APE1在肝細(xì)胞癌組織芯片的表達(dá)及臨床病理

1、APE1在肝細(xì)胞癌構(gòu)造芯片的表達(dá)及臨床病理【摘要】目的探究脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1(ape1)基因在原發(fā)性肝細(xì)胞癌(h)的表達(dá)及其與臨床病理變革的干系。要領(lǐng)應(yīng)用免疫構(gòu)造化學(xué)要領(lǐng),檢測(cè)包羅h及轉(zhuǎn)移灶、癌旁肝硬化構(gòu)造、癌旁慢性肝炎構(gòu)造和正常肝構(gòu)造的構(gòu)造芯片中ape1的表達(dá)環(huán)境,團(tuán)結(jié)臨床病理資料舉行統(tǒng)計(jì)闡發(fā)。效果ape1在癌旁肝硬化構(gòu)造、癌旁慢性肝炎構(gòu)造和正常肝構(gòu)造以細(xì)胞核表達(dá)為主,在h和轉(zhuǎn)移灶構(gòu)造以細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核團(tuán)結(jié)表達(dá)為主(p0.01)。細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核染色強(qiáng)度均與h分級(jí)和轉(zhuǎn)移嚴(yán)密相干(p0.01),細(xì)胞質(zhì)染色強(qiáng)度還與腫瘤包膜有無(wú)浸潤(rùn)有關(guān)(p0.01)。結(jié)論ape1卵白表達(dá)與h惡性表型有關(guān),ape

2、1卵白過(guò)表達(dá)及細(xì)胞質(zhì)表達(dá)的出現(xiàn)大概成為h預(yù)后不良的指標(biāo)之一。【關(guān)鍵詞】癌,肝細(xì)胞;內(nèi)切核酸酶類;芯片闡發(fā)技能;免疫構(gòu)造化學(xué);預(yù)后expressinfape1anditslinialipliatininhepatelluararinausingtissuehipassayzhengzhihua,huangaiin,liujingfeng,zangshengbin,galingyun,henshuiping1.divisinfpathlgy,shlfbasiedialsiene,institutefnlgy,fujianedialuniversity,fuzhu350004,hina2.depar

3、tentfsurgery,theaffiliatedfirsthspital,fujianedialuniversity,fuzhu350005,hinakeyrds:arina,hepatelluar;endnuleases;irhipanalytialpredures;iunhistheistry;prgnsis肝細(xì)胞癌(hepatellulararina,h)是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其癌變是一個(gè)多步調(diào)的漸進(jìn)歷程,與慢性肝臟損傷、肝炎和肝硬化有關(guān)。脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1(ape1)是一種多成效的堿基切除修復(fù)途徑的關(guān)鍵酶,具有脫嘌呤/脫嘧啶位點(diǎn)(ap位點(diǎn))核酸內(nèi)切酶(ape)活性,修

4、復(fù)烷化劑、氧自由基、電離輻射等因素產(chǎn)生的dna損傷。ap位點(diǎn)是dna最常見(jiàn)的損傷位點(diǎn)之一,具有細(xì)胞毒性和基因毒性,假設(shè)不克不及修復(fù),可攔阻dna的復(fù)制,導(dǎo)致基因突變、染色體微衛(wèi)星不不變性或細(xì)胞凋亡,終極可導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生。ape1別名氧化還緣故原由子1(ref-1),可調(diào)治很多轉(zhuǎn)錄因子的dna團(tuán)結(jié)活性,到場(chǎng)細(xì)胞增殖、分化和細(xì)胞凋亡等多種關(guān)鍵的細(xì)胞反響。筆者接納構(gòu)造芯片技能檢測(cè)ape1在h、轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)環(huán)境,闡發(fā)ape1表達(dá)與h臨床病理因素的干系。1工具與要領(lǐng)1.1工具網(wǎng)絡(luò)福建醫(yī)科大學(xué)隸屬第一病院19982022年手術(shù)切除標(biāo)本,此中h126例,癌旁肝硬化構(gòu)造(距癌構(gòu)造2,鏡下無(wú)癌)95例,癌旁慢

