體外診斷試劑臨床試驗(yàn)-糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）-研究者手冊

1、糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法） 2015年9月9日 第一版申辦方：XX醫(yī)療科技（中國）有限公司研究者手冊產(chǎn)品名稱：糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）申 辦 者：XX醫(yī)療科技（中國）有限公司版本及日期：第一版 2015 年 9 月 17 日目錄 TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc430599611 1. 產(chǎn)品基本信息 PAGEREF _Toc430599611 h 1 HYPERLINK l _Toc430599612 1.1 糖尿病的背景 PAGEREF _Toc430599612 h 1 HYPERLINK l _Toc430599613 1.2 糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn) PA

2、GEREF _Toc430599613 h 2 HYPERLINK l _Toc430599614 根據(jù)WHO最新糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn): PAGEREF _Toc430599614 h 2 HYPERLINK l _Toc430599615 1.3 糖化白蛋白檢測在糖尿病診斷中的定位 PAGEREF _Toc430599615 h 3 HYPERLINK l _Toc430599616 2. 糖化白蛋白檢測試劑盒概述 PAGEREF _Toc430599616 h 3 HYPERLINK l _Toc430599617 2.1 測定原理 PAGEREF _Toc430599617 h 3 HYPER

3、LINK l _Toc430599618 2.2 介紹 PAGEREF _Toc430599618 h 4 HYPERLINK l _Toc430599619 2.3 主要成分 PAGEREF _Toc430599619 h 4 HYPERLINK l _Toc430599620 2.4 試驗(yàn)參考范圍 PAGEREF _Toc430599620 h 5 HYPERLINK l _Toc430599621 2.5 適用機(jī)型 PAGEREF _Toc430599621 h 5 HYPERLINK l _Toc430599622 3. 產(chǎn)品使用概要 PAGEREF _Toc430599622 h 5

4、 HYPERLINK l _Toc430599623 3.1.1 測定樣本 PAGEREF _Toc430599623 h 5 HYPERLINK l _Toc430599624 3.1.2 干擾物質(zhì) PAGEREF _Toc430599624 h 5 HYPERLINK l _Toc430599625 3.1.3 其他 PAGEREF _Toc430599625 h 6 HYPERLINK l _Toc430599626 3.1.4 試劑配制 PAGEREF _Toc430599626 h 6 HYPERLINK l _Toc430599627 3.2 測定結(jié)果的判斷方法 PAGEREF _

5、Toc430599627 h 6 HYPERLINK l _Toc430599628 3.2.1 參考范圍 PAGEREF _Toc430599628 h 6 HYPERLINK l _Toc430599629 3.2.2 評判注意事項(xiàng) PAGEREF _Toc430599629 h 6 HYPERLINK l _Toc430599630 3.3 性能 PAGEREF _Toc430599630 h 6 HYPERLINK l _Toc430599631 3.3.1 靈敏度 PAGEREF _Toc430599631 h 6 HYPERLINK l _Toc430599632 3.3.2 準(zhǔn)確

6、度 PAGEREF _Toc430599632 h 6 HYPERLINK l _Toc430599633 3.3.3 重復(fù)性 PAGEREF _Toc430599633 h 6 HYPERLINK l _Toc430599634 3.3.4 線性范圍 PAGEREF _Toc430599634 h 6 HYPERLINK l _Toc430599635 3.3.5 相關(guān)性 PAGEREF _Toc430599635 h 6 HYPERLINK l _Toc430599636 3.3.6 校準(zhǔn)用基準(zhǔn)物質(zhì) PAGEREF _Toc430599636 h 7 HYPERLINK l _Toc430

7、599637 4. 產(chǎn)品風(fēng)險分析 PAGEREF _Toc430599637 h 7 HYPERLINK l _Toc430599638 4.1 操作上(防止危險)的注意事項(xiàng) PAGEREF _Toc430599638 h 7 HYPERLINK l _Toc430599639 4.2 使用上的注意事項(xiàng) PAGEREF _Toc430599639 h 7 HYPERLINK l _Toc430599640 4.3 廢物處理上的注意事項(xiàng) PAGEREF _Toc430599640 h 7 HYPERLINK l _Toc430599641 4.4 其他的注意事項(xiàng) PAGEREF _Toc4305

