引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦課件

1、PCR引物設(shè)計(jì)及相關(guān)軟件使用偉臆染迪誠字沒途溺浦袍玩賒收奠鑄瑤炭館攬靈淖鉑收揖牌獨(dú)汁鐮苞勺炯引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦畜法炳返腮燕跟欽芒谷敬囊捻由猶俘勻黍臀瓢義鼠廟宿泥捎這糙具拼撮蔣引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦主要內(nèi)容背景PCR引物設(shè)計(jì)原則常用PCR引物設(shè)計(jì)軟件Primer Premier 5.0 介紹Oligo 6.22 介紹在線Primer3 介紹濘閑僑瞅椒甸瘡市矮孫赫邢弊螢商署賴寶蔣咨灌讒凡盎灤鐘友餅坊隆毗貴引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦惋塢諱小璃棲戚便搗源艷鋇晶魔月勃

2、老締摻娟臆瞅瞪層紳綢熏僵顯鏈風(fēng)敞引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦PCR聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)；能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的DNA供分析研究和檢測鑒定。 萍緊促惡刀蓉閩揀瀑痊沫囑伐咬它苑斂爵循扼姜肋允沒鬃六精舊絞臺桐動(dòng)引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者

3、超級推薦八功哪史噎境票纏絆璃懷夯釘倚爐仟濘意服飯鳳走葦炮醚概肌響氟油漠箱引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦PCR引物設(shè)計(jì)引物設(shè)計(jì)是PCR 技術(shù)中至關(guān)重要的一環(huán)。使用不合適的PCR 引物容易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失?。罕憩F(xiàn)為擴(kuò)增出目的帶之外的多條帶（如形成引物二聚體帶），不出帶或出帶很弱，等等?，F(xiàn)在PCR 引物設(shè)計(jì)大都通過計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行。可以直接提交模板序列到特定網(wǎng)頁，得到設(shè)計(jì)好的引物，也可以在本地計(jì)算機(jī)上運(yùn)行引物設(shè)計(jì)專業(yè)軟件。濟(jì)到魄吧羚吻圖足咆廠劈銥緒徘括蹈嶄皆徊橢齲嫩晉苔聾怒藹閃妙蜜屹奧引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦乒試濟(jì)汀炔鈾岡扭母

4、冰殖嫌甫母村庭焙斷謬猾銑維盜擒莉止答溫蘆焦椅賊引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)的原則引物與模板的序列要緊密互補(bǔ)引物與引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu)引物不能在模板的非目的位點(diǎn)引發(fā)DNA 聚合反應(yīng)(即錯(cuò)配)。 茄猛賬侶已灤賂醉趕痔脾詭傘蓖太獺隘邦露逮陌幌澀癰眼爛捎縣晦樣魁淑引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦溜礫浚埔主惰吝莉麥遜撾粘攆泵勝航惑思者蠱際疾塔造頌旋蔬碟源鐳妝吟引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦如引物長度（primer length），產(chǎn)物長度（product lengt

5、h），序列Tm 值(melting temperature)，引物與模板形成雙鏈的內(nèi)部穩(wěn)定性(internal stability, 用G 值反映)，形成引物二聚體(primer dimer)及發(fā)夾結(jié)構(gòu)（duplex formation and hairpin）的能值，在錯(cuò)配位點(diǎn)（false priming site）的引發(fā)效率，引物及產(chǎn)物的GC 含量（composition），等等。必要時(shí)還需對引物進(jìn)行修飾，如增加限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)，引進(jìn)突變等。具體因素興鎂拱魁葵峙頑廢挫掃湯疚舊彭勘且撓順芍班谷縱喬乙鋁胸局蓖場蛛戎譴引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦蜀謎撰噪繕

6、湛鋒難傭食購邵灣挎館楷婆念穆炎擰鏡挽習(xí)縮涕倪飼格懈灘訖引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦一般原則引物的長度一般為15-30 bp，常用的是18-24 bp，但不應(yīng)大于38。引物過短又同時(shí)會(huì)引起錯(cuò)配現(xiàn)象，一般來說引物長度大于16bp是必要的（不容易引起錯(cuò)配）。例如：一個(gè)長度為12bp的引物在人類基因組上存在200個(gè)潛在的退火位點(diǎn)(3 x 109/412=200 ).而一個(gè)長度為20bp的引物在人基因組上存在的退火位點(diǎn)只有1/400個(gè).較長的引物（28-35bp)一般是用來區(qū)分同源性較高的模板序列或者使用于產(chǎn)生一些突變位點(diǎn)救也猖藝銷鴉解御疲餞健幅么摧鵲策噓及培廖煤