5、性肝炎構(gòu)造(距癌構(gòu)造5)46例,肝表里轉(zhuǎn)移灶29例,術(shù)前均未化療及放療。男性114例,女性10例,60歲28例,60歲96例。根據(jù)?中國(guó)常見(jiàn)腫瘤診治范例?對(duì)腫瘤舉行構(gòu)造學(xué)分類:梁狀型、假腺管型、實(shí)體型、硬化型。根據(jù)edndsn構(gòu)造學(xué)分級(jí)法舉行病理學(xué)分級(jí)分為i級(jí),并斷定有無(wú)包膜癌浸潤(rùn)和產(chǎn)生肝表里轉(zhuǎn)移。根據(jù)腫瘤巨細(xì)和數(shù)目分為3組:腫瘤直徑3,腫瘤直徑35,腫瘤數(shù)目2個(gè)或直徑5。另網(wǎng)絡(luò)正常肝構(gòu)造5例,泉源于1998-2022年福建醫(yī)科大學(xué)隸屬第一病院手術(shù)切除的肝血管瘤的瘤旁肝構(gòu)造。1.2要領(lǐng)鼠抗人ape1ab(克隆號(hào)13b8e52,美國(guó)nvusbilgials公司),事情濃度118000;elivi

6、sinplus免疫構(gòu)造化學(xué)試劑盒(kit-9901,福州邁新生物科技)。根據(jù)免疫構(gòu)造化學(xué)elivisinplus二步法試劑盒說(shuō)明操縱,dab顯色。以pbs取代一抗作為陰性比擬。1.3制作構(gòu)造芯片根據(jù)研究目的方案點(diǎn)陣,選擇典范地區(qū)在玻片和相應(yīng)蠟塊做標(biāo)識(shí)表記標(biāo)幟。將本研究小組已制成的定位板蓋在受體蠟塊上1,根據(jù)定位板的點(diǎn)陣打孔,并從供體蠟塊已標(biāo)識(shí)表記標(biāo)幟的典范地區(qū)鉆取構(gòu)造,每個(gè)地區(qū)3個(gè)構(gòu)造孔,轉(zhuǎn)移到受體蠟塊的承載孔。將構(gòu)造芯片和四周蠟質(zhì)加熱交融。1.4效果斷定1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處置懲罰接納spss11.5統(tǒng)計(jì)軟件闡發(fā),選用參數(shù)秩和查驗(yàn)對(duì)兩個(gè)樣本半定量品級(jí)資料舉行闡發(fā),選用kurskal-allish查驗(yàn)

7、對(duì)多個(gè)樣本半定量資料舉行闡發(fā),選用spearan秩相干舉行指標(biāo)間的相干闡發(fā)。2效果構(gòu)造芯片免疫構(gòu)造化學(xué)封片后不雅察,部門構(gòu)造有脫片,以每個(gè)病灶的3個(gè)點(diǎn)(至少有2個(gè)點(diǎn))滿意研究需求為尺度,不然剔除該病例。126例h中2例由于構(gòu)造脫落不克不及舉行闡發(fā),別的124例均進(jìn)入有用闡發(fā)。2.1ape1定位表達(dá)ape1卵白在各構(gòu)造的定位表達(dá)見(jiàn)表1。差異實(shí)行組ape1表達(dá)方法差異,在正常肝構(gòu)造、癌旁肝炎構(gòu)造和癌旁肝硬化構(gòu)造,ape1重要以細(xì)胞核表達(dá)為主;在h和轉(zhuǎn)移灶,ape1重要以細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核團(tuán)結(jié)表達(dá)為主,顯微鏡下不雅察到細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均出現(xiàn)棕黃色顆粒(圖1a)。124例h中,44例為單純細(xì)胞核染色,鏡下僅

8、在細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒(圖1b)。表1各組ape1卵白的定位表達(dá)略2.2ape1的半定量表達(dá)各組細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)著色強(qiáng)度見(jiàn)表2。表2各實(shí)行組ape1卵白的半定量表達(dá)略2.3ape1表達(dá)與h臨床病理因素的干系隨著病理構(gòu)造學(xué)分級(jí)的升高,ape1細(xì)胞核陽(yáng)性強(qiáng)度依次增高(rs=0.353,p=0.001),細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性強(qiáng)度亦有依次增高(rs=0.217,p=0.015)。包膜浸潤(rùn)組與包膜無(wú)浸潤(rùn)組比擬,細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性強(qiáng)度具有明顯差異(p0.001),而細(xì)胞核陽(yáng)性強(qiáng)度無(wú)差異。與無(wú)腫瘤轉(zhuǎn)移組比擬,腫瘤轉(zhuǎn)移組中細(xì)胞核陽(yáng)性強(qiáng)度顯著升高(p=0.002)。細(xì)胞質(zhì)陰性染色13例,占轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組的44.8,其他3種染色強(qiáng)度效

