水發(fā)產(chǎn)品中甲醛的快速檢測

1、 附件4水發(fā)產(chǎn)品中甲醛的快速檢測（征求意見稿）范圍本方法規(guī)定了水發(fā)產(chǎn)品及其浸泡液中甲醛的快速檢測方法。本方法適用于銀魚、魷魚、牛肚、竹筍等水發(fā)產(chǎn)品及其浸泡液中甲醛的快速測定。AHMT法（比色卡法）原理樣品中的甲醛經(jīng)提取后，在堿性條件下與4-氨基-3-聯(lián)氨-5-巰基-1，2，4-三氮雜茂（AHMT）發(fā)生縮合，再被高碘酸鉀氧化成6-巰基-S-三氮雜茂4，3-b-S-四氮雜苯的紫紅色絡(luò)合物，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與甲醛含量成正相關(guān)，通過色階卡進行目視比色，對樣品中甲醛進行定性判定。試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的二級水。試劑氫氧化鉀。鹽酸。亞鐵氰化鉀。

2、乙酸鋅。冰乙酸。乙二胺四乙酸二鈉。高碘酸鉀。4-氨基-3-聯(lián)氨-5-巰基-1，2，4-三氮雜茂 （AHMT）。氫氧化鉀溶液（5mol/L）：稱取280.5g氫氧化鉀（3.1.1），用水溶解并定容至1000mL，混勻。氫氧化鉀溶液（0.2mol/L）：稱取11.22g氫氧化鉀（3.1.1），用水溶解并定容至1000mL，混勻。鹽酸溶液（0.5mol/L）：量取41mL鹽酸（3.1.2），用水稀釋并定容至1000mL，混勻。亞鐵氰化鉀溶液（106g/L）：稱取10.6g亞鐵氰化鉀（3.1.3），用水溶解并定容至100mL，混勻。乙酸鋅溶液（220g/L）：稱取22g乙酸鋅（3.1.4），加入3mL

3、冰乙酸（3.1.5）溶解，用水稀釋并定容至100mL，混勻。乙二胺四乙酸二鈉溶液（100g/L）：稱取10g乙二胺四乙酸二鈉（3.1.6），用5mol/L氫氧化鉀溶液（3.1.9）溶解，并定容至100mL，混勻。AHMT溶液（5g/L）：稱取0.5g 4-氨基-3-聯(lián)氨-5-巰基-1，2，4-三氮雜茂（3.1.8），用0.5mol/L鹽酸溶液（3.1.11）溶解，并定容至100mL，混勻后置于棕色瓶中，有效期6個月。高碘酸鉀溶液（15g/L）：稱取1.5g高碘酸鉀（3.1.7），用0.2mol/L氫氧化鉀溶液（3.1.9）溶解，并定容至100mL，混勻。甲醛標準品溶液（100g/mL）。參考物

4、質(zhì)甲醛參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量見表1。表1 甲醛參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子量甲醛Formaldehyde50-00-0HCHO30.03標準溶液配制甲醛標準工作液（10g/mL）：精密量取甲醛標準品溶液（100g/mL）（3.1.17）1mL，置于10mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為10g/mL的甲醛標準工作液，臨用新制。材料甲醛快速檢測試劑盒（AHMT法-比色卡法）：適用基質(zhì)為水發(fā)產(chǎn)品及其浸泡液，需在陰涼、干燥、避光條件下保存。濾紙：中速定性濾紙。儀器和設(shè)備移液器

5、：200L，1mL，5mL。渦旋混合器。電子天平或手持式天平：感量為0.01g。離心機：轉(zhuǎn)速4000r/min。環(huán)境條件：溫度1535，濕度80%。分析步驟試樣制備取適量有代表性樣品的可食部分或浸泡液，固體樣品剪碎混勻，液體樣品需充分混勻。試樣的提取準確稱取試樣1g（精確至0.01g）或吸取試樣1mL，置于15mL離心管中，加水定容至10mL，渦旋提取1min，靜置5min，取上清液作為提取液（如上清液渾濁，加入1mL亞鐵氰化鉀溶液（3.1.12）和1mL乙酸鋅溶液（3.1.13），渦旋混勻，4000r/min離心5min或濾紙（3.4.2）過濾，取上清液或濾液作為提取液）。測定步驟準確移取提

6、取液2mL于5mL離心管中，加入0.4mL乙二胺四乙酸二鈉溶液（3.1.14）和0.4mL AHMT溶液（3.1.15），渦旋混勻后靜置10min，再加入0.1mL高碘酸鉀溶液（3.1.16），渦旋混勻后靜置5min，立即與標準色階卡目視比色，10min內(nèi)判讀結(jié)果。進行平行試驗，兩次測定結(jié)果應(yīng)一致，即顯色結(jié)果無肉眼可辨識差異。質(zhì)控試驗每批樣品應(yīng)同時進行空白試驗和加標質(zhì)控試驗。用色階卡和質(zhì)控試驗同時對檢測結(jié)果進行控制?？瞻自囼灧Q取空白樣品，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作。加標質(zhì)控試驗加標質(zhì)控樣品：準確稱取空白試樣1g（精確至0.01g），置于15mL離心管中，加入0.5mL甲醛標準工作液（