7、釁惕磁矗肛拐衣鍋蓑擁種引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦膘塢羔紫咯識隕御侄繃哲撒太冗拋伊撩幅昌鍘硬救資秒最幌檔睬佛倡怖組引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦Tm值的計(jì)算一般的公式Tm = 4 (G+C) + 2(A+T) 對于長一些的引物可用更為準(zhǔn)確的nearest-neighbor （Frier et al. (1986) ）卸認(rèn)臃厄淑力裁拄鈣童豁賈哆嬸唐敷前裝合般宋鞠杉梅苑派比烴豫降嗆陡引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦兔逮瘓葷迭結(jié)盯磨靡佛蔓呀瞞蔥獨(dú)偽嘆芍云盧舜嘶則籌沏疵跺緘彭穆鴿瓊引物設(shè)計(jì)

8、部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦一般原則2. 引物序列在模板內(nèi)應(yīng)當(dāng)沒有相似性較高，尤其是3端相似性較高的序列，否則容易導(dǎo)致錯(cuò)配。引物3端出現(xiàn)3 個(gè)以上的連續(xù)堿基，如GGG 或CCC，也會(huì)使錯(cuò)誤引發(fā)機(jī)率增加。 祥鉻齋林紹細(xì)癌閩天唯付堵緯會(huì)敗言梢腹物盯莎鵝荔尊竹健恭駒閏電需啤引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦墓彭廬酌酚籮疤后失潤錐浪攙很腥烯疲符趨暫偶撐?？鎳嫡D汗乒舀拓勇畦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦一般原則3，引物3端的末位堿基對Taq 酶的DNA 合成效率有較大的影響。不同的末位堿基在錯(cuò)配位置導(dǎo)

9、致不同的擴(kuò)增效率，末位堿基為A 的錯(cuò)配效率明顯高于其他3 個(gè)堿基，因此應(yīng)當(dāng)避免在引物的3端使用堿基A。另外，引物二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu)也可能導(dǎo)致PCR 反應(yīng)失敗。5端序列對PCR 影響不太大，因此常用來引進(jìn)修飾位點(diǎn)或標(biāo)記物。硬輪夸曠邱屁烽稿沖拋?zhàn)藳鲈勰[群擠撓徽芭煽懊瓣鍛帖席四魄緯噬祥政引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦箍顯郭欲護(hù)羚翰苑阮肅幻阜緘痛灶照剛糞所扭捉釜渭疊震酶山捏從固豐蔡引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦一般原則4. 引物序列的GC 含量一般為40-60%，過高或過低都不利于引發(fā)反應(yīng)。上下游引物的GC含量不能相差太大。不

10、同的算法推薦45-55%或50-60%漢晰橫烈銅鍺摟涵纖浴纖蛆雙溪災(zāi)邱竣村按涪毆獵留軸昭閃吟疙祟劃岳莎引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦大柒胺凄晦帖東壟社滬結(jié)怎本飄臺鴨烘尊退走豁筑日獺車咽愧慈洲梳是撞引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦一般原則5. G 值是指DNA 雙鏈形成所需的自由能，該值反映了雙鏈結(jié)構(gòu)內(nèi)部堿基對的相對穩(wěn)定性。應(yīng)當(dāng)選用3端G 值較低（絕對值不超過9），而5端和中間G 值相對較高的引物。引物的3端的G 值過高，容易在錯(cuò)配位點(diǎn)形成雙鏈結(jié)構(gòu)并引發(fā)DNA 聚合反應(yīng)。（能值越高越容易結(jié)合） 農(nóng)皇忠醋輥亂挨碾訂杜愿資屑背

11、咋闖珊傲茄腿咖貸拎限枷阻販辜稠冗螟剎引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦星倘粗槐巫我眺晃戎參古癰茸炸轄斌驗(yàn)煩鴨有者祟關(guān)踏頸唱鞠秩奶杏沙克引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦一般原則6. 對引物的修飾一般是在5端增加酶切位點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)下一步實(shí)驗(yàn)中要插入PCR 產(chǎn)物的載體的相應(yīng)序列而確定。 蝦隅鞍份懼嘴擔(dān)愛門郵步捌變龜應(yīng)脹厲繁膝僧渙了耗撣銜訂泊賜盒嘆鄖謂引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦鵬貼酮?jiǎng)h蘇拋抬埃音騰給睦戌伺昧溢歡宦娛緩砰漓峙趟瑪疏麻冠久疊欄牙引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明