9、果均低于陰性染色組。ape1表達(dá)與年事、性別、腫瘤大孝構(gòu)造學(xué)分型無(wú)關(guān)(表3)。表3ape1卵白表達(dá)與h臨床病理特性的干系略3討論本研究接納構(gòu)造芯片和免疫構(gòu)造化學(xué)相團(tuán)結(jié),檢測(cè)ape1在h的表達(dá),節(jié)省實(shí)行本錢,大大進(jìn)步實(shí)行服從,并包管實(shí)行條件的同一性,淘汰了因平凡實(shí)行要領(lǐng)中分批、分次實(shí)行造成的實(shí)行偏向,進(jìn)步了實(shí)行效果的可*性。同時(shí),通過(guò)敵手工制作構(gòu)造芯片的要領(lǐng)舉行改進(jìn),應(yīng)用改進(jìn)的打孔針和取材針,進(jìn)步芯片制作的服從和質(zhì)量,使檢測(cè)ape1表達(dá)的實(shí)行體系更切合不雅察和進(jìn)一步研究必要。ape1是一個(gè)具有雙成效的限速酶,既賣力修復(fù)種種因素產(chǎn)生的ap位點(diǎn),又通過(guò)保持很多轉(zhuǎn)錄因子(如p53、nf-b、pax-5

10、、pax-8、hif-1、reb、atf和hlf等)dna團(tuán)結(jié)地區(qū)特異性半胱氨酸的復(fù)原狀態(tài),維持轉(zhuǎn)錄因子的激活復(fù)原態(tài),從而調(diào)治dna團(tuán)結(jié)活性,發(fā)揮緊張作用。以上兩種成效的非常均可導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生。在人體細(xì)胞中,ape1的表達(dá)可以細(xì)胞質(zhì)型、細(xì)胞核型、細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞核型3種形式存在。既往研究在卵巢癌、皮膚惡性玄色素瘤和結(jié)腸癌等多種腫瘤中創(chuàng)造,正常構(gòu)造中ape1以細(xì)胞核表達(dá)為主,腫瘤構(gòu)造以質(zhì)核團(tuán)結(jié)表達(dá)為主,ape1表達(dá)定位的改變與腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化嚴(yán)密相干3-5。本研究效果表現(xiàn),質(zhì)核團(tuán)結(jié)表達(dá)方法比例在癌旁肝炎構(gòu)造和癌旁肝硬化構(gòu)造、h和轉(zhuǎn)移灶組依次遞增,正常肝構(gòu)造未見(jiàn)質(zhì)核團(tuán)結(jié)表達(dá)方法,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示

11、hape1卵白表達(dá)定位的改變,即從細(xì)胞核表達(dá)方法轉(zhuǎn)釀成細(xì)胞質(zhì)表達(dá)方法,具有緊張意義。細(xì)胞質(zhì)表達(dá)方法的出現(xiàn),大概與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)。該效果與以往對(duì)肺癌、乳腺癌的相干研究效果同等6-7。如今,對(duì)ape1的定位表達(dá)機(jī)制尚缺乏明白的表達(dá)。tell等研究創(chuàng)造,種種導(dǎo)致ape1表達(dá)加強(qiáng)的應(yīng)激因素(如uv、hbv、hv和rs等),可到場(chǎng)調(diào)控ape1在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸8。ape1在惡性腫瘤中的細(xì)胞質(zhì)定位,大概是外來(lái)因子造成了線粒體內(nèi)的dna損傷,在線粒體內(nèi)出現(xiàn)了dnaap位點(diǎn)的修復(fù)。因此,推測(cè)ape1在惡性腫瘤中的定位機(jī)制與其所受的應(yīng)激有關(guān)。本研究創(chuàng)造ape1在h中重要定位于細(xì)胞質(zhì),而hbx是引起ape1移位至

