梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)

1、關(guān)于梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)第一張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月2梅毒控制規(guī)劃中期評估-梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測知識調(diào)查（1）1.一旦感染梅毒，梅毒螺旋體特異性抗體通常會終身陽性 2.RPR/TRUST只能用于梅毒初篩3. 二期梅毒時，TPPA和RPR兩種血清學(xué)試驗(yàn)100陽性4.接受抗梅治療的嬰兒，隨訪18個月后TPPA （+）/RPR（- ）可確診為胎傳梅毒 5.常規(guī)梅毒血清學(xué)檢測的是IgG抗體，不能檢測到IgM抗體6.TPPA（- ）/ RPR（+）結(jié)果一般可排除梅毒螺旋體感染 7. TPPA滴度檢測是臨床治療梅毒效果評價的重要參考指標(biāo) 第二張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月3梅毒控制規(guī)

2、劃中期評估-梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測知識調(diào)查（2）8. 新生兒血清TPPA（+）/ RPR（+），可診斷為先天梅毒9.梅毒初篩可采用任何一種血清學(xué)檢測方法10. RPR和TRUST的方法原理相同，所以兩種方法的定量試驗(yàn)滴度結(jié)果一定一致11. TPPA（+）/ RPR（-）可能是極早期梅毒12. ELISA法檢測陽性，TPPA復(fù)檢陰性，最終結(jié)果報(bào)告：TPPA試驗(yàn)陰性，解釋ELISA法為假陽性。 第三張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)室檢測的目的？早期發(fā)現(xiàn)臨床診斷有效治療精準(zhǔn)醫(yī)療疫情報(bào)告檢測方法檢測策略結(jié)果的解讀和合理應(yīng)用醫(yī)生、檢驗(yàn)、防保第四張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月結(jié)果如何解讀

3、和合理應(yīng)用第五張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月如何發(fā)揮實(shí)驗(yàn)室檢測作用實(shí)驗(yàn)室檢測 實(shí)驗(yàn)室診斷艾滋病檢測策略最新進(jìn)展（2015） 確證（診）試驗(yàn) 補(bǔ)充試驗(yàn) 陽、陰性有、無反應(yīng) 增加了各種檢測策略 強(qiáng)調(diào)臨床診斷 第六張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月梅毒是一個可以臨床治愈的傳染病病例診斷依據(jù)病史癥狀實(shí)驗(yàn)室檢查實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果對梅毒診斷及判愈有決定性意義第七張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月如和達(dá)到實(shí)驗(yàn)室檢測的基本要求檢測方法檢測策略質(zhì)量保證管理層面（行政、疾控）生產(chǎn)廠家醫(yī)療機(jī)構(gòu)（醫(yī)生、檢驗(yàn)、防保）第八張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月常用梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測方法檢測方法病原

4、學(xué)檢測梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)非梅毒螺旋體血清學(xué)組織病理學(xué)檢測白細(xì)胞檢測蛋白檢測第九張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月未經(jīng)治療的梅毒病人的自然病程感染梅毒螺旋體一期梅毒二期梅毒隱形梅毒三期梅毒梅毒樹膠腫脊髓癆, 麻痹性癡呆心血管梅毒72%30%終生隱形梅毒中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染28%感染梅毒螺旋體2-6周1-3月 1-3月2-50年第十張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月病原學(xué)檢查原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運(yùn)動方式進(jìn)行檢測。方法：

5、（1）暗視顯微鏡檢查 （2）鍍銀染色法 （3）核酸檢測（血液標(biāo)本？）注：梅毒螺旋體目前體外人工培養(yǎng)還沒有獲得成功，僅能通過接種兔睪丸等部位進(jìn)行有限增殖。 第十一張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月病原學(xué)檢查的臨床意義螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。第十二張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月梅毒血清學(xué)檢測方法(1) 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) （非特異性梅毒抗體）(2) 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) （特異性梅毒抗體）兩類方法。問題： 為什么梅毒診斷需要上述兩類血清學(xué)檢

6、測方法？第十三張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對螺旋體表面的脂質(zhì)作出免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（非特異性抗體）。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的非特異性抗體可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸減少滴度至轉(zhuǎn)為陰性。中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) WS/T4912016:梅毒非特異性抗體檢測操作指南-發(fā)布 -實(shí)施第十四張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理方法包括： （1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn) (RPR) （2）甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST） （3）性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn) (VDRL)等