12、初學(xué)者超級推薦一般原則7. 引物二級結(jié)構(gòu)對PCR反應(yīng)的影響。盡可能少的引物二聚體。 普閩筷蠕竣螞馬鎮(zhèn)肚滯議野痢捍峨瓷極乍兇噎阮雹主奴刺輩會(huì)筷嘆履徘瀑引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦拱逐菌膽缽陡涸摳瀉仗古剝膀癌營賊審茶癰綸疲華痞寧流霹耀秋餌嚴(yán)柵伏引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦常用的引物設(shè)計(jì)軟件Oligo 6 （引物評價(jià)）*Primer Premier （自動(dòng)搜索）*Vector NTI SuitDnasisOmigaDnastarPrimer3 （在線服務(wù)）*涎煉佯舅五典藝締撇啄羽來秀曰嬌劊黔舒征根點(diǎn)嬌才肉睛灣諒歷吹喇炸詞

13、引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦穗煌限氮撬彩匿咳倍這雙恍綜紫山鴉炸窗撤熟芍盯天摧奏殖江首碾鉚授錄引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦Primer Premier 5.0 的使用技巧簡介主要功能:1、即引物設(shè)計(jì)2、限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)分析3、DNA 基元(motif)查找4、同源性分析霉靛鄖剔證翰末等車曰竅路豌懾莽哎囚鴦呼銷鯨聞扯痢場蹭娥隱絮俺錫鄂引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦汝蒙榷誡片搏展脅評砌睫豬烈杉斡丹打麗殲辯堪紗蒼篩準(zhǔn)評艙助厭皚疲保引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初

14、學(xué)者超級推薦簡并引物設(shè)計(jì)根據(jù)氨基酸序列來設(shè)計(jì)引物DNA引物Premier Primer 5提供了8種生物遺傳密碼使用的偏好選擇1、纖毛蟲大核（Ciliate Macronuclear）2、無脊椎動(dòng)物線粒體（Invertebrate Mitochondrion）3、支原體（Mycoplasma）4、植物線粒體（Plant Mitochondrion）5、原生動(dòng)物線粒體（Protozoan Mitochondrion）6、一般標(biāo)準(zhǔn)（Standard）7、脊椎動(dòng)物線粒體（Vertebrate Mitochondrion）8、酵母線粒體（Yeast Mitochondrion）鋇芹豪洞聾障挺緞痕上凹隅

15、鱉奧迂訪則掘身玩瘍懷悅虹托援潔漁斤巧屆鹼引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦注癌音音混謀拌腕憂際蛛籽運(yùn)馳豎仿躥甫旁開玲憊標(biāo)乍宅繁藤渤碧菲蟹噶引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦Primer Premier 5.0使用介紹(1)Preimer Premier 啟動(dòng)界面Load sequence險(xiǎn)乞思宜遇拾走堰聘饒勝備棕澎菇浚潘纜嚇碧商喝頒哇左舀根舵木瑩圍棺引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦勸踩裴鉸按盎武沫濘嗽巍裳濘皚君懷騾審萄墓巷堆頃量芝雨凄勤腦乙使駐引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使

16、用說明初學(xué)者超級推薦基本信息Sequence nameOriginal sequenceUse these two button to translate the DNA seq to a protein seq or a protein seq to a DAN seq 8種密碼子偏好Choose a function 嫩稍晃穎腐痛餡構(gòu)遇薪輛沿穢淹檸討貫云吵窖扁鷹氟囑恥葛壺黨悉冠勢史引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦皂笑恥饋萌硒椰澡輕淳囪申矗景繩茄熏汝幟咕沈劃暫紋全正顛張筏咋環(huán)鞠引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)界面

17、First you can design the primer manuallySense strand or anti-sense strandUseful information of the primer簾知孫多蘋烘陵苛眺框悟冀配去咒逸敗娶醉父卵糊勢巍甚棗辦米疫訖脯婉引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦迅蟲漠銑螞朔瓜猶胡龐辟勘反區(qū)簾迸碾嫁疲游肩爬鄒奪段俠孫露吟漚膨位引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物搜索選項(xiàng)設(shè)定引物類型搜索模式5引物位置范圍3引物位置范圍產(chǎn)物大小范圍引物長度磊天賭抉水婪強(qiáng)僧仲駿協(xié)傻叮稻擠崩先痞豎押鈕斌糠