8、99641 h 8 HYPERLINK l _Toc430599642 5. 本試驗(yàn)的質(zhì)量管理 PAGEREF _Toc430599642 h 8 HYPERLINK l _Toc430599643 6. 本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)管理要求 PAGEREF _Toc430599643 h 8 HYPERLINK l _Toc430599644 7. 不良反應(yīng)預(yù)測及應(yīng)當(dāng)采取的措施 PAGEREF _Toc430599644 h 9 HYPERLINK l _Toc430599645 8. 受試者個人資料保密 PAGEREF _Toc430599645 h 9 HYPERLINK l _Toc430599646

9、8.1 受試者編號 PAGEREF _Toc430599646 h 9 HYPERLINK l _Toc430599647 8.2 試驗(yàn)資料保管 PAGEREF _Toc430599647 h 9 HYPERLINK l _Toc430599648 9. 倫理相關(guān)聲明 PAGEREF _Toc430599648 h 9 HYPERLINK l _Toc430599649 10. 參考文獻(xiàn) PAGEREF _Toc430599649 h 9 保密聲明本研究者手冊中所包含的所有信息的所有權(quán)歸申辦方，因此，僅提供給研究者、合作研究者、倫理委員會和監(jiān)督管理部門等相關(guān)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)審閱。在未得到申辦方書面的

10、批準(zhǔn)情況下，除了在與可能參加本研究的受試者簽署知情同意書時，向其做必要的解釋外，嚴(yán)禁將任何信息告知與本研究無關(guān)的第三方。產(chǎn)品基本信息糖尿病的背景糖尿病是由多種病因引起以慢性高血糖為特征的代謝紊亂。高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或其生物效應(yīng)降低（胰島素抵抗）所致。慢性高血糖將導(dǎo)致多種組織，特別是眼、腎臟、神經(jīng)、心血管的長期損傷、功能缺陷和衰竭。顯著高血糖的癥狀為多飲、多尿、多食和體重下降。世界衛(wèi)生組織將糖尿病分為四種類型：1型糖尿病、2型糖尿病、其他類型糖尿病和妊娠期糖尿病。不同類型的糖尿病都會導(dǎo)致胰腺中的細(xì)胞不能產(chǎn)生足量的胰島素以降低血糖的濃度，導(dǎo)致高血糖癥的發(fā)生。1型糖尿病一般是由于自體免疫系

11、統(tǒng)破壞產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞導(dǎo)致的；2型糖尿病史由于組織細(xì)胞的胰島素抵抗、細(xì)胞功能衰退或其他多種原因引起的；妊娠期糖尿病則與2型糖尿病相似，也是源于細(xì)胞的胰島素抵抗，不過其胰島素抵抗是由于妊娠期婦女分泌的激素所導(dǎo)致的。目前全球糖尿病患者已超過1.2億人，我國患者人群居世界第二，1994年就已達(dá)2000萬。據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)計(jì)，到2025年，全球成人糖尿病患者人數(shù)將增至3億，而中國糖尿病患者人數(shù)將達(dá)到4000萬，未來50年內(nèi)糖尿病仍將是中國一個嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。糖化白蛋白(GA)是血液中葡萄糖與白蛋白發(fā)生非酶醣化反應(yīng)的早期糖基化產(chǎn)物（1）。因白蛋白在體內(nèi)的半衰期較短（約17天），且白蛋白與血糖的結(jié)合速

