臨床免疫學思考題

1、抗原抗體反應的原理、特點、種類以及主要影響因素原理：1.Ag、Ab能特異性結(jié)合(內(nèi)因)：Ag、Ab能特異性結(jié)合，是由于Ag表位(抗原決 定簇)和Ab V區(qū)之間的特異性結(jié)合，二者在空間結(jié)構(gòu)上是嚴格互補的。Ag、Ab結(jié)合力(外因)：靜電引力、范德華力、氫鍵以及疏水作用力特點：特異性、比例性、可逆性、階段性種類：沉淀反應、凝集反應、補體參與的溶血反應/補體結(jié)合試驗、中和試驗、免疫標記技 術(shù)。影響因素：1.自身因素：(1) Ag:與Ag的理化性質(zhì)、抗原表位的數(shù)目及種類有關(guān)；(2) Ab:與Ab的來源有關(guān)：是R型抗體或H 型抗體；與Ab的特異性、親合性、濃度有關(guān)。環(huán)境因素：(1)電解質(zhì)：一般實驗室所用電

2、解質(zhì)都是生理鹽水(0.9% NaCl),濃 度不能過高。濃度過高，會使Ab蛋白質(zhì)優(yōu)先沉淀而出現(xiàn)鹽析現(xiàn)象。PH： 一般為PH 6-9。當PH 觀察結(jié)果間接法測抗體包被已知Ag+待測標本（測Ab?） 反應一段時間后，洗加酶標抗抗體 （酶標羊抗人IgG） 洗滌加底物加終止液，觀察結(jié)果。影響因素（一）固相載體常用固相載體材料：聚苯乙烯。其特點為吸附Ag或Ab的能力強，一但吸附后，不 能被洗脫。固相載體：酶標板（微量反應板，12X8；可分軟、硬板一次性使用，不可回收（二）抗原、抗體Ag：需純化Ab：需效價高、親和力強、純化試驗條件包被(coating)： 一 般用 pH 9.6 CB(carbonate

3、 buffer)， 0.05M,有利于蛋白質(zhì)吸附包被濃度：0.1100口g/ml，一般常用 10 口g/ml包被時間、溫度：4 C過夜或37 C 1-3h包被量：100ul封閉(blocking)：用1%5%牛血清白蛋白或5%20%小牛血清或脫脂牛奶緩沖液浸泡12h抗原抗體反應的條件微堿性有利于抗原抗體結(jié)合，故用pH 7.4 PBS(phosphate buffer saline)洗滌去污劑有利于AgAb形成，洗液中加0.05% Tween-20Ag、Ab 反應時間、溫度： 一般 37C、3040min洗滌采用PH7.2-7.4PBS洗滌，規(guī)一化，每次浸泡12min，拍干，共洗滌34次酶促反應

4、條件溫度 37C10min5.5底物量一致5.排除干擾：多設(shè)對照時間pH15. ELISA試驗應設(shè)哪些對照，為什么？ELISA試驗應設(shè)對照應設(shè)對照操作應得結(jié)果陽性對照同標本一樣顏色深陰性對照同標本一樣顏色淺g無色酶結(jié)合物對照加酶步加入無色底物對照加底物步加入無色16.判斷 ELISA試驗結(jié)果的方法。無色肉眼判定：與陽性、陰性對照顏色比較：若待檢孔顯色淺于陰性對照則判定為陰性；若待檢孔顯色深于或等于陽性對照孔則判定為陽性；若待檢孔顯色介于陰性對照孔和陽性對照孔之間則判定為弱陽性。酶標光度儀檢測A492值(吸光率)：比色法與陽性、陰性對照測定值比較P/N比值：大于2.0為陽性，小于2.0為陰性P:

5、 positive (待測吸光度值)N: negative免疫血清制備的主要程序。 抗血清（免疫血清）：含有某種抗體的血清。它是將抗原按一定的程序免疫動物，一定時間 后，采集動物血液，經(jīng)分離得到。（1）動物的選擇（2）抗原的條件（3）佐劑的應用（4）免疫方法試血和放血（6）鑒定和保存佐劑概念、作用機理、福氏不完全/完全佐劑的組成。佐劑（adjuvant）:同Ag 一起或預先注入機體，能增強機體對該Ag的免疫應答或改變免疫 應答類型的物質(zhì)。作用機理：增加Ag的免疫原性，從而提高抗血清的效價福氏不完全佐劑（Freund IA）：組成：羊毛脂+石臘油，二者比例為4： 1福氏完全佐劑（FCA）：組成：