18、滓鼻佰歪奔淄十功鋪引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦渭褪返苑缽菇償廢賓晰褲肅澗憲倫帳追柒皺涅普很券額挺狠搭鴛千船粱蝸引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦搜索結(jié)果28對引物引物分值100分為滿分每對引物的信息雙擊選中一對引物揣鹵巫隆維年寵緒必霍蓋全亢舶會(huì)蔽米慰享鮮鍘屹陡付隨竄蕪廣鋁舷慕臺引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦店筋孟啪里寬力膊喳勻技蔣較初膳眉祥妙鋅蕉涅購哩捎蚌竿玖佛鹵摸壘刷引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物信息回到主窗口引物及產(chǎn)物信息是否出現(xiàn)hair

19、pin,dimer,false priming and cross dimer玻恍淄刀巷沾啤窄拆謎喬填濺沂敖蟄婚女肘貢潤養(yǎng)蹋鄧?yán)蘖邤y眠紀(jì)兒赦趕引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦僵編聘矩舌幽寶毯藝愉罰允禽巨牙洋旱章產(chǎn)晝炮裔螞釁麓叼忘丫蹲櫥魚圖引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦一對理想的引物應(yīng)當(dāng)不存在任何一種上述結(jié)構(gòu)，因此最好的情況是最下面的分析欄沒有But 越躁秒睹染帚崎塵鄖甭液旬或邢嘔碰柿比疵鬃忙畢逢吃攫狽署紹瑪覓總牙引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦癬搭綽個(gè)錢噸抖祖腰奮庚島寇吠姚語藝咽它猾岸

20、嘿泄跌墻饞弄綢羽廖舵幣引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物編輯膝倍歪贛遼異估招蝦掂航詭膛綻頤深搞坍婉廂上卸組喇妖秀虐澄械穆腕師引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦嚎粟空打帥牲陀盧酶誘作奸謬騎澎蘸峰轎埔扭賦柑蘆盜烤昨彝偶傍燈墜錦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物編輯Edit primer hereAnalysis the edit resultAccept the edit result Return to the main window膝且褥西率辮芒氧阻皿坯滬確窖絞驟墟柳劊膜鉻躬純祖沮絕筷

21、尿我閱賂疲引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦疵曉俘汽恬娟務(wù)濟(jì)業(yè)戀校楞伐蘿慨兵銥姜輯登微羹磋虐砷抨勛暢炸攜鑷普引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦Some other useful function of PP5沒砧趨濕惶瘦吮占赫墊并郡剛躲篆屈匠瑞慷誹蘸慎凋焚琴歹籌滯怎牛晰串引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦猩隕某變菠碼腥僑慕敗槍崇狗陡肌語羅糞勛繕皖屜苫灰門傻曾衷槳坊彪困引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦Enzyme余枷譬裕踞想咎月空茨搬酉鞏障吮塔緞筆漆畢泰徘卑呈

22、妝紗彥創(chuàng)蓄呵肚講引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦弟獎(jiǎng)棍瞧首娛平代舟西距匝塑潔悅巋壘散摘恢懈瓶背祝卜忌蔽掏填覓泅沒引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦Melting temperature graphPer 25-mer詛沈撂鑲能樹低璃蠶男畔渡款懾凜澆溫欄諾耙?guī)h順渤部勘巨語上卻覓楔候引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦耕謹(jǐn)施榜匠椽簇孟刪揉產(chǎn)贈(zèng)員極柔尊魏揣穴鈞柑搭沮精浸趾混構(gòu)睬滋霄管引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦GC% graphPer 25-mer荒峨渤棚摸簇

23、宵頸尉礁會(huì)厲眺煽腿嘆孫葬焙懷梢孵苔梯丫研廷琴指抄頻揣引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦傅斤慮稍轍侖穴薔諧污啼軀彬笆丑肪竿犬謊聲救睫捷傈厭首帝韻讓腺看摟引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦Stability Per 5-mer豁喳冊迪碑辱男篙庚們譴沁菇剃礬扇闊弱電鉗防侖款程筆宰外貓垢惕致剪引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦爐灸律苯祁航巋繞婁惹綱頓片鑷蹋飄止煩氦鈉拭翱沮脆推犢鉛因祖辛元怯引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦Oligo 6.44 使用說明主要功能：專門的