12、度比血紅蛋白快，所以GA對短期內(nèi)血糖變化比糖化血紅蛋白（HbA1c）敏感，通常認(rèn)為GA測定可反映患者近期（約2周）的血糖控制情況，目前GA已成為臨床上應(yīng)用較廣泛的血糖檢測指標(biāo)（2）。多項(xiàng)研究表明，30天內(nèi)的血糖水平影響HbA1c水平達(dá)50%，而90天120天只影響10%。所以，在血糖檢測體系中GA是對HbA1c的有效補(bǔ)充。近年來，GA與HbA1c的關(guān)系收到廣泛重視，通過研究GA與HbA1c的關(guān)系可進(jìn)一步認(rèn)識GA的臨床意義。動脈粥樣硬化是長期慢性炎癥性過程，它并非在糖尿病確診后蔡啟動，在血糖升高但仍未達(dá)到糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)時就已啟動，隨著血糖的增高而進(jìn)展加速。既往研究表明，作為糖尿病患者體內(nèi)主要的早

13、期糖基化產(chǎn)物，GA可通過破壞內(nèi)皮細(xì)胞功能，導(dǎo)致血管壁的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)、刺激平滑肌細(xì)胞增殖和遷移等病理過程，加快動脈粥樣硬化和糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展（3）。因此GA在糖尿病動脈粥樣硬化病理生理機(jī)制中起到重要作用。GA是反映過去2-3周平均血糖水平的一項(xiàng)指標(biāo)。比血糖檢測“金標(biāo)準(zhǔn)”HbA1c的反映周期要短一些。因此，GA在治療效果的確認(rèn)以及臨床用藥量的調(diào)整方面比A1c具有優(yōu)勢。另外，在許多血紅蛋白代謝異常的情況下，A1c的結(jié)果受到影響不能真實(shí)反映患者的血糖水平，而GA的結(jié)果則不受影響，如糖尿病腎病透析患者、貧血患者、妊娠期婦女的血糖檢測等，因此GA為血糖監(jiān)測的首選指標(biāo)。通常在葡萄糖檢測異常

14、之后，或者當(dāng)病人出現(xiàn)急、慢性低血糖癥的癥狀時，諸如出汗、心悸、饑餓、意識錯亂、視力模糊、眩暈、暈厥和癲癇發(fā)作時，需要檢測胰島素水平。盡管這些癥狀伴隨低血糖，但也可能由于其他情況造成。胰島素水平升高出現(xiàn)于：胰島素瘤、胰島素耐受、肥胖癥、肢端肥大癥、柯興氏綜合征、果糖或者半乳糖不耐癥和服用皮質(zhì)激素、左旋多巴、口服避孕藥等藥物；胰島素水平下降出現(xiàn)于：糖尿病、垂體機(jī)能減退癥和胰臟疾病，例如慢性胰腺炎（包括纖維囊泡癥）和胰腺癌等。糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)WHO最新糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn):類別血漿全血靜脈毛細(xì)血管靜脈毛細(xì)血管（糖尿?。┛崭?7.0=7.0=6.1=6.1餐后2小時=11.0=12.2=10.0=11.

15、1（糖耐量損傷）空腹6.1-6.96.1-6.95.6-6.05.6-6.0餐后2小時7.8-11.08.9-12.16.7-9.97.8-11.0有典型糖尿病癥狀(多尿、多飲和不能解釋的體重下降)者，任意血糖11.1mmol/L或空腹血糖(FPG)7.0mmol/L，為 HYPERLINK /changshi/6.html 糖尿病患者。空腹血糖(FPG)6.11mmol/L并且餐后2h血糖(2hPG)7.77mmol/L，為正常。餐后2h血糖(2hPG)7.77mmol/L,但11.1mmol/L時為糖耐量損傷(IGT)， HYPERLINK /xuetang/32.html 空腹血糖(FP