7、10g/mL）（3.3），使樣品中甲醛含量為5mg/kg。加標質(zhì)控樣品按5.2和5.3步驟與樣品同法操作。結(jié)果判定要求觀察檢測管中樣液顏色，與標準色階卡比較判讀樣品中甲醛的含量。顏色淺于檢出限（5mg/kg）則為陰性樣品；顏色接近或深于5mg/kg則為陽性樣品。色階卡見圖1。甲醛標準比色卡（mg/kg或mg/L） 0 5 10 20 50 100 200圖1 甲醛標準色階卡質(zhì)控試驗要求：空白試驗測定結(jié)果應(yīng)為陰性，質(zhì)控樣品試驗測定結(jié)果應(yīng)在其標示量值允差范圍內(nèi)，加標質(zhì)控試驗測定結(jié)果應(yīng)與加標量相符。結(jié)論由于色階卡目視判讀存在一定誤差，為盡量避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果，讀數(shù)時遵循就高不就低的原則。當(dāng)測定結(jié)果為

8、陽性時，應(yīng)對結(jié)果進行確證。性能指標檢測限：5mg/kg或5mg/L。靈敏度：靈敏度應(yīng)95%。特異性：特異性應(yīng)85%。假陰性率：假陰性率應(yīng)5%。假陽性率：假陽性率應(yīng)15%。注：性能指標計算方法見附錄A。AHMT法（分光光度法）原理樣品中的甲醛經(jīng)提取后，在堿性條件下與4-氨基-3-聯(lián)氨-5-巰基-1，2，4-三氮雜茂 （AHMT）發(fā)生縮合，再被高碘酸鉀氧化成6-巰基-S-三氮雜茂4，3-b-S-四氮雜苯的紫紅色絡(luò)合物，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與甲醛含量成正相關(guān)，用分光光度計在550nm處測定吸光度值，與標準系列比較定量，得到樣品中甲醛的含量。試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為G

9、B/T 6682規(guī)定的二級水。試劑同3.1。參考物質(zhì)同3.2。標準溶液配制同3.3。材料甲醛快速檢測試劑盒（AHMT法-分光光度法）：適用基質(zhì)為水發(fā)產(chǎn)品及其浸泡液，需在陰涼、干燥、避光條件下保存。濾紙：中速定性濾紙。儀器和設(shè)備移液器：200L，1mL，5mL。渦旋混合器。電子天平或手持式天平：感量為0.01g。離心機：轉(zhuǎn)速4000r/min。分光光度計或相應(yīng)商品化測定儀。環(huán)境條件：溫度1535，濕度80%。分析步驟試樣制備同5.1。試樣的提取同5.2。測定步驟準確吸取甲醛標準工作液（10mg/L）0mL、0.1mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL分別置于5

10、mL帶刻度的具塞刻度試管中，加水定容至2mL，配制成濃度分別為0mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L的甲醛標準系列工作液。準確移取13.2制備的提取液2mL置于5mL離心管中，加入0.4mL乙二胺四乙酸二鈉溶液和0.4mL AHMT溶液，渦旋混勻后靜置10min，再加入0.1mL高碘酸鉀溶液，渦旋混勻后靜置5min，將顯示溶液置于1 cm比色皿中，以甲醛標準系列工作液的零點為參比調(diào)零，于550 nm測定吸光度值。質(zhì)控試驗每批樣品應(yīng)同時進行空白試驗和加標質(zhì)控試驗?？瞻自囼灧Q取空白樣品，按照12.2和12.3步驟與樣品同法操作。加標質(zhì)控試驗加標質(zhì)控樣

11、品：準確稱取空白試樣1g（精確至0.01g），置于15mL離心管中，加入0.5mL甲醛標準工作液（10g/mL）（3.3），使樣品中甲醛含量為5mg/kg。加標質(zhì)控樣品按12.2和12.3步驟與樣品同法操作。標準曲線的制作以標準系列工作液的濃度為橫坐標，以其吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。分析結(jié)果的表述結(jié)果計算試樣中甲醛的含量按式（1）計算：（1）式中：X試樣中甲醛的含量，單位為毫克每千克或毫克每升（mg/kg或mg/L）；由標準曲線得到的試樣提取液中甲醛的濃度，單位為毫克每升（mg/L）；0由標準曲線得到的空白提取液中甲醛的濃度，單位為毫克每升（mg/L）；V試樣定容體積，單位為毫升（mL）

