同濟醫(yī)院檢驗科ISO15189體系文件03痰標本的細菌學檢驗

1、同濟大學附屬同濟醫(yī)院檢驗科微生物組項目操作指導書TJYYJYKWSW/XMZ103第2版標題：痰標本的細菌學檢驗第1章 第03號第 PAGE 5 頁 共 NUMPAGES 5 頁1 概述：痰培養(yǎng)主要針對下呼吸道感染病原菌的調(diào)查。正常人體的下呼吸道是無菌的，上呼吸道有正常菌群棲居。因下呼吸道分泌物須經(jīng)上呼吸道排出，常受該處的正常菌群的污染，因此，判斷下呼吸道的分泌物中是否有病原菌存在，須對上呼吸道的正常菌群有所了解。1.1 常居菌群 上呼吸道棲居菌群主要有：、溶血鏈球菌，微球菌，奈瑟菌（致病菌除外），嗜血桿菌（致病菌除外），表皮葡萄球菌，類白喉棒狀桿菌，擬桿菌，梭桿菌，厭氧球菌等。1.2 下呼吸

2、道感染常見病原菌，見表1。表1 下呼吸道感染常見病原菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌肺炎鏈球菌，A群鏈球菌,金黃色葡萄球菌，結核分枝桿菌，厭氧球菌，白喉棒狀桿菌，放線菌，奴卡菌卡他布蘭漢菌，腦膜炎奈瑟菌，流感嗜血桿菌，假單胞菌，鼠疫耶爾森菌，肺炎克雷伯菌，腸桿菌，嗜肺軍團菌2 病人準備和標本采集 采集晨痰。先讓患者用清水漱口，囑患者用力自氣管深部咳出痰液，置無菌容器內(nèi)送檢。應盡可能防止唾液及鼻咽部分泌物混入樣品。3 培養(yǎng)基與試劑3.1 綿羊血瓊脂平板，上海江南生物技術工程有限公司產(chǎn)品。3.2 麥康凱瓊脂平板，由上海市疾病控制中心生產(chǎn)的干粉培養(yǎng)基按說明配制。3.3 巧克力瓊脂平板，上海伊華科技有限公司產(chǎn)品

3、。3.4 革蘭染液，本室自配。4 標本處理：4.1 直接涂片檢查：挑取血性或膿性部分少許制成涂片。4.1.1 低倍鏡下觀察白細胞和鱗狀上皮細胞數(shù)，確定標本是否適合做細菌培養(yǎng)，見表2。表2 痰培養(yǎng)標本細胞學篩查參考標準（低倍鏡視野）白細胞鱗狀上皮細胞評價252510-25適合做細菌培養(yǎng)252525不適合做細菌培養(yǎng),應重送標本10-252525不適合做細菌培養(yǎng),應重送標本不適合做細菌培養(yǎng),應重送標本4.1.2 革蘭染色： 涂片自然干燥,行革蘭染色后鏡檢,根據(jù)細菌形態(tài)排列和染色性報告。例：“找到革蘭陽性球菌，形似葡萄球菌”。4.2 分離培養(yǎng)：標本接種綿羊血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、巧克力瓊脂平板，置

4、35、5% CO2 培養(yǎng)18-24小時,觀察結果；有些細菌生長較慢，可延長培養(yǎng)一天后觀察。4.3 抗酸菌涂片及培養(yǎng)：參見:“抗酸菌檢驗操作規(guī)程”。5 結果觀察：5.1 先看巧克力平板上的生長情況，有無無色透明樣小菌落，氧化酶陽性，疑似“嗜血桿菌”，作菌種鑒定和藥敏試驗，參見“細菌鑒定操作規(guī)程”。5.2 觀察血平板及麥康凱瓊脂平板有無可疑致病菌菌落，可視需要作菌落涂片觀察，作菌種鑒定和藥敏試驗，參見“細菌鑒定操作規(guī)程”。6 報告方式 痰中的病原菌不少屬于機會致病菌，與正常菌群同在，在報告中應作說明。對于機會致病菌，一般僅當其數(shù)量超過正常菌群時才可報告鑒定結果及其藥敏試驗結果。 檢出致病菌時，除報

5、告該菌的鑒定名稱外，還需同時報告正常菌群的情況 ，以報告草綠色鏈球菌和奈瑟菌作為正常菌存在的指標。檢出的機會致病菌以及致病菌注明其所占比例，以“+”表示，判定方法見表3，如：甲型鏈球菌 3+，肺炎克雷伯菌2+；未檢出致病菌時，應報告“正常菌群”。表3 痰標本在血平板上的菌落量化指標分級劃線區(qū)菌落數(shù)目第1區(qū)第2區(qū)第3區(qū)微量(+)1010510557 操作流程： 痰液 肉眼觀察：顏色、性狀 分離培養(yǎng) 涂片檢查 血瓊脂平板 巧克力平板 麥康凱平板 35、5% CO2 培養(yǎng) 觀察菌落和涂片染色鏡檢 選擇生化鑒定試驗 藥敏試驗 報告 臨床意義：痰標本的細菌學檢驗對下呼吸道感染性疾病的診斷、治療有重要意義，主要在于診斷病原菌，提供藥敏試驗結果，指導臨床合理用藥。9 注意事項：9.1 痰液標本的采集以晨痰為佳，咳前充分漱口，減少口腔正常菌的污染。9.2 患者接受抗菌素治療，使有關細菌受到抑制，可影響標本的陽性率，因此最好在用藥前 采集標本。9.3 報告結果時，注意區(qū)分正常菌群、條件致病菌及致病菌。10 支氣管肺泡灌洗液( BAL) 標本處理10.1 用Vortes 混勻30-60秒，先作涂片，革蘭染色鏡檢，上皮細胞數(shù)1%時，表明未受上呼吸道污染。10.2 用定量接種環(huán)(1ul )接種血平板，涂布均勻，另外接種一塊血平板，巧克力平板和麥康凱平板，35，5%CO2培養(yǎng)