16、G)6.11mmol/L,但6.99mmo/L時為空腹血糖損傷(IFG)糖化白蛋白檢測在糖尿病診斷中的定位糖化白蛋白（GA）是血液中白蛋白（ALB）的糖化產(chǎn)物。ALB在血液中半衰期約為17天，因此GA的測定結(jié)果反映24周前的平均血糖水平，可作為糖尿病患者血糖控制的一項(xiàng)指標(biāo)。在新的 HYPERLINK /zhenduan/29.html 糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)中降低了空腹 HYPERLINK /xuetang/10.html 血糖的指標(biāo)，并提出了 HYPERLINK /xuetang/31.html 空腹血糖損傷（IFG）概念。降低空腹血糖標(biāo)準(zhǔn)是美國糖尿病協(xié)會1997年提出的，他們發(fā)現(xiàn)空腹血糖 7.8m

17、mol/L時，餐后2小時血糖多在12.813.9mmol/L之間,與原來餐后2小時的血糖標(biāo)準(zhǔn)（11.1mmol/L）不能吻合。修改后的 血糖標(biāo)準(zhǔn)使空腹和餐后2小時得到了統(tǒng)一。同時也有利于及時發(fā)現(xiàn)糖尿病。這里特別說明的是IFG和 HYPERLINK /xuetang/31.html 糖耐量損傷(IGT)都是介于糖尿病人和正常人之間的一種狀況。在我國醫(yī)生在作出診斷時往往要結(jié)合臨床癥狀加以考慮，如果有癥狀只要有一次空腹或餐后血糖達(dá)到上述糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，就可以判定為糖尿病。如果完全沒有糖尿病癥狀，就需要空腹和餐后血糖同時達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)，才可以判為糖尿病。糖化白蛋白檢測試劑盒概述測定原理1）糖化白蛋白的測

18、定第一反應(yīng)為糖化白蛋白在特異性蛋白酶的作用下，發(fā)生反應(yīng)生成糖化氨基酸。第二反應(yīng)為糖化氨基酸在果糖氨基酸氧化酶（FAOD）的作用下，生成過氧化氫。過氧化氫在4-氨基安替比林以及N，N-雙（4-磺丁基）-m-苯胺鈉鹽（DSBmT）的共存下，經(jīng)過過氧化酶（POD）的作用，變換成紅紫色色素。通過測定此紅紫色色素的吸光度進(jìn)而計(jì)算出糖化白蛋白的濃度。糖化白蛋白：第一反應(yīng)蛋白酶 糖化白蛋白 糖化氨基酸第二反應(yīng)FAOD 糖化氨基酸+O2+H2O 葡萄糖醛酮+氨基酸+H2O2POD H2O2+4-氨基安替比林+DSBmT 紅紫色色素2）白蛋白的測定在第一反應(yīng)中，還原型白蛋白變成氧化型白蛋白。在第二反應(yīng)中，氧化型

19、白蛋白在溴甲酚藍(lán)（BCP）的作用下，白蛋白與BCP生成藍(lán)色結(jié)合體，測定此藍(lán)色結(jié)合體的吸光度進(jìn)而計(jì)算出白蛋白的濃度。第一反應(yīng) 還原型白蛋白 氧化型白蛋白BCP第二反應(yīng) 氧化型白蛋白 白蛋白-BCP結(jié)合體3）糖化白蛋白值（%）的計(jì)算得出的糖化白蛋白濃度除以白蛋白濃度，為使測定值與常規(guī)檢測方法（露喜佳GA-L，旭化成制藥株式會社）測定的結(jié)果相一致，需要用以下公式進(jìn)行補(bǔ)正。本試劑是使用生化自動分析儀可測定人血清或血漿中的胰島素水平的液狀試劑。不需要調(diào)制試劑或樣本稀釋等檢測前準(zhǔn)備。測定僅需10分鐘左右。補(bǔ)正公式：（糖化白蛋白濃度/白蛋白濃度）48.9+1.94）本產(chǎn)品為無需調(diào)制的液態(tài)試劑。5）本產(chǎn)品適用

