質(zhì)粒的分子生物學(xué)與質(zhì)粒載體精

1、第三章質(zhì)粒的分子生物學(xué)與質(zhì)粒載體一、填空題. 基因工程中有3種主要類型的載體：、.由于不同構(gòu)型的DNA插入EB的量不同，它們在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率也不同，SCDNA的泳動速 度，OC DNA泳動速度, L DNA居中，通過凝膠電泳和EB染色的方法可將不同構(gòu)型的DNA分別開來.質(zhì)粒的復(fù)制像染色體的復(fù)制一樣,是從特定的起始點(diǎn)區(qū)開始的。然而，質(zhì)粒的復(fù)制可以是向的、或是向的。在雜種質(zhì)粒中，每個復(fù)制子的起點(diǎn)都可以有效地加以使用。但是在正常條件下只仃一個起點(diǎn)可能居支配地位.并認(rèn)為：當(dāng)某些具有低拷貝數(shù)的嚴(yán)緊型質(zhì)粒與松弛性質(zhì)粒融合后，在正常情況下 的復(fù)制起點(diǎn)可能被苯閉。.就克隆一個基因（DNA片段）來說,

2、最簡單的質(zhì)粒載體也必需包括三個部分：、一、。另外,一個理想的質(zhì)粒載體必須具有低分子量。.如果兩個質(zhì)粒不能穩(wěn)定地共存于同一個寄主細(xì)胞中，則屬于群，這是因?yàn)樗鼈兊乃?質(zhì)?？截悢?shù)是指細(xì)胞中。.旦制子山三部分組成：.薛母的2Pm質(zhì)粒有,可以配對形成啞鈴結(jié)構(gòu)。.一個帶有質(zhì)粒的細(xì)菌在TTEB的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間后，一部分細(xì)胞中已測不出質(zhì)粒，這種現(xiàn)象叫-.PBR322是一種改造型的質(zhì)粒，它的復(fù)制f來源丁，它的四環(huán)素抗“4囚來門于 TOC o 1-5 h z 一一.它的氨羊有毒素抗性基因來自于-.質(zhì)粒的消失同染色體基因的突變是不同的，前者不能恢復(fù)，后者可以通過恢受該基因的性狀。 12.C01E1質(zhì)粒復(fù)制的

3、起始需要三種能.即、和. YAC的最大容我能力是，BAC敦體的最大容載能力是. pSClOl是一種復(fù)制的質(zhì)粒.把那些沒有可檢測表型的燒粒稱為。.轉(zhuǎn)座子主要由下列部分組成：（1）（2）. pUC18質(zhì)粒是目前使用較為廣泛的載體.pUC系列的載體是通過和兩種質(zhì)粒改造而來.它的復(fù)制子來自.AP抗性基因則是來自-.在基因型的表示中，符號。表示：符號表示。二、判斷題迄今發(fā)現(xiàn)的質(zhì)粒DNA都是環(huán)狀的。線性質(zhì)粒同環(huán)狀質(zhì)粒一樣都不帶有宿主必需的基因。有a、b、c三個質(zhì)粒，因?yàn)閍和b能夠共存于一個細(xì)胞，a和c也可共存于同一個細(xì)胞，所以b和 c 一定能婚共存于同一個細(xì)胞。插入元件（1S）也是一種轉(zhuǎn)座元件，它除了有轉(zhuǎn)

4、座酶基因外，還有附加基因.如果兩個不同的質(zhì)粒M以穩(wěn)定地共存于同一個細(xì)胞中，這兩種質(zhì)粒則屬于同一個不親和群。一個帶有反向重復(fù)序列的雙鏈DNA經(jīng)變性后，復(fù)性時其單鏈可形成發(fā)夾環(huán).能夠在不同的宿主細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒叫穿梭質(zhì)粒。任何一種質(zhì)粒都可以用氯霉素擴(kuò)增的方法，增加它的拷貝數(shù)。只有完整的豆制子才能進(jìn)行獨(dú)立復(fù)制，一個失去了復(fù)制起點(diǎn)的復(fù)制子不能進(jìn)行獨(dú)立復(fù)制.CsCl-EB密度梯度離心法純化SC DNA原理是根據(jù)EB可以較多地插入到SC DNA中，因而沉降速度較 快。質(zhì)粒ColEl同pSClOl共整合后，得到重組質(zhì)粒PSC134,具有兩個復(fù)制起點(diǎn)，這兩個起點(diǎn)在任何細(xì) 胞中都是可以使用的。PBR322可以用

