腦脊液常規(guī)操作規(guī)程

1、.檢驗目的指導腦脊液（CSF常規(guī)測定.方法原理腦脊液是存在于腦室及蛛網(wǎng)膜下腔中的無色透明液體。由于脈絡叢上皮細胞對血漿中各種物質的選擇性分泌和超濾作用，血漿中各種成分對血腦屏障的通透性各有不同。其中最易通過血腦屏障的是氯、鈉、鎂離子及乙醇；其次為清蛋白、葡萄糖、鈣離子、乳酸、氨基酸、尿素和肌酊；纖維蛋白原、補體、抗體、某些藥物、膽紅素、膽固醇則極難或不能通過。中樞神經(jīng)系統(tǒng)任何部位發(fā)生器質性病變時，如感染、炎 癥、腫瘤、外傷、水腫和 阻塞等都可以引起腦脊液成分的改變。通過對腦脊液理學檢查，顯微鏡檢查、化學和免疫學檢查及腦脊液病原學檢查，可對疾病的診斷、治 療和預后判斷提供依據(jù)。腦脊液（CSF常規(guī)

2、測定內容包括：顏色、性狀、有核細胞計數(shù)、紅細胞計數(shù)、潘氏試驗、細菌潘氏（pan dys ）試驗：CSF中的球蛋白與苯酚結合，形成不溶性的蛋白鹽而產(chǎn)生白色混濁或沉淀.方法性能參數(shù)（如線性、檢出限、測量區(qū)間、不確定度、準確性、精密度、靈敏度和特1顏色（COLOR）6中性粒細胞（NE）2透明度（clearity）7淋巴細胞（LY）3凝固性(coagulability )8單核細胞（MO4腦脊液有核細胞計數(shù)（CS Ml ipi 9潘氏試驗（pandys test ）5NUCL ）腦脊液紅細胞計數(shù)（CSF-RBC ）. 標本類型標本類型：新鮮CSF標本拒收條件：拒收延遲室溫 2h、冷藏6h未送達標本。標

3、本保存與穩(wěn)定性：一般室溫1h內完成檢驗，久置可致細胞破壞，影響細胞計數(shù)及分類檢查.要求的容器、防腐劑或添加物、儀器、試劑或分析系統(tǒng)標本容器：BD無促凝成分紅頭管或潔凈干燥帶蓋玻璃管試劑試劑組分：生理鹽水0.9%Nacl 溶液白細胞稀釋液1%冰乙酸（1ml分析純冰醛酸+蒸儲水至100ml）劉氏快速瑞氏染色液A液：曙紅、甲醇B液：亞甲藍潘氏試劑10%苯酚溶液（純苯酚10ml+蒸儲水至100ml）5.2.2試劑存儲和有效期試劑名稱存儲條件有效期開瓶有效期位置生理鹽水室溫1年1年存貨柜/血常規(guī)室操作臺冰乙酸室溫2年1年藥品柜1匯酸冷藏1年1年試劑冰箱10%苯酚溶液室溫1年1年藥品柜劉氏快速瑞氏染色液室

4、溫2年6個月藥品柜/染色操作臺儀器：OLYMPUS學顯微鏡，血細胞計數(shù)板.校準程序（計量學溯源性）不適用.質量控制，控制品使用水平和頻率，允許限的糾正措施不適用.程序步驟一般性狀檢查：輕輕混勻 CSF觀察量、顏色、有無凝塊和透明度（一般細胞數(shù) 300/ p l個時或蛋白增加可產(chǎn)生混濁），并記錄。顯微鏡檢查細胞計數(shù)（無凝塊標本）（1）清或微混標本：a）混勻后直接沖入計數(shù)池，計數(shù)四角四大方格內細胞總數(shù)（包括 RBC, NUCL ）。b）用白細胞稀釋液作1:1稀釋，計數(shù)有核細胞數(shù)c） 紅細胞數(shù)二細胞總數(shù)-有核細胞數(shù)（當白細胞數(shù)30個/口 l時，在白細胞計數(shù)池中直接分類至少 50個白細胞）（2）混濁及

5、以上標本：外觀稀釋樣本量稀釋液/溶解劑粉色/輕度混濁1:2020 P l380 P l紅色/混濁1:5010 P l490 P l帶血量極高/極度混濁1:10010 P l990 P la）稀釋標本：于清潔試管中按上表進行稀釋，用以計數(shù)細胞總數(shù)；b）溶解RBC :于清潔試管中按上表進行稀釋，用以計數(shù)有核細胞數(shù)；c）沖池；計數(shù)d）紅細胞數(shù)二細胞總數(shù)-有核細胞數(shù)有凝塊或粘稠標本：（1）用吸管旋轉并擠壓凝塊，擠出里面的液體及細胞。（2） 2000rpmX5min離心，分離上清液和沉渣。（3）混勻沉渣，涂片，用高倍鏡觀察 NUCL、RBC。（4 ）報告每高倍鏡視野的紅細胞和有核細胞數(shù)。離心獲取沉渣和上

