)物）： 器材：Pyrex玻璃絨、22 x 300毫米帶聚四氟乙烯活塞的色譜柱（如： Kimax 17800）、150毫升聚丙烯燒杯（如：Nalge 1201 ）、250 毫升圓底燒瓶（如：Pyrex 4320 ）、75毫米填料斗、5厘米刮刀、旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器、電熱爐、水浴盤、拋棄型巴氏吸管、5毫升容量瓶。反應(yīng)物：丙酮、Celite 545、二氯甲烷、氫氧化鈉，以及四氫呋喃。步驟：通過(guò)晃動(dòng)和攪動(dòng)充分混合焦糖色素后，稱量10.00克作為樣品，放入150毫升的聚丙烯燒杯中。聚丙烯

22、燒杯的表面不易被水沾濕，有助于促進(jìn)定量樣品的轉(zhuǎn)移，因此 優(yōu)于玻璃燒杯。在燒杯中加入 5.0克3.0N氫氧化鈉后充分混合，以確保杯內(nèi)所含 樣品的pH值大于12。隨后，在燒杯中加入20克Celite 545，充分混勻直至呈現(xiàn) 半干質(zhì)地；整個(gè)混合過(guò)程大約需要 2至3分鐘。若焦糖色素樣品的水分含量特別高， 則會(huì)導(dǎo)致最終焦糖色素與 Celite 545 混合物過(guò)濕。如出現(xiàn)此類情況，可將 5.00 g 焦糖色素與2.5克3.0N氫氧化鈉后，加入15克Celite 545，并延用于后續(xù)的分 析中。取出一根22 x 300毫米、帶聚四氟乙烯活塞的色譜柱，用 Pyrex玻璃棉堵住色譜柱 的底端。使用75毫米填料

23、斗，在色譜柱中加入焦糖色素與 Celite 545的混合物。讓 混合物沿垂直方向下落約10厘米，直至碰到下方緩沖表面；重復(fù)上述操作以沉淀柱 中樣品。焦糖色素與Celite 545的混合樣品經(jīng)沉淀后，應(yīng)將色譜柱下端 250毫米的 部分填滿。進(jìn)行上述操作時(shí)應(yīng)格外小心，以防色譜柱內(nèi)填料過(guò)松或過(guò)緊。填料過(guò)松 會(huì)導(dǎo)致二氯甲烷洗脫過(guò)快，萃取不完全；填料太緊，如：壓緊柱內(nèi)填充物，則會(huì)導(dǎo) 致萃取溶劑無(wú)法滲入柱內(nèi)填充物的不同位置，造成萃取不完全。打開色譜柱底端的活塞，使用樣品燒杯向柱內(nèi)傾倒二氯甲烷。當(dāng)上述溶劑抵達(dá)柱底 的玻璃棉塞時(shí)，關(guān)閉活塞，讓溶劑與柱內(nèi)填料充分混合5分鐘。然后打開活塞，繼續(xù)使用二氯甲烷洗脫色譜

24、柱，前后使用的二氯甲烷總體積約為200毫升；用250毫升的圓底燒瓶收集洗脫液。在收集到的洗脫液中加入 1.00毫升2-甲基咪唑內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)液（50毫克2-甲基咪唑溶于50.0毫升二氯甲烷）。2-甲基咪唑在所采用的氣液色譜分 析中不會(huì)與4-甲基咪唑相混，而且在焦糖色素中也沒有發(fā)現(xiàn)存在該物質(zhì)。將圓底燒瓶至于35度恒溫水浴中，使用旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器，在 45-50千帕的條件下去 除大部分溶劑。用拋棄型巴氏吸管將余下的萃取液定量轉(zhuǎn)移至5毫升容量瓶中，使用少量（ca. 0.75毫升）的四氫呋喃或丙酮潤(rùn)洗圓底燒瓶數(shù)次；上述兩種溶劑的效 用完全相同。倒置容量瓶數(shù)次使萃取液中的各組分充分混合后，即可進(jìn)行氣液色譜 分析。