5、于黏性末端連接、平末端連接和同聚物接尾法連接，無論用哪種方法連接，都可以用 同一種肺回收外源片段.所謂穿梭質(zhì)粒載體是能夠在兩種以上的不同宿主細(xì)胞中亞制的質(zhì)粒，所用的復(fù)制起點(diǎn)不同。一般情況下，質(zhì)粒既可以整合到染色體上，也可以獨(dú)立存在.ColEl是惟一用作基因工程的自然質(zhì)粒載體，它具有四環(huán)素抗性標(biāo)記，因而很容易選擇。某一染色體DNA經(jīng)內(nèi)切的Sa/I切割后，產(chǎn)生了若干個具有黏性末端的DNA片段，將這些片段分別在 T4 DHA連接的的作用下自身連接成環(huán).然后導(dǎo)人受體細(xì)胞，都可以進(jìn)行獨(dú)立地復(fù)制。如果細(xì)菌的某種表型特征在UV處理下喪失后不再恢更，這種表型有可能是質(zhì)粒賦予的?；蚩寺≈校统重悢?shù)的質(zhì)粒載體是

6、沒行用的.三、選擇題（單選或多選）線性質(zhì)粒豆制的引物來自于（）1）細(xì)胞中合成的小分子RNA(b)自身末端的端粒序列(c)外加的算聚DNA(d)自身斷裂的小分子DNA下面關(guān)于松弛型質(zhì)粒(relaxedplasmid)性質(zhì)的描述中，()是不正確的1)質(zhì)粒的復(fù)制只受本身的遺傳結(jié)構(gòu)的控制，而不受染色體復(fù)制機(jī)制的制約，因而有較多的拷貝數(shù)位)可以在氯霉素作用下進(jìn)行擴(kuò)增(c)通常帶有抗藥性標(biāo)記(d)同嚴(yán)緊型質(zhì)粒融合后，雜合質(zhì)粒優(yōu)先使用松弛型質(zhì)粒的復(fù)制子基因工程中所用的質(zhì)粒載體大多是改造過的，食正的天然質(zhì)粒載體很少，在下列載體中只有()被視為用作基內(nèi)I程載體的天然質(zhì)粒載體(a)pBR322(b)pSC101(

7、c)pUB110(d)pUC18下列哪種克隆我體對外源DNA的容我量最大？()0)質(zhì)粒黏粒(c)酵母人工染色體(YAC)(d)A噬菌體(e)cDNA表達(dá)教體反向重復(fù)序列：(a)可以回折形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)(b)可以是某些發(fā)白的結(jié)合位點(diǎn)S)參與轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座(d)12 1-說法都不對松弛型質(zhì)粒:(a)在寄主細(xì)胞中拷貝數(shù)較多(b)可用氯霉素擴(kuò)增(c) 一般沒有選擇標(biāo)記(d)上述(a)、(b)兩項正確T. ColEl是惟一用作基因工程載體的自然質(zhì)粒，這種質(zhì)粒：()(a)是松弛復(fù)制型(b)具有四環(huán)素抗性(c)能被氯霉素擴(kuò)增(d)能產(chǎn)生腸桿菌素.同一種質(zhì)粒DNA.以三種不同的形式存在，電泳時，它們的遷移速率是：(

8、)(a)0C DNASC DNPLDNA (b)SC DNAL DNAOC DNA(c)L DNAX)C DNASC DNA (d)SC DNAX)C DNAL DNA.PBR322是一種改造型的質(zhì)粒，含TT兩個抗性基因，其中四環(huán)素抗性基因來自：()(a) ColEl (b)Ri 旗粒(c)pSC101 (d)pUC18.關(guān)于質(zhì)粒的相容性,下面哪一種說法不正確？()1)不同相容群的質(zhì)粒能的共存于同一個細(xì)胞出)質(zhì)?？梢苑殖扇舾蓚€不相容群，但不能分成若干個相容群S)如果a、b兩種質(zhì)粒不相容，說明它們的復(fù)制機(jī)制相同(d)屬于同一個不相容群中的質(zhì)粒，不僅復(fù)制機(jī)制相同，而且拷貝數(shù)和分子量也相同.關(guān)丁穿板