6、清液：將完成計數(shù)的CSF離心，2000rpmX5min離心,吸出上清液于另一試管，并在試管上編號。瑞氏染色：當NUCL10 6/P l時進行操作。將沉渣混勻涂片，厚薄根據(jù)有核細 胞數(shù)而定， 血性標本可考慮推片。待干后，瑞氏染色進行分類（分 100個NUCL;如見有不能分類細胞或 懷疑有惡性細胞時，應請示上級主管，由有經(jīng)驗的上級主管進行分析，并在報告時另行描述報告，如腦膜白血病或腫瘤細胞等。8.3潘氏試驗試驗操作：取小試管一支，加入 10%勺石碳酸水溶液約5ml,用一次性吸管加一滴CSF上清液立即在黑色背景燈照下觀察結果。8.3.2結果判定：陰性：清晰透明弱陽性(土)：微呈白霧狀，在黑色背景下才

7、能看到。陽性(+):灰白色云霧狀。(2+):白色渾濁。(3+):白色濃絮狀沉淀(4+):白色凝塊。.計算結果原理顏色紅色：常見于穿刺損傷或出血性病變。為區(qū)別蛛網(wǎng)膜下腔出血和穿刺損傷應注意：離心沉淀后：如上層液體呈黃色，隱血試驗陽性，多為蛛網(wǎng)膜下腔出血，且出血時間已經(jīng)超過4小時。如上層液體澄清無色，紅細胞均沉管底，多為穿刺出血或因病變所致的新鮮出血。(2)紅細胞皺縮，不僅見于陳舊性出血，在穿刺損傷引起出血時也可看至嘰因腦脊液滲透壓較血漿高所致。黃色：可因陳舊性蛛網(wǎng)膜下腔或腦室出血、椎管梗阻、化膿性腦膜炎、結核性腦膜炎、重癥如核黃疸等引起。白色或灰白色：多因白細胞增加所致，常見于化膿性腦膜炎。褐色

8、或黑色：常見于腦膜黑色素瘤。綠色：可見于綠膿假單胞菌、肺炎鏈球菌、甲型鏈球菌引起的腦膜炎、高膽紅 素血癥和膿性腦脊液。透明度：腦脊液混濁程度與細胞數(shù)量有關，腦脊液中細胞數(shù)超過300X10/L時，可出現(xiàn)混濁。蛋白質含量增加或含大量微生物也可產(chǎn)生混濁。凝固性：結核性腦膜炎靜置12-24小時后，標本表面有纖細的網(wǎng)膜形成。蛛網(wǎng)膜下腔梗阻時，可產(chǎn)生黃色膠凍狀。潘氏試驗：有腦組織和腦脊髓膜疾患時常成陽性反應如化膿性腦脊髓膜炎、梅毒性中 樞神經(jīng)系統(tǒng) 疾病、脊髓灰質炎、流行性腦炎等。腦出血時多呈陽性反應，如外傷性血液混入腦脊液中，亦呈陽性反應。細胞分類：中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變的CSF,細胞可增多，其增多的程度及細胞

9、的種類與病變的 性質有 關。中樞神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染、結核性或霉菌性腦脊髓膜炎時，細胞數(shù)可中度增加，常以淋巴細胞為主。細菌感染時（化膿性腦脊髓膜炎），細胞數(shù)顯著增加，以中性粒細胞為主。寄生蟲病時，可見較多的嗜酸性粒細胞。腦室或蛛網(wǎng)膜下腔出血時，腦脊液內可見多數(shù)紅細胞。.生物參考區(qū)間顏色（COLOR）無色透明度(clearity )透明凝固性(coagulability )無凝塊潘氏試驗（pandystest ）陰性OR弱陽性有核細胞計數(shù)（CSNUCL）成人(0-8 ) X106/L中性粒細胞（NE）成人（0-6%）兒童(0-15) X106/L新生兒（0-8%）新生兒（0-30）淋巴細胞（LY）X106/L成人(40-80%單核細胞（MO成人(15-45% )新生兒（5-35%）新生兒（50-90% ）紅細胞計數(shù)（CS -RBC90X10/L（正常腦脊液中白細胞主要為淋