12、；m試樣的取樣量，單位為克或毫升（g或mL）；1000單位換算系數(shù)。計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。結(jié)果判定當(dāng)測定結(jié)果5mg/kg或mg/L時，判定為陽性，陽性結(jié)果的試樣需要重復(fù)檢驗2次以上。質(zhì)量控制要求空白試驗測定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標質(zhì)控試驗測定結(jié)果回收率應(yīng)60%。結(jié)論當(dāng)測定結(jié)果為陽性時，應(yīng)對結(jié)果進行確證。性能指標檢測限：5mg/kg或5mg/L。靈敏度：靈敏度應(yīng)95%。特異性：特異性應(yīng)85%。假陰性率：假陰性率應(yīng)5%。假陽性率：假陽性率應(yīng)15%。注：性能指標計算方法見附錄A。乙酰丙酮法（分光光度法）原理樣品中的甲醛經(jīng)提取后，在沸水浴條件下與乙酰丙酮發(fā)生反應(yīng)，生成黃色物質(zhì)，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與

13、甲醛含量成正相關(guān)，用分光光度計在413nm處測定吸光度值，與標準系列比較定量，得到樣品中甲醛的含量。試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的二級水。試劑無水乙酸鈉。乙酰丙酮。冰乙酸。乙酰丙酮溶液：稱取25.0g無水乙酸鈉（18.1.1）溶于適量水中，移入100mL容量瓶中，加0.4 mL乙酰丙酮和3.0 mL冰乙酸，加水定容至刻度，混勻，移至棕色試劑瓶中，28保存，有效期1個月。甲醛標準品溶液（100g/mL）。參考物質(zhì)同3.2。標準溶液配制同3.3。材料甲醛快速檢測試劑盒（乙酰丙酮法-分光光度法）：適用基質(zhì)為水發(fā)產(chǎn)品及其浸泡液，需在陰涼、干燥、避光條件下

14、保存。濾紙：中速定性濾紙。儀器和設(shè)備移液器：200L，1mL，5mL。渦旋混合器。電子天平或手持式天平：感量為0.01g。離心機：轉(zhuǎn)速4000r/min。分光光度計或相應(yīng)商品化測定儀。環(huán)境條件：溫度1535，濕度80%。分析步驟試樣制備同5.1。試樣的提取同5.2。測定步驟準確吸取甲醛標準工作液（10mg/L）0mL、0.1mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL分別置于5mL帶刻度的具塞刻度試管中，加水定容至2mL，配制成濃度分別為0mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L的甲醛標準系列工作液。準確移取20.2制備

15、的提取液2mL于5mL離心管中，加入0.2mL 乙酰丙酮溶液，混勻后沸水浴5min，取出冷卻至室溫，將顯示溶液置于1 cm比色皿中，以甲醛標準系列工作液的零點為參比調(diào)零，于413 nm測定吸光度值。質(zhì)控試驗每批樣品應(yīng)同時進行空白試驗和加標質(zhì)控試驗?？瞻自囼灧Q取空白樣品，按照20.2和20.3步驟與樣品同法操作。加標質(zhì)控試驗加標質(zhì)控樣品：準確稱取空白試樣1g（精確至0.01g），置于15mL離心管中，加入0.5mL甲醛標準工作液（10g/mL）（3.3），使樣品中甲醛含量為5mg/kg。加標質(zhì)控樣品按20.2和20.3步驟與樣品同法操作。標準曲線的制作同13。分析結(jié)果的表述結(jié)果計算同14.1。結(jié)

16、果判定同14.2。質(zhì)量控制要求同14.3。結(jié)論當(dāng)測定結(jié)果為陽性時，應(yīng)對結(jié)果進行確證。性能指標檢測限：5mg/kg或5mg/L。靈敏度：靈敏度應(yīng)95%。特異性：特異性應(yīng)85%。假陰性率：假陰性率應(yīng)5%。假陽性率：假陽性率應(yīng)15%。注：性能指標計算方法見附錄A。其他本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時不作限定。方法使用者在使用替代試劑、試劑盒或操作步驟前，須對其進行考察，應(yīng)滿足本方法規(guī)定的各項性能指標。本方法參比標準為SC/T 3025-2006水產(chǎn)品中甲醛的測定 液相色譜法或其他現(xiàn)行有效的甲醛檢測標準。附錄A定性方法性能計算表表A.1 性能指標計算方法樣品

17、情況a檢測結(jié)果b總數(shù)陽性陰性陽性cN11N12N1.=N11+N12陰性N21N22N2.=N21+N22總數(shù)N.1=N11+N12N.2=N21+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2顯著性差異(2)c2=(|N12-N21|-1)2/(N12+N21),自由度（df）=1靈敏度(p+，%)p+=N11/N1.特異性(p-，%)p-=N22/N2.假陰性率(pf-，%)pf-=N12/N1.=100-靈敏度假陽性率(pf+，%)pf+=N21/N2.=100-特異性相對準確度，%d(N11+N22)/(N1.+N2.)注：a由參比方法檢驗得到的結(jié)果或者樣品中實際的公議值結(jié)果；b由待確認方法檢驗得到的結(jié)果。靈敏度的計算使用確認后的結(jié)果。用于確認方法時，結(jié)果5mg/kg時，判定為陽性（僅用于計算性能指標）；c本方法