9、項粒我體，下面哪一種說法最正確？()(a)在不同的宿主中具有不同的復(fù)制機(jī)制(b)在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的旦制起點(diǎn)(c)在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制版(d)在不同的宿主細(xì)胞中具有不同的復(fù)制速率.能夠用來克隆32kb以下大小的外源片段的質(zhì)粒我體是()(a)charoBid (b)plasBid (c)cos*id (d)phagaiid.第一個作為重組DNA載體的旗粒是()(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSC101 (d)pUC18. Ti 質(zhì)粒：()la)可從農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)到植物細(xì)胞中(b)作為雙鏈DNA被轉(zhuǎn)移(c)在植物中導(dǎo)致腫瘤Id)介導(dǎo)冠瘦堿的合成，作為細(xì)菌的營養(yǎng)物和植物的

10、生長激素(e)需要細(xì)菌的叮了其因幫助轉(zhuǎn)移(f)在植物細(xì)胞中作為染色體外質(zhì)粒四、簡答胭YAC載體具有什么樣的功能性DNA序列？為什么在克隆大片段時, YAC具有優(yōu)越性？列舉質(zhì)粒致體必須具備的4個基本特性。什么叫穿校載體？說明收少質(zhì)粒和噬菌體載體上某種靜的識別位點(diǎn)的方法和原理。雖然質(zhì)粒的帶動轉(zhuǎn)移給質(zhì)粒載體的安全性帶來一定的困難，但是通過帶動轉(zhuǎn)移將質(zhì)粒轉(zhuǎn)移到特定 的受體菌中也是其因工程中常用的實(shí)胺技術(shù).請舉一例說明之.為什么來自HfrxF-的重組體幾乎總是F-?解祥為什么不同的Hfr菌株具有不同的轉(zhuǎn)移起點(diǎn)和方向？怎樣從一個E. coli的Hfr菌株中分離到一個F 的菌株？你已經(jīng)分離了一個新的F因子,

11、怎樣用最簡便的方法知道最初的F因子的部分DNA已經(jīng)被切除. 并被一個外源DNA（也就是細(xì)菌DNA）所替代？你能用哪一種基因轉(zhuǎn)移的方法確定（DKcoli染色體上一個新發(fā)現(xiàn)的基因座在其染色體上的位置；（2）一個新分離的突變在基因內(nèi)的位置。用加TT注料的圖表說明F質(zhì)粒是怎樣從一個P細(xì)胞轉(zhuǎn)移到F細(xì)胞.并簡要說明轉(zhuǎn)移復(fù)制如何不同 于營養(yǎng)體的受制。五、問答題什么是復(fù)制子（replicon）?什么是質(zhì)粒的相容性?什么是不相容群?機(jī)制是什么？什么是質(zhì)粒的帶動轉(zhuǎn)移？說明變性定位法和限制性內(nèi)切核酸酹定位法研究質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)的原理。ColEl衍生質(zhì)粒捐貝數(shù)調(diào)節(jié)機(jī)理的機(jī)理是什么？R1質(zhì)粒攙貝數(shù)受到怎樣的調(diào)節(jié)控制？質(zhì)粒如

12、何維持在細(xì)胞中的穩(wěn)定？引起質(zhì)粒不相容性的主要原因是什么？由于基因工程是人為改變遺傳信息的操作，因此必須注意被操作基因的安全，進(jìn)行嚴(yán)格的監(jiān)控.質(zhì)粒栽體的安全性是I分重要的。請同質(zhì)粒載體的安全條件包拈哪幾個方面？請指出質(zhì)粒pSClOl的一些生物學(xué)特性（包括結(jié)構(gòu)和遺傳）及在基因工程中的作用.自然界中具備理想條件的質(zhì)粒載體為數(shù)不多，即使是ColEl和pSClOl這兩個I然質(zhì)粒也不盡人意, 通常需要進(jìn)行改造,請問質(zhì)粒改造包括哪些基本內(nèi)容？質(zhì)粒改造的發(fā)展過程如何？在質(zhì)粒中如何增戰(zhàn)院切點(diǎn)？TT人用限制性內(nèi)切核酸酶EcoRi分別切割松弛型質(zhì)粒ColEl和嚴(yán)緊型質(zhì)粒pSClOl（各有一個切點(diǎn)）. 然后重組連接形成一個雜種質(zhì)粒PSC134,請推測這種質(zhì)粒有什么特性和用途?，F(xiàn)分離了 4種新的大腸桿菌Hfr菌株,通過中斷接合實(shí)驗(yàn),針對海-菌株確定了高頻轉(zhuǎn)移的標(biāo)記 基因和它們進(jìn)入F受體的時間分別為:man13innal29lys16pur6標(biāo)記基因和第一trp6aet14arg9trp3次進(jìn)入的時間his23thr4al2thr31pur3uvr20his32lac23HfrlHfr2Hfr3Hfrlgal 14（gal、lac、nal