7、?；境煞质切牧字?卵磷脂和膽固醇抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似第十五張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理示意圖第十六張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，轉(zhuǎn)速？轉(zhuǎn)幅？ 2、定性試驗(yàn)加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中， 并均勻地涂布在整個圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23 -29 ） ，亮光下觀察結(jié)果？滴/mL，1滴=？ul第十七張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月非梅毒螺旋體抗原血

8、清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，轉(zhuǎn)速、轉(zhuǎn)幅 2、定性試驗(yàn)加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中， 并均勻地涂布在整個圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23 -29 ） ，亮光下觀察結(jié)果60滴/mL，1滴=17ul100r/min約18mm第十八張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)3、定量試驗(yàn)稀釋夜準(zhǔn)備：在反應(yīng)紙板圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定圈數(shù)),勿將鹽水涂開加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。 下同定性試驗(yàn)。？1:21:41:81:161:321:641:2

9、561:1281:512問題：定量試驗(yàn)原倍血清滴度是多少？問題：定量試驗(yàn)血清稀釋需要使用試管嗎？第十九張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)3、定量試驗(yàn)稀釋夜準(zhǔn)備：在反應(yīng)紙板圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定圈數(shù)),勿將鹽水涂開加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。 下同定性試驗(yàn)。1:11:21:41:81:161:321:641:2561:1281:512第二十張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法簡單、快速、敏感性和特異性較好?？勺鳛槊范竞Y查試驗(yàn)。因治療后

10、血清滴度可下降并陰性，故（1）可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征；（2）結(jié)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)鑒別梅毒現(xiàn)癥感染和既往感染VDRL試驗(yàn)用于神經(jīng)梅毒腦脊液檢測特異性高，檢測陽性可以作為神經(jīng)梅毒確診依據(jù)，但敏感性較低，即檢測陰性不能排除神經(jīng)梅毒。第二十一張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月血清固定早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后 一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性 二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。 晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。血清固定：一直保持低滴度，不轉(zhuǎn)陰 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)第二十二張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月1:11:2

11、1:81:41:16非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)前帶現(xiàn)象第二十三張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)假陽性反應(yīng)技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗(yàn)即可排除。生物學(xué)假陽性反應(yīng)(一般滴度小于1:8），應(yīng)采用梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)如TPPA等進(jìn)行排除。第二十四張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異抗原），檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)呈陽性，則患者終身陽性。問題：梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)的定量試驗(yàn)在梅毒

12、診療中有意義嗎？第二十五張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)方法梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn) (TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn) (TPHA) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA） 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測 (RT) 熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）-IgM、IgG第二十六張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月TPPATPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性。 TPPA是目前WHO公認(rèn)的梅毒抗原血清學(xué)試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，常用

13、于新方法、新試劑的參照標(biāo)準(zhǔn)。第二十七張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月+明膠顆粒梅毒抗原+抗原致敏顆?？乖旅纛w粒血液中抗體抗原抗體凝集TPPA試驗(yàn)原理示意圖第二十八張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月294+： 粒子光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊 3+： 粒子光滑覆蓋大部分底 2+：粒子光滑聚集覆蓋孔底，周圍有一細(xì)胞環(huán) 1+： 粒子光滑集聚覆概孔底，周圍有一明顯細(xì)胞環(huán) ： 粒子沉集孔底，中央形成一小點(diǎn) ： 粒子緊密沉積孔底中央 TPPA試驗(yàn)結(jié)果判讀敏感性特異性病期一期二期隱性臨床試驗(yàn)a100100100美國CDC8810010095a:均為RPR陽性標(biāo)本第二十九張，PPT共五

14、十一頁，創(chuàng)作于2022年6月ELISA/ CLIAELISA試驗(yàn)是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標(biāo)記物，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶聯(lián)檢測儀判定試驗(yàn)陽性反應(yīng)。本法可用于大樣本血清檢測?；瘜W(xué)發(fā)光法的臨床應(yīng)用意義基本同ELISA化學(xué)發(fā)光法的敏感性？第三十張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月31梅毒免疫層析快速檢測方法（全血法）第三十一張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月梅毒免疫層析快速檢測方法（血清、血漿法）第三十二張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(如RPR等)初篩陽性標(biāo)本的確證

15、試驗(yàn)，排除RPR 假陽性。不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行診斷。不能作為療效觀察的指標(biāo)。第三十三張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月34梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果解釋（梅毒臨床診斷參考依據(jù)）試驗(yàn)結(jié)果參考結(jié)果解釋*梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)陽性陽性可能為現(xiàn)癥梅毒陰性陽性非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)假陽性陽性陰性臨床治愈的早期梅毒（既往感染者）或極早期梅毒陰性陰性排除梅毒感染或極早期梅毒問題：此結(jié)果解釋適用于先天（胎傳）梅毒嗎？第三十四張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月35梅毒IgM抗體（TP-IgM） IgM抗體的產(chǎn)生是感染后的早期體液免疫應(yīng)答