20、于各種自動生化分析儀。介紹糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）為液體試劑，采用直接法定量檢測血清或血漿中的糖化白蛋白的濃度。主要成分GA酶液： 蛋白酶 4-氨基安替比林GA酶液： 果糖氨基酸氧化酶 N，N-雙（4-磺丁基）-m-苯胺鈉鹽 ALB緩沖液： 琥珀酸 ALB顯色劑： 溴甲酚藍(lán)校準(zhǔn)品： 人糖化白蛋白試驗(yàn)參考范圍參考基準(zhǔn)范圍 : 1116% 適用機(jī)型本產(chǎn)品應(yīng)用于定量檢測血清或血漿中糖化白蛋白的濃度，適用于各種全自動生化分析裝置：H7600、LST008、AU640、BM9130、H7180 產(chǎn)品使用概要 = 3.1 * Arabic = 3.1 3.1標(biāo)本的性質(zhì)、標(biāo)本采集法測定樣本1 .測定樣本

21、的性質(zhì)，使用采取法。1）可以使用血清或血漿（EDTA血漿、肝素血漿、NaF血漿）樣本。2）測定樣本的保存方法血清（漿）分離后可以冷藏保存7天。血清（漿）分離后若7天之內(nèi)不能測定時，請冷凍（-30以下）保存。請避免反復(fù)凍結(jié)和解凍。請將樣本恢復(fù)至室溫（1530）之后再進(jìn)行測定。3）測定糖化白蛋白以及白蛋白時請使用同一樣本（血清或者血漿）。干擾物質(zhì)1）游離型膽紅素12.5mg/dL以下，結(jié)合型膽紅素12.5mg/dL以下，糖化血紅蛋白80mg/dL以下，福爾馬肼濁度3000度以下，抗壞血酸50mg/dL以下，對測量值沒有影響。2）溶血會帶來微小的負(fù)誤差。3）治療感染性心內(nèi)膜炎、敗血癥、化膿性髓膜炎等

22、疾病時需要靜脈注射大劑量青霉素G。大劑量注射青霉素G會導(dǎo)致白蛋白測定值偏低1）。因此會出現(xiàn)糖化白蛋白測定值（%）比實(shí)際值略高的情況，請注意。4）測定低白蛋白血癥患者，有可能得不到正確的糖化白蛋白值（%），請注意。5）尤其需要注意使用氨基酸輸液制劑患者的血液樣本。特別是使用糖和氨基酸混合后的輸液制劑的患者，測定結(jié)果會出現(xiàn)偽高值，請盡量避免2）。其他校準(zhǔn)用物質(zhì) 校準(zhǔn)時，請使用本試劑盒中的校準(zhǔn)品。試劑配制GA試劑：GA酶液開瓶后即可使用，無需配制。GA試劑：GA酶液開瓶后即可使用，無需配制。ALB試劑：ALB緩沖液開瓶后即可使用，無需配制。ALB試劑：ALB顯色劑開瓶后即可使用，無需配制。測定結(jié)果的

23、判斷方法 參考范圍參考基準(zhǔn)范圍 : 1116% 評判注意事項(xiàng) 1. 由于標(biāo)本不同，試劑會發(fā)生與標(biāo)本中目的成分以外的物質(zhì)反應(yīng)或干擾反應(yīng)的情況。若對測定值或測定結(jié)果有疑問，請進(jìn)行重新測定或稀釋后再測定，也可用其他測定方法進(jìn)行確認(rèn)。性能 靈敏度糖化白蛋白 100mol/L附近0.0100.030 白蛋白 100mol/L附近0.0200.045 準(zhǔn)確度 糖化白蛋白值（%）為期待值的95105%。重復(fù)性 糖化白蛋白值（%）的變異系數(shù)（CV值）3%。（1）3）的數(shù)值是依據(jù)本公司試驗(yàn)方法測定得出。）線性范圍11.664.1%相關(guān)性1）血清N =107 r=0.998 y=0.99x+0.07 對照法：日本

