MM的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)概述課件

1、多發(fā)性骨髓瘤的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)北京朝陽(yáng)醫(yī)院西區(qū) 檢驗(yàn)科2016.04.14第1頁(yè)，共40頁(yè)。多發(fā)性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)MM是一種惡性漿細(xì)胞病，其腫瘤細(xì)胞起源于骨髓中的漿細(xì)胞，而漿細(xì)胞是B淋巴細(xì)胞發(fā)育到最終功能階段的細(xì)胞。發(fā)病率占所有腫瘤的12% ，血液腫瘤的10%常見于中、老年人(50-70歲居多,40歲以下少見)。第2頁(yè)，共40頁(yè)。臨床表現(xiàn)骨痛、病理性骨折：最常見腎功能受損、腎衰貧血血鈣水平異常免疫功能失調(diào)，感染心、腦臟器微循環(huán)障礙，心腦血管病變MM的臨床表現(xiàn)多樣化, 常常因此就診于骨科、腎臟內(nèi)科等, 漏診、誤診可達(dá)到70%以上！第3頁(yè)，共40頁(yè)。多發(fā)性骨髓瘤的現(xiàn)狀死亡

2、率 就診晚2/3 確診時(shí)已達(dá)中晚期骨折預(yù)后差增加負(fù)擔(dān)感染發(fā)生率高腎臟病變不可逆重視實(shí)驗(yàn)診斷早發(fā)現(xiàn) 早治療誤診率高1/3非血液科首診第4頁(yè)，共40頁(yè)。MM的實(shí)驗(yàn)室診斷常規(guī)檢查生化檢查骨髓檢查M蛋白鑒定分型診斷免疫分型漿細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)染色體測(cè)定基因異常檢測(cè)IL-6檢測(cè)影像學(xué)檢查第5頁(yè)，共40頁(yè)。常規(guī)檢查血常規(guī)：Wbc 減少、貧血、Plt 減低血沉： 加快 紅細(xì)胞呈緡錢樣排列血液生化檢查血清鈣磷和堿性磷酸酶：增高血清2微球蛋白：增高腎功能：BUN、Cr升高血液流變學(xué)檢查：血清粘滯度增加CRP：升高高尿酸血癥血清總蛋白、白蛋白LDH增高第6頁(yè)，共40頁(yè)。骨髓檢查骨穿：骨髓原、幼漿細(xì)胞（骨髓瘤細(xì)胞）明顯增

3、多。骨髓瘤 細(xì)胞在骨髓內(nèi)呈彌漫性分布，或灶性、斑片狀分布。 需要多次多部位穿刺，以免漏診數(shù)量：國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)為漿細(xì)胞15%,并有異常漿細(xì)胞或組織活檢證 實(shí)。國(guó)外最低標(biāo)準(zhǔn)為異常漿細(xì)胞10%或組織活檢證實(shí) 形態(tài)：細(xì)胞漿呈灰藍(lán)色，可見多核（2-3個(gè)核），核仁1-4 個(gè)，初漿區(qū)消失，胞漿內(nèi)可有少數(shù)嗜苯胺藍(lán)顆粒，偶 見嗜酸性球狀包涵體或大小不等的空泡。核染色質(zhì)疏 松，有時(shí)凝集成大塊，但不呈車輪狀排列第7頁(yè)，共40頁(yè)。 多發(fā)性骨髓瘤血象 多發(fā)性骨髓瘤骨髓象（漿細(xì)胞樣骨髓瘤細(xì)胞）第8頁(yè)，共40頁(yè)。多發(fā)性骨髓瘤骨髓象第9頁(yè)，共40頁(yè)。血M蛋白鑒定 M蛋白是單克隆漿細(xì)胞惡性增殖產(chǎn)生的均一蛋白。 MM常為單株漿細(xì)胞的前