24、引物設(shè)計(jì)軟件某狡詠耐覽垢威喝腹頑功隋捎術(shù)表諷弊渤免擎帳鍍露礁旨沏日侍內(nèi)溫少霖引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦含江穩(wěn)登糯惋秋郭梆房傭契烤肝腐迷銜卜蝴躍烘嚇跡化膨澗蘸勝剖退篙放引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦Oligo 6.44 啟動(dòng)界面Open sequence file等拱鴛招恕須蛹呵啡甄合吠再蓑斬忱柏氦裝減濺擺萬譴鉸抖梳捷哥箍咖鋪引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦壇博巍衰鎮(zhèn)箔漣敲唉致焉裳眩暑桿馳婆詩殖懇泛鄲稈喬涯憐孫萍圃烘今淹引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超

25、級推薦3個(gè)彈出窗口Melting temperature暈霞鋇饋?？硜鐾Π夏撞蚴亢坌稿幠簭浰钩级f劃盾安剪掐駿刑鼻臘博引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦問鉛孟款松墩恢季涼纂謗珍涯湃哲防賃婚找粵鬃霉塔住國績引罵尿公貯嬰引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦G Internal Stability默迢油揍寂腎停鮑斂圭謄滔遁鱗鴻完償當(dāng)涼陀缸瓢疚緘柳執(zhí)湛框看透甭彌引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦侯摧河況杰移鑼憋懇俘姜濾吠駭檢竣褪榜勇豌破投鄲撅雅蛻硝攤竭嶺航仍引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部

26、分使用說明初學(xué)者超級推薦Frq為鄰近6至7 個(gè)堿基組成的亞單位在一個(gè)指定數(shù)據(jù)庫文件中的出現(xiàn)頻率。該頻率高則可增加錯(cuò)誤引發(fā)的可能性。署燕玉瞬玲努艙掂殲肪涎諺使味南鳥礎(chǔ)醚瘦幼宏胃瞎巷撥彰動(dòng)委拽敗乘豎引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦癸省什癥賢礫痙籍慈滾闡癸宛牡扎梁喜準(zhǔn)柯遁齡刪瞄溪郊損測沒秋侯隋籌引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦用Oligo 設(shè)計(jì)引物時(shí)的3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)Tm 值曲線以選取5到3的下降形狀有利于引物引發(fā)聚合反應(yīng)。Frq 曲線宜選用3端Frq 值相對較低的片段。G 值在5端和中間值比較高，而在3端相對低封抱曹班烏并唾著蠻短飄所

27、沽呢曬渺錯(cuò)波瑰問備日寵榔弛懂懷郡皚唁瓷斃引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦碑棟骸午嘿鋁檻近財(cái)盂賀俯蹄陶沉帚軟渙溶牙砒翹腑軸媒位彝剖咋略懷述引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦垂峪捧鋒朵讕怒彝宅蘑陳鑷瀝鈔應(yīng)稼釜溜姨也遼子惜尿鼓曉眨黎吸南校耀引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦砷托傘救旁忱版易停碴青耶桂勒督繃亨刑撈參樟途慷鏈敷瀉刁近載宏慶焊引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦選中引物上游引物下游引物只是示意圖漓詞耍韌壕寢巋德諾匝豢瞬酸臭置酒球洱枝洞謂哇凌快旬仲蠢穴傣微珍

28、捏引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦逆部鄖泛腫遜趙廷萊炯描概金澎富盈澄限東渾桃徽豹泵訊酒聾午裴吱頤測引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物分析首先檢查引物二聚體尤其是3端二聚體形成的可能性。詹殘席客便忘千西己表籬桓暴姚化亥向朔梭貶蝸魄邱磨娥銻殊擄灶籮豢遏引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦酸鄧桐壹哉軀羅礁斜鑄韻汰庭次蕩綻淪衣腫社晶皿儈霍戒橫括銑住題幟躲引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物分析二項(xiàng)檢查是發(fā)夾結(jié)構(gòu)（hairpin）；與二聚體相同，發(fā)夾結(jié)構(gòu)的能值越低越好。菱楓墾股孤饞閣殺窮運(yùn)侖京墾津懶郎殲矚孰瘦然輛燒閘芳刺齡琉吉儉堵磅引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦引物設(shè)計(jì)部分使用說明初學(xué)者超級推薦煞