12、細(xì)胞質(zhì)的重要損傷因子,推測(cè)h中ape1在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)與hbx損傷有嚴(yán)密干系。vittri等創(chuàng)造,低分化肝細(xì)胞癌與高分化肝細(xì)胞癌比擬,ape1細(xì)胞質(zhì)染色強(qiáng)度顯著加強(qiáng)9。在腦星形細(xì)胞腫瘤中創(chuàng)造,、級(jí)腫瘤的ape1核表達(dá)陽(yáng)性強(qiáng)度明顯高于級(jí),并與腫瘤復(fù)發(fā)有關(guān)10,進(jìn)一步提示ape1的表達(dá)加強(qiáng)與腫瘤的惡性分化具有顯著干系。本研究效果表現(xiàn),細(xì)胞核表達(dá)陽(yáng)性強(qiáng)度和細(xì)胞質(zhì)表達(dá)陽(yáng)性強(qiáng)度在各實(shí)行組中差異。在正常組、癌旁肝炎組、癌旁肝硬化組、h組和轉(zhuǎn)移組同樣別離呈依次遞增趨勢(shì)(p0.001)。因此以為ape1過(guò)表達(dá)與h產(chǎn)生、生長(zhǎng)嚴(yán)密相干。進(jìn)一步闡發(fā)ape1表達(dá)程度與臨床各病理參數(shù)之間的干系,效果表現(xiàn)ape1細(xì)胞核和細(xì)胞

13、質(zhì)陽(yáng)性強(qiáng)度與腫瘤病理學(xué)分級(jí)、有無(wú)肝表里轉(zhuǎn)移灶嚴(yán)密相干,后者還與包膜有無(wú)腫瘤浸潤(rùn)有關(guān)。ape1在細(xì)胞質(zhì)和胞核過(guò)表達(dá)均與h的惡性臨床表型有嚴(yán)密干系。puglisi等研究效果表現(xiàn),ape1卵白的細(xì)胞質(zhì)定位與肺癌、乳腺癌的不良預(yù)后有關(guān)6-7。由于本研究尚缺乏完備的隨訪資料,未能對(duì)ape1卵白的表達(dá)與預(yù)后的干系舉行直接表達(dá),但本研究表現(xiàn),ape1的細(xì)胞質(zhì)表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān),且ape1過(guò)表達(dá)還與包膜侵占和病理學(xué)分級(jí)有干系,而這些參數(shù)與h的侵襲力和預(yù)后均有非常嚴(yán)密的干系。因此推測(cè),ape1卵白的細(xì)胞質(zhì)表達(dá)及細(xì)胞質(zhì)+細(xì)胞核過(guò)表達(dá)大概與h的預(yù)后有關(guān)。對(duì)h中ape1表達(dá)特點(diǎn)的研究具有緊張意義,其細(xì)胞質(zhì)表達(dá)方法的

14、出現(xiàn)和陽(yáng)性強(qiáng)度的變革,可作為斷定h患者預(yù)后和腫瘤惡性表型的指標(biāo)之一?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1臧盛兵,黃愛(ài)民,高凌云,等.手工制作構(gòu)造芯片要領(lǐng)的改進(jìn)及其在肝細(xì)胞癌研究中的應(yīng)用j.中國(guó)構(gòu)造化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2022，163:385-388.2babergera,riethdrfl,ilde-langshk,etal.strnglyreduedexpressinftheellyleinhibitrp27inendetrialneplasiaj.virhsarh,1999,434(5):423-428.3tannerb,gries,shifferi,etal.nulearexpressinfapurini/a

15、pyriidiniendnuleaseinreasesithprgressinfvarianarinasj.gynelnl,2022,92(2):568-577.4yangs,iranik,heffrnse,etal.alteratinsintheexpressinftheapurini/apyriidiniendnulease-1/redxfatr-1(ape/ref-1)inhuanelanaandidentifiatinfthetherapeutiptentialfresveratrlasanape/ref-1inhibitrj.lanerther,2022,4(12):1923-193

16、5.5牟江洪,肖華亮,向德兵,等.大腸癌ref-1/ape的表達(dá)特點(diǎn)及其意義j.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2022,28(2):111-113.6puglisif,aprileg,inisinia,etal.prgnstisignifianefape1/ref-1subellularlalizatininnn-sallelllungarinasj.antianerres,2001,21(6a):4041-4049.7puglisif,barbnef,tellg,etal.prgnstirlefape/ref-1subellularexpressininstage-breastarinasj.nlrep,2002,9(1):11-17.8tellg,daanteg,aldelld,etal.theintraellularlalizatinfape1/ref-1:rethanapassi