4、體細(xì)胞惡性增生，形成龐大的單克隆漿細(xì)胞群，此種漿細(xì)胞可分泌大量結(jié)構(gòu)均一的免疫球蛋白或肽鏈亞單位，臨床上稱之為單克隆免疫球蛋白（monoclonal proteins, M蛋白）第10頁(yè)，共40頁(yè)。血清蛋白電泳是檢測(cè)M蛋白的唯一方法第11頁(yè)，共40頁(yè)。血清蛋白電泳（SPEP）：M蛋白形成異常濃集帶，位于 區(qū)內(nèi)，或 、2 區(qū)內(nèi)可見一窄底的高峰。由于尿液可以濃縮許多倍，因此檢查游離輕鏈時(shí)尿蛋白電泳（UPEP）比SPEP靈敏。80%的MM患者可發(fā)現(xiàn)M蛋白Alb12白蛋白1抗胰蛋白酶觸珠蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白IgG前白蛋白1酸性糖蛋白銅藍(lán)蛋白C3a、C3bCRP1脂蛋白抗糜蛋白酶2巨球蛋白IgA、IgM、IgD、

5、纖維蛋白原、1脂蛋白、血凝素第12頁(yè)，共40頁(yè)。瓊脂糖凝膠電泳原理-+蛋白加樣位置陰極 陽(yáng)極0-+-電場(chǎng)作用力第13頁(yè)，共40頁(yè)。正常的電泳圖譜第14頁(yè)，共40頁(yè)。 出現(xiàn)單克隆免疫球蛋白的電泳圖譜第15頁(yè)，共40頁(yè)。出現(xiàn)在a2區(qū)域的單克隆免疫球蛋白炎癥癥狀腎病綜合征出現(xiàn)游離輕鏈第16頁(yè)，共40頁(yè)。出現(xiàn)在 b 區(qū)域的單克隆免疫球蛋白第17頁(yè)，共40頁(yè)。游離輕鏈病第18頁(yè)，共40頁(yè)。檢測(cè)結(jié)果闡述電泳的結(jié)果是以%的形式給出的, 但是對(duì)于臨床診斷, 結(jié)果必須要以濃度的形式給出g/LM蛋白的診斷標(biāo)準(zhǔn)IgG35g/LIgA 20g/LIgM 15g/LIgD 2.0g/LIgE 2.0g/L本-周蛋白陽(yáng)性

6、1.0g/24h 蛋白濃度出現(xiàn)異常時(shí),必須要進(jìn)行其它的補(bǔ)充檢測(cè)免疫固定電泳第19頁(yè)，共40頁(yè)。M蛋白？什么類型？為什么要做免疫固定電泳G A M kappa lambda第20頁(yè)，共40頁(yè)。 在血清蛋白電泳時(shí),檢測(cè)到異常條帶的出現(xiàn),或者是某一個(gè)條帶的蛋白出現(xiàn)異常增加 電泳結(jié)果顯示為低免疫球蛋白血癥, 或者免疫球蛋白定量結(jié)果顯示可能是游離輕鏈病 尿蛋白檢測(cè)結(jié)果異常(檢測(cè)到單克隆游離輕鏈),查看患者是否做過(guò)血清蛋白電泳,如果有必要需要進(jìn)行血清的免疫固定電泳 什么情況下必須要進(jìn)行免疫固定電泳檢測(cè)?第21頁(yè)，共40頁(yè)。 免疫固定電泳一種電泳加沉淀反應(yīng)技術(shù)?？捎糜诟鞣N蛋白質(zhì)的鑒定。將血清直接加于電泳后蛋

7、白質(zhì)區(qū)帶表面， 抗原與對(duì)應(yīng)抗體直接發(fā)生沉淀反應(yīng)，形成的復(fù)合物嵌于固相支持物中。第22頁(yè)，共40頁(yè)。 血清免疫固定電泳ELP 泳道: 固定液G 泳道： 抗 IgG 重鏈抗血清A 泳道： 抗 IgA 重鏈抗血清M 泳道： 抗 IgM 重鏈抗血清K 泳道： 抗 輕鏈抗血清L 泳道： 抗 輕鏈抗血清儀器： Sebia 瓊脂糖凝膠電泳儀 試劑：免疫固定電泳試劑靈敏度：125mg/L第23頁(yè)，共40頁(yè)。正常血清第24頁(yè)，共40頁(yè)。確認(rèn)IgM 型M蛋白血清蛋白免疫固定電泳應(yīng)用舉例 （1）IF在區(qū) 發(fā)現(xiàn)疑似M蛋白 第25頁(yè)，共40頁(yè)。確認(rèn)IgM + IgM 型 雙克隆M蛋白在區(qū)發(fā)現(xiàn)疑似雙克隆M蛋白IF血清蛋白