16、反應(yīng)。IgM分子比IgG較大，所以IgM抗體不能通過胎盤屏障。而母親的IgG抗體可以通過胎盤屏障傳給胎兒。因此若在新生兒血中檢測到IgG抗體不能作為先天梅毒的診斷依據(jù)，而IgM抗體可為先天梅毒的診斷依據(jù)。 IgM抗體檢測其特異性較高，但敏感性較低。因此，IgM抗體檢測陰性，不能排除先天梅毒感染。第三十五張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月36先天梅毒的診斷先天梅毒的診斷標(biāo)準(zhǔn)梅毒暴露嬰兒具有以下條件之一：暗視野顯微鏡檢梅毒螺旋體陽性梅毒螺旋體IgM抗體陽性*RPR/TRUST檢測陽性，滴度比母親分娩前最近一次滴度高4倍及以上RPR/TRUST檢測隨訪中，任何一次滴度不下降或反而上升滿18月

17、齡后，TPPA檢測陽性第三十六張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月37第三十七張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測策略第三十八張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測策略思考39非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)排除試驗(yàn)假陽性確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染排除治愈的既往感染者確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染？RPR：初篩試驗(yàn) TPPA：確證試驗(yàn)第三十九張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月40第四十張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月41陽性 梅毒螺旋體血清試驗(yàn) （ELISA） 陰性 報(bào)告： ELISA陰性 陽性 RPR定性/定量試驗(yàn) 陰性 推

18、薦TPPA復(fù)檢 陽性 報(bào)告： ELISA陽性 RPR陽性及滴度 果 陰性 報(bào)告： ELISA 陽性 TPPA陽性 RPR陰性 報(bào)告： ELISA 陽性 TPPA陰性 RPR陰性 報(bào)告： ELISA陽性 RPR陰性 果 第四十一張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月42第四十二張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月43陽性 梅毒螺旋體血清試驗(yàn) （ELISA） 陰性 報(bào)告： ELISA陰性 陽性 RPR定性/定量試驗(yàn) 陰性 推薦TPPA復(fù)檢 陽性 報(bào)告： ELISA陽性 RPR陽性及滴度 果 陰性 報(bào)告： ELISA 陽性 TPPA陽性 RPR陰性 報(bào)告： ELISA 陽性 TPPA陰性

19、RPR陰性 報(bào)告： ELISA陽性 RPR陰性 果 梅毒篩查最佳策略 第四十三張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十四張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月452015非梅毒螺旋體血清學(xué)試劑評估試劑簡稱 敏感性(%) 特異性(%) 功效率(%)上海榮盛TRUST 99.03 100.00 99.67上?？迫ARPR 100.00 98.51 99.01北京萬泰TRUST 98.06 99.50 99.01 廈門英科TRUST 96.12 100.00 98.68 北京金豪TRUST 98.06 98.51 98.36 第四十五張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月46方法 試劑

20、簡稱 敏感性(%) 特異性(%) 功效率(%) 萬泰 98.28 100.00 99.34 科華 97.41 100.00 99.01 三維 97.41 100.00 99.01 麗珠 97.41 100.00 99.01 ELISA 現(xiàn)代 97.41 100.00 99.01 金豪 97.41 100.00 99.01 英科 98.28 98.94 98.68 科衛(wèi) 96.55 100.00 98.68 華大 95.69 100.00 98.36 發(fā)光 科美 97.41 99.47 98.68 2015梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試劑評估第四十六張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)要求一級生物安全防護(hù)水平：適用于第四類病原微生物二級生物安全防護(hù)水平：適用于第三類病原微生物三級生物安全防護(hù)水平：適用于第二類病原微生物四級生物安全防護(hù)水平：適用于第一類病原微生物47一般臨床血標(biāo)本處理是否需要在幾級生物安全實(shí)驗(yàn)室操作?第四十七張，PPT共五十一頁，創(chuàng)作于2022年6月梅毒實(shí)驗(yàn)室安全生物暴露a) 不慎發(fā)生標(biāo)本污染工作臺，不要立即用水沖洗，應(yīng)先用紙巾、布等敷料加上消毒液（如10%次氯酸鈉，75%乙醇等）消毒30分鐘以上，然后再清洗。如污染工作服，應(yīng)立即脫下，高壓滅菌。b