6、羊毛脂+石臘油+卡介苗分離提純免疫球蛋白有哪些方法，其原理是什么？鹽析法在不同濃度的中性鹽中蛋白質(zhì)會脫水，降低帶電電勢，由親水性變?yōu)槭杷?，分子間相互凝 聚而沉淀（鹽析作用）。不同蛋白質(zhì)鹽析所需中性鹽的濃度不同，故可分離不同蛋白質(zhì)。離子交換層析法利用不同的蛋白質(zhì)在緩沖溶液中所帶電荷不同，與某一載體上的具有相反電荷的離子基團進 行吸附，然后進行解脫，達到純化蛋白質(zhì)目的。凝膠過濾法凝膠顆粒是網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)，當分子大小不同的混合物通過凝膠柱時，分子大的先下來，分子小 的則嵌入凝膠顆粒的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中后下來，從而將分子大小不同的物質(zhì)分離，即為分子篩的作 用。親和層析法利用抗原抗體的結(jié)合具有特異性、可逆性，將純

7、化抗原先交聯(lián)到載體上，制成親和層析柱， 當Ab （Ig）通過時，與抗原在柱上特異性結(jié)合，Ab中雜質(zhì)流出。然后通過改變緩沖液pH、 離子強度，使Ab解脫下來。人體免疫功能包括哪些組成部分?數(shù)量B細胞數(shù)量T細胞非特異免 疫功能特異性免 疫功能體液中殺菌物質(zhì)補體、溶菌酶吞噬細胞大、小吞噬細胞（數(shù)量、功能）.i細胞免疫（?功能 ，體液免疫功能實驗室中檢測人細胞免疫和體液免疫最常用哪些試驗，這些試驗的原理如何？正常值應 為多少？T細胞的計數(shù)（T細胞表面標志的檢測）（一）特異性抗原的檢測淋巴細胞表面有一些特異的CD抗原，根據(jù)不同的CD抗原可鑒定出不同的細胞群體CD抗原：淋巴細胞群（簇）分化抗原：不同群淋巴

8、細胞在分化成熟過程中，細胞表面出現(xiàn) 或消失的抗原分子正常值：CD4+/CD8+31.5（二）、T細胞特異性受體（E受體）的檢測 E花環(huán)形成試驗原理：T淋巴細胞表面含有綿羊紅細胞（SRBC）受體（CD2），當T淋巴細胞與綿羊紅細胞 相遇時，T細胞通過該受體吸附綿羊紅細胞而形成花環(huán)。Et花環(huán)形成試驗（total，總E花環(huán)）正常值：60%80%Ea花環(huán)形成試驗（active，活性E花環(huán)）正常值：20%30%T細胞功能的檢測檢測T細胞功能的試驗有：（一）T細胞增殖轉(zhuǎn)化試驗原理淋巴細胞在某些物質(zhì)刺激下，細胞增殖、分化（如細胞變大、胞漿增多、出現(xiàn)空泡） DNA合成增加（核染色質(zhì)疏松，核仁出現(xiàn)），轉(zhuǎn)化成為淋

9、巴母細胞。（二）T細胞分泌功能測定（細胞因子檢測）（三）T細胞介導的細胞毒性檢測細胞毒性T細胞（CTL）具有殺傷靶細胞的功能，它是評價機體細胞免疫水平的指標。檢測該殺傷作用的試驗稱為細胞毒試驗。細胞免疫功能體內(nèi)檢測法（體內(nèi)試驗）W型超敏反應皮試原理：W型超敏反應的本質(zhì)是細胞免疫，因此W型超敏反應為陽性，可反映機體細胞免疫 功能好。特異性抗原皮膚試驗：所用Ag: OT或PPD以O(shè)T為例：OT 1:2000 0.1ml皮內(nèi)注射，4872h觀察結(jié)果，紅腫硬結(jié)直徑大于0.5cm為陽性PHA皮膚試驗：將定量PHA注射到受試者前臂皮內(nèi)，612h后出現(xiàn)紅斑和硬結(jié)，2448h達高峰，直 徑15mm為陽性反應。

10、該法敏感性高，安全可靠。B細胞數(shù)量的檢測（一）B細胞表面識別抗原受體（BCR）（SmIg, Surface membrane Ig）的檢測l.SmIg是B細胞表面膜免疫球蛋白，存在于成熟B淋巴細胞膜上，為B細胞結(jié)構(gòu)蛋白。類型為：IgM、IgD型。正常值：15%25%二）B細胞表面抗原的檢測B細胞表面特有的CD抗原有：CD19、CD20、CD21等。用抗CD21的單抗（免疫熒光法、酶免疫組化法）檢測外周血淋巴細胞，陽性細胞為B淋 巴細胞，約占總淋巴細胞的10%15%。B細胞功能的檢測（一）血清中Ig的測定檢測人免疫球蛋白常用方法：單向瓊脂擴散實驗、免疫比濁法正常值：IgG12g/L （7.616