8、免疫固定電泳應(yīng)用舉例 （2）第26頁(yè)，共40頁(yè)。IgG Lambda型M蛋白單克隆M蛋白出現(xiàn)在Alpha2-Beta區(qū)帶 血清蛋白免疫固定電泳應(yīng)用舉例 （3）第27頁(yè)，共40頁(yè)。* 纖維蛋白原，嚴(yán)格避免血漿標(biāo)本血清蛋白免疫固定電泳應(yīng)用舉例 （4）第28頁(yè)，共40頁(yè)。寡克隆免疫球蛋白電泳圖譜多條(2)窄的條帶，通常比較微弱。由于個(gè)別免疫球蛋白克隆增生。 Ig G型寡克隆電泳圖譜IF血清蛋白免疫固定電泳應(yīng)用 特殊情況第29頁(yè)，共40頁(yè)。寡克隆條帶在以下情況時(shí)常會(huì)出現(xiàn) :治療引起的免疫缺陷骨髓或者器官移植*自體免疫疾病風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 干燥綜合癥紅斑狼瘡*感染引起的 免疫缺陷病毒: HIV,病毒性肝炎,

9、 EBV, CMV 細(xì)菌和寄生蟲感染: 腦膜炎, 腦炎第30頁(yè)，共40頁(yè)。輕鏈病血清蛋白免疫固定電泳特殊病例免疫固定結(jié)果顯示為單獨(dú)的 l 成分第31頁(yè)，共40頁(yè)。 免疫固定電泳對(duì)骨髓瘤進(jìn)行分型，敏感性是SPEP的10倍，不能定量第32頁(yè)，共40頁(yè)。尿蛋白檢測(cè)尿常規(guī)：蛋白尿、血尿、管型尿尿蛋白：尿液中出現(xiàn)的自由輕鏈即本-周蛋白分型尿本周蛋白陽(yáng)性率 IgG-MM 50-60% IgA-MM 40%-50% IgD-MM 80% IgM-MM10%30% POEMS綜合征 陰性 MGUS可有各型MM本周蛋白陽(yáng)性率第33頁(yè)，共40頁(yè)。本周氏蛋白1844年Henry Bence Jones 在一個(gè)骨髓瘤

10、患者尿中發(fā)現(xiàn)一種具有特殊凝溶性質(zhì)的蛋白4060發(fā)生沉淀，加熱煮沸時(shí)溶解，冷卻后又沉淀輕鏈二聚體大多數(shù)骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白第34頁(yè)，共40頁(yè)。漿細(xì)胞增生癥影響血液中出現(xiàn)游離輕鏈尿液中出現(xiàn)起因結(jié)果骨髓瘤巨球蛋白血癥CLL慢性白血病MGUS.腎小管損傷淀粉樣病變輕鏈沉淀病本周氏蛋白第35頁(yè)，共40頁(yè)。正常免疫球蛋白的合成 18分鐘10分鐘漿細(xì)胞一條重鏈一條輕鏈組合一分子免疫球蛋白過(guò)剩輕鏈腎小球?yàn)V過(guò)10%在腎小管分解代謝80%重吸收10%隨尿排出第36頁(yè)，共40頁(yè)。異常免疫球蛋白的合成 18分鐘10分鐘惡變的漿細(xì)胞一種重鏈一種輕鏈組合單克隆免疫球蛋白大量過(guò)剩輕鏈腎小球?yàn)V過(guò)本周氏蛋白尿腎毒性、異常沉積第37頁(yè)，共40頁(yè)。本周氏蛋白陽(yáng)性患者多表現(xiàn)為腎臟損害極易誤診為慢性腎炎輕鏈有3種形式出現(xiàn)在血清或尿中正常的輕鏈過(guò)剩 慢性肝病、紅斑狼瘡等多克隆增殖性疾病伴隨輕鏈單一輕鏈第38頁(yè)，共40頁(yè)。重鏈參考泳道復(fù)合輕鏈游離輕鏈第39頁(yè)，共40頁(yè)。1.是一種檢測(cè)體內(nèi)是否存在克隆性漿細(xì)胞的高