24、已批準(zhǔn)上市的體外診斷試劑（酶法）2）血漿（NaF血漿）N = 94 r=0.997 y=0.99x-0.21 對照法：日本已批準(zhǔn)上市的體外診斷試劑（酶法）校準(zhǔn)用基準(zhǔn)物質(zhì) 糖化白蛋白測定用一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（JCCRM611）白蛋白測定用常用參照標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（JCCRM613）產(chǎn)品風(fēng)險分析操作上(防止危險)的注意事項(xiàng)1) 請把標(biāo)本當(dāng)作可能感染HIV、HBV、HCV等的危險物質(zhì)處置。為了避免檢測時感染的危險,請使用一次性手套,另外,請不要通過口來使用吸管進(jìn)行移液。2) 本品含有作為防腐劑的Proclin300，對皮膚有刺激。若誤接觸到皮膚或衣物時，請迅速用水充分沖洗，如遇皮膚發(fā)炎時請接受醫(yī)生治療。使用上的注

25、意事項(xiàng)1) 請按照本品的保存方法保存本品，避免冷凍。凍結(jié)后的試劑品質(zhì)會劣化，導(dǎo)致無法得到準(zhǔn)確結(jié)果，請勿使用。2) 為確保測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，請勿使用已過有效期的試劑。 3) 請避免中途添加試劑使用。4) 使用本品測定后請密封后冷藏保存。5) 不同批號試劑不可以混合使用。6) 操作時請避免日光直射。7) 若試劑的任何一個的批號發(fā)生變化時，請重新實(shí)施儀器校準(zhǔn)。廢物處理上的注意事項(xiàng)在廢棄使用過的標(biāo)本及標(biāo)本容器前,請浸泡于0.1%濃度以上的次氯酸鈉溶液中一小時以上,或者進(jìn)行高溫高壓滅菌 (121、20分鐘)處理。標(biāo)本或含有標(biāo)本的液體濺出時,請用0.1%濃度以上的次氯酸鈉溶液等充分地擦拭。在廢棄試劑及處理

26、過的標(biāo)本等時,請遵循有關(guān)廢棄物的規(guī)定、作為醫(yī)療廢棄物或工業(yè)廢棄物等處理。在廢棄試劑時,請注意水質(zhì)污染防治法等規(guī)定。其他的注意事項(xiàng)請不要將試劑瓶等轉(zhuǎn)用于其他目的。本試驗(yàn)的質(zhì)量管理參與試驗(yàn)的每個中心都應(yīng)具有本試驗(yàn)所需的良好的醫(yī)療設(shè)施、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備及人員配備，以確保受試者的安全及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。各中心的主要研究者負(fù)責(zé)向參與本試驗(yàn)的該中心工作人員說明有關(guān)本試驗(yàn)的資料、規(guī)定和職責(zé)，確保有足夠數(shù)量并且符合試驗(yàn)方案的受試者進(jìn)入臨床試驗(yàn)；各研究者在向受試者解釋有關(guān)試驗(yàn)的詳細(xì)情況并取得知情同意書后才開始試驗(yàn)；研究者應(yīng)按本方案如實(shí)、認(rèn)真填寫與本試驗(yàn)相關(guān)的原始病歷內(nèi)容。原始病歷中的所有內(nèi)容均應(yīng)反復(fù)核對，確保無誤。各中心主要研究者對本中心完成的病例報(bào)告表的真實(shí)性及可靠性負(fù)責(zé)。本公司對臨床試驗(yàn)進(jìn)行監(jiān)查，以保證試驗(yàn)過程、病例報(bào)告表填寫以及其他所有的報(bào)告符合體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則和臨床試驗(yàn)方案的要求。由申辦者或申辦者指定的單位負(fù)責(zé)對試驗(yàn)進(jìn)行稽查。試驗(yàn)場所、數(shù)據(jù)和文件均經(jīng)過核實(shí)，對觀察結(jié)果和研究發(fā)現(xiàn)予以核實(shí)以保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的可信度。在研究的每一階段均進(jìn)行質(zhì)量控制，以保證數(shù)據(jù)可靠、研究過程正確。本試驗(yàn)嚴(yán)格遵守赫爾辛基宣言、試驗(yàn)方案