11、.6）IgM1.3g/L （0.42.2）IgA2.0g/L （0.73.5）（二）血型抗體效價的測定反映體內(nèi)IgM水平正常6月嬰兒抗A 1 : 8,或抗B 1 : 4;1歲后抗A1:16，或抗B 1 : 8如3歲以上抗A或抗B效價仍 1 : 4，表明IgM缺乏，提示先天性體液免疫功能缺陷。（三）抗原刺激機體后抗體應答反應（體內(nèi)試驗）將抗原注射到體內(nèi)，一段時間后檢測相應抗體效價，如抗體效價低，說明機體體液免疫 功能差補體的定義、組成及性質(zhì)（一）補體的定義及性質(zhì)：complement:補體是存在于人和動物血清中的一組經(jīng)激活后具有酶活性的球蛋白， 一般情況下處于未激活狀態(tài)。補體的特性：穩(wěn)定性差，各

12、種理化因素都可使之失活：如酸、堿、紫外線照射、劇 烈震蕩等約90%的補體成分由肝細胞合成，少數(shù)由巨噬細胞、腸上皮細胞、脾細胞等產(chǎn)生補體成分均為糖蛋白，大多為8球蛋白，少數(shù)為a或Y球蛋白。實驗室滅活補體的條件為：56C、30；室溫下2天補體也可自然失活；由于補體的穩(wěn)定性差，容易失活，因此作補體的檢測必須用新鮮血清（二）補體的組成：由三部分組成1,補體的固有成分：C1-C9，其中C1又包括C1q、C1r、C1s，共9種成分11種蛋白分子。其中C9的分子量最小、C3含量最高；2.補體的調(diào)節(jié)蛋白：如C4調(diào)節(jié)蛋白、C1抑制物、S蛋白等；3.補體受體；如C1qR、C3aR等；CH50實驗的原理、正常值及意

13、義總補體活性檢測原理：組成和功能完整的補體系統(tǒng)能使致敏羊紅細胞發(fā)生溶血；羊紅細胞的溶血程度與補體的活性成正比；整個曲線呈倒“S型，即隨著補體量增加， 溶血程度也增加 在50%溶血附近(30%70%之間)，稍微改變 補體量，溶血程度變化明顯，因此以 50%判定溶血終點較100%更為敏感，所以該試驗稱為50%溶血試驗(CH50)?？傃a體活性參考范圍：50100U/ml補體結(jié)合實驗的原理、結(jié)果判斷及評價補體結(jié)合試驗(CFT)原理：補體可與任何一組AgAb復合物結(jié)合；一旦與某一 AgAb復合物結(jié)合后，便不再與另一復合物結(jié)合。結(jié)果判斷：不溶血為陽性，即待測物中有相應的Ab或Ag；溶血為陰性，即待測物中無

14、相應的Ab或Ag.優(yōu)點：該試驗既可測Ag、又可測Ab；Ag既可以是顆粒性Ag、也可是可溶性Ag、甚至可以是塊狀物，因此檢測Ag的范 圍廣；可以用于病毒、立克次氏體、細菌等多種病原體的檢測(實際上是測Ag)；比較敏感(0.05p g/ml)、特異；結(jié)果判斷明顯：通過有無溶血來觀察，無需特殊儀器檢測。缺點：參與反應的物質(zhì)多，影響因素也多；(反應體系中有Ag、Ab、C、羊紅細胞、溶血 素)在正式試驗前需要找出幾種物質(zhì)間最恰當?shù)谋壤?，比較復雜。25 I、W型超敏反應皮試的原理I型超敏反應皮試-當變應原再次進入致敏者皮膚，與吸附在肥大細胞或/和嗜堿性粒細胞上的特異IgE 高變區(qū)結(jié)合，導致肥大細胞或嗜堿性

15、粒細胞脫顆粒，釋放生物活性介質(zhì)：如組胺、 白三烯、激肽等。-在2030分鐘內(nèi)局部皮膚出現(xiàn)紅暈、紅斑、風團以及搔癢感，數(shù)小時后消失。-出現(xiàn)此現(xiàn)象者判斷為皮試陽性，即對該變應原過敏；未出現(xiàn)紅暈、紅斑、風團者為 陰性，即對該變應原不過敏。W型超敏反應皮試用皮內(nèi)注射、皮膚斑貼等方法使變應原進入已致敏機體，體內(nèi)致敏的CD4+Th1再次遇 到相應抗原后，釋放出大量細胞因子，如IL-2、IFN-Y、TNF、IL-3、GM-CSF,活化巨噬細胞及NK，增強吞噬細胞作用；吸引WBC到達Ag所在部位，促進吞噬；促進T細胞增生和分泌細胞因子，加重局部炎癥反應，最后造成局部以單核細胞和淋 巴細胞浸潤為主的炎癥反應。4

16、8-72小時后局部出現(xiàn)紅腫、硬結(jié)或水泡，以此來判斷變應原是否引起機體W型超敏反應或了解機體的細胞免疫功能。比較I、W型超敏反應皮試（抗原、時間、結(jié)果、意義）免疫復合物的含義及免疫復合物病的致病原因免疫復合物含義：（一）含義：immune complex,IC 它主要指AgAb復合物及AgAbC復合物兩種。致病機理：中等大小的IC沉積在體內(nèi)，通過激活補體、激活血小板、中性粒細胞作用而致 病。免疫復合物檢測使用的標準品、出現(xiàn)的問題及WHO推薦的檢測方法目前普遍應用的標準品是HAHG熱聚合人IgG問題：（1）到目前為止，所有檢測IC的試驗，還沒有另人滿意的標準化措施；（2）在體外制備的IC還很不穩(wěn)定

17、，因此用人工合成的復合物作為定量標準不適宜。 WHO推薦的檢測方法：C1q結(jié)合試驗、-膠固素試驗、類風濕因子（RF）試驗、Raji細胞試驗AID的基本特征及常見的AID有哪些？基本特征：誘因可有可無。有一定的遺傳傾向。女性患者多見，發(fā)病率隨年齡增長而增加?；颊哐逯锌蓹z出高效價的自身抗體和（或）自身致敏T淋巴細胞。一些自身抗體 在自身免疫病中呈現(xiàn)交叉重疊現(xiàn)象:即在同一種自身免疫病患者體內(nèi)可檢測到多種 自身抗體，而不同的自身免疫病也可存在同一種自身抗體。IgG、IgA、IgM升高，尤其IgG升高明顯。病損局部可發(fā)現(xiàn)有淋巴細胞、漿細胞、嗜酸性粒細胞浸潤及免疫復合物沉積。免疫抑制劑治療可取得一定療效

18、。常見的AID：系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關(guān)節(jié)、自身免疫性溶血性貧、重癥肌無力ANA的定義及ANAs的組成抗核抗體（antinuclear antibody, ANA）：大多數(shù)屬IgG類，也有IgM和IgA。無器官特異性和種屬特異性，主要存在于血清 中，也可存在滑膜液、胸水和尿液中。ANA原指抗細胞核抗原成分的自身抗體的總稱。ANA廣義地指抗細胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總和。ANA所針對的靶抗原由 細胞核擴展到整個細胞，包括細胞核、細胞漿、細胞骨架及細胞周期等?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有幾十種具不同臨床意義的ANA，形成抗核抗體譜（antinuclear antibodies, ANAs）ANAs的組成抗DN

19、A抗體：抗*QN4、抗ssDNA抗體抗組蛋白抗體（AHA）： 抗 H1、H2A、H2B、H3、H4 等抗ENA抗體：抗Sm、抗核糖核蛋白RNP）、抗SSM、抗SS-B等-抗非組蛋白抗體：抗Scl-70、抗Jo-1、抗Ku、抗增殖細胞核抗原（PCNA）、抗PL-7、 抗PL-12、抗著絲點抗體等抗核仁抗體：抗PM-Scl、抗NOR-90、抗U3nRNA-抗細胞其它成分抗體：抗高爾基體、抗中心體、抗線粒體抗肌動蛋點抗核層蛋 白等各種AID檢測時的代表性自身抗體有哪些？1、抗dsDNA抗體對SLE有較高特異性，70-90%活動性SLE患者該抗體陽性，是SLE 的診斷標準之一。2、抗組蛋白抗體（ant

20、i-histonic antibody, AHA）在藥物性狼瘡患者中陽性率達90-100%， 而SLE病人陽性率僅有20-35%，類風濕性關(guān)節(jié)炎病人為36%。3、抗可提取性核抗原（extractable nuclear antigen， ENA）抗體1）抗Sm抗體：抗Sm抗體是SLE的特異性標志，疾病特異度達99%，為提高 SLE的診斷準確率，可將抗Sm抗體和抗dsDNA抗體同時檢測。2）抗SS-A、SS-B抗體：抗SS-A和抗SS-B抗體并存是干燥綜合癥的特異標志。3）抗核糖核蛋白抗體 核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP），又稱u1RNP?？?u1RNP抗體在混合性結(jié)締組

21、織?。∕CTD）陽性率為95%以上，是MCTD的標志 抗體。4、抗Jo-1抗體對肌炎和間質(zhì)性肺纖維化有高度特異性，抗體的效價與疾病的活動性相關(guān)。5、原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）時AMA （抗線粒體抗體）陽性率可達90%以上。AMA是 PBC的血清學指標。6、抗Scl-70是進行性全身性硬化癥（PSS）的標志抗體，陽性率為50-64%。在原發(fā)性免疫缺陷病中哪一種發(fā)生最多？原發(fā)性B細胞免疫缺陷?。ㄕ糚IID的5070%），如X連鎖無丙球蛋白血癥懷疑體液免疫缺陷應作哪些過篩試驗和確診試驗？過篩試驗（1）血清蛋白電泳 丙球定量：丙球應占總蛋白的15%，大于9.0g/L為正常；若小于 2.5g/L，應考

22、慮ID（2）同種血型凝集素測定-ABO血型抗體檢測（反映IgM水平）正常：抗A大于1： 8，抗B大于1： 4，若3歲以上，抗A或抗B仍小于1： 4，應考慮ID（3）血清抗鏈球菌溶血素抗體的測定（抗0）的測定一反應IgG水平3歲以上應大于100單位確診試驗（1）血清Ig（IgG、M、A）測定：采用免疫比濁法：若IgG小于2.5g/L、IgA缺乏、IgM 小于0.2g/L，可確診為無丙球蛋白血癥（2）特異性Ab產(chǎn)生能力測定：三聯(lián)傷寒菌苗試驗：正常人注射0.25ml，每周1次，連續(xù)3 次，抗H應為1： 160，若低于1： 40，表示體液免疫功能差B細胞計數(shù)：SmIg檢測免疫熒光法，正常15%左右T

23、細胞亞群測定：CD4/CD8(Th/Ts)正常(1 3.5)/1，若小于0.5,可確診為AIDS懷疑細胞免疫缺陷應作哪些過篩試驗和確診試驗？過篩試驗淋巴細胞絕對值測定：正常大于2.5X109/L,若 小于1.5X109/L為缺乏遲發(fā)型超敏反應皮膚試驗：OT皮試等胸腺X線檢查：觀察胸骨是否發(fā)育不全確診試驗T淋巴細胞計數(shù)及其亞群檢測：E花環(huán)實驗：正常Et 6070%免疫熒光法：CD3+TLC、CD4+TLC、CD8+ TLC 計數(shù)(3) T細胞功能體外試驗：PHA刺激的淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗：正常60 70%35.HLA-I、II類分子的結(jié)構(gòu)、分布及意義。結(jié)構(gòu)分布意義HLA-I 類由一條a鏈和一條0鏈組

24、成，a 鏈的N端胞外區(qū)分為a1、a2、a3 三個結(jié)構(gòu)區(qū)，其中a1、a2構(gòu)成抗 原結(jié)合槽，與處理后的抗原肽結(jié) 合形成MHC-抗原肽復合體所有有核細胞 膜上識別和提呈內(nèi)源性抗原肽對CTL的識別起限制性作 用TCR抗原肽；TCR MHC-IHLA-II 類由一條a鏈和一條0鏈組成，兩 條肽鏈的胞外區(qū)分別有a1、a2和 01、02兩個功能區(qū)，由a1與01 共同形成抗原結(jié)合槽抗原提呈細胞 (如B細胞、巨 噬細胞、樹突狀 細胞)及活化的 T細胞等識別和提呈外源性抗原肽對Th的識別起限制性作 用TCR 抗原肽 ；TCRMHC-II36 .移植排斥反應的類型及產(chǎn)生的原因和避免方法。超急性排斥反應原因：受者體內(nèi)

25、預存有抗供體細胞的抗體(針對HLA),抗體與供體細胞的HLA Ag結(jié)合， 激活補體，細胞破壞；補體活化產(chǎn)物使血小板凝聚，釋放凝血因子XII,產(chǎn)生血管內(nèi)凝血 避免方