25、萃取液制得后，應(yīng)盡快進(jìn)行分析；萃取液若放置1天以上，其穩(wěn)定性有時(shí)會(huì)發(fā)生改變。用于氣液色譜分析的設(shè)備是一個(gè)帶氫焰檢測(cè)器的氣相色譜儀。色譜柱為玻璃材質(zhì)， 規(guī)則為1毫米x 6毫米外徑x 4毫米內(nèi)徑，柱內(nèi)充填有7.5%的聚乙二醇20M與2% 的氫氧化鉀，底部為90/100孔Anakrom ABS氣液色譜分析的具體參數(shù)如下：載 體：氮，每分鐘50毫升；氫，每分鐘50毫升；氧，每分鐘80毫升；進(jìn)樣口 200 度，柱溫180度恒溫，檢測(cè)器250度，樣品大小：5微升。一律采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定 量分析j）2-乙酰基 4 羥基-丁基咪唑（THI）注：正在尋找改良方法將THI轉(zhuǎn)化為THI 2,4-二硝基苯腙衍生物（TH

26、I-DNPH。此類衍生物在使用 RP-8 色譜柱進(jìn)行高效液相色譜分析時(shí)，能與過(guò)量反應(yīng)物及羧基污染物有效分離。最后， 測(cè)量產(chǎn)物在385nm波長(zhǎng)處的吸光度。步驟： 準(zhǔn)確稱量200-250毫克焦糖色素，添加3毫升水進(jìn)行溶解。將溶液定量轉(zhuǎn)移至組合柱 上段，然后用水進(jìn)行洗脫（共有100毫升水通過(guò)組合柱）。移除上端的色譜柱，下端色譜柱使用0.5N鹽酸進(jìn)行洗脫，丟棄最初的10.0毫升洗脫 液，并保留余下的35毫升洗脫液。在40度15托的條件下濃縮干燥洗脫液，余下的糖漿用250微升不含羧基的甲醇進(jìn)行溶解，并加入250微升2,4-二硝基苯腙反應(yīng)劑。將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至小瓶中，用圭寸 口膜封口后在室溫下貯存5小時(shí)。

27、在LiChrosorb RP-8 （10微米）高效液相色譜柱中注入 5微升（也可以從1微升至 25微升）樣品。流動(dòng)相由甲醇與 0.1M磷酸組成，兩者體積比為50： 50。不同的制 造商所生產(chǎn)的色譜柱具有不同的特性，因此，需要按實(shí)際情況調(diào)整流動(dòng)相組成。（強(qiáng)烈推薦使用LiChrosorb RP-8，10微米，250 x 4毫米Vertex色譜柱，由位 于德國(guó)巴德霍姆堡的Knauer公司生產(chǎn)）。流動(dòng)相的流速為每分鐘 2毫升，色譜柱 尺寸為250 x 4.6 毫米，THI-DNPH的洗脫時(shí)間約為6.3 0.1分鐘。在385nm波長(zhǎng) 處檢測(cè)洗脫液，測(cè)出峰值高度。以 THI-DNPH 甲醇混合液為準(zhǔn)繪制標(biāo)

28、準(zhǔn)曲線，并以 此推算出樣品中的THI含量。材料：-2,4-二硝基苯肼氫氧化物反應(yīng)劑：將10毫升濃縮鹽酸轉(zhuǎn)移至100毫升的錐形燒瓶 中，加入5克商品2,4-二硝基苯肼后輕輕搖動(dòng)，直至自由基（紅色）轉(zhuǎn)變?yōu)闅溲趸?物（黃色）。加入100毫升甲醇，并用蒸汽浴對(duì)混合物進(jìn)行加熱，直至固體完全溶 解。在室溫下結(jié)晶后，濾去氫氧化物，用乙醚潤(rùn)洗；隨后在室溫下進(jìn)行干燥，并貯 存于干燥器內(nèi)。在貯存過(guò)程中，氫氧化物會(huì)慢慢轉(zhuǎn)變?yōu)樽杂苫枚籽趸彝闈?rùn) 洗便可去除。將0.5克2,4-二硝基苯肼氫氧化物與15毫升5%的甲醇-二甲氧基乙烷溶 液混合30分鐘后，即可制成所需的反應(yīng)劑。反應(yīng)劑應(yīng)貯存于冰箱內(nèi)，并定期使用高 效液相色譜進(jìn)行檢驗(yàn)。+-陽(yáng)離子交換樹脂（強(qiáng)）： Dowex 50 AG x 8, H , 100-200孑L+-陽(yáng)離子交換樹脂（弱）：Amberlite CG AG 50 I, H , （100-200 孔）。（使用前 須沉淀兩到三次）。-甲醇，不含羧基：甲醇的制備按 丫. Peleg與C.H. Mannheim，農(nóng)業(yè)與食品化學(xué) 雜志，18 （1970） 176中所描述的方法，用Gurard試劑P進(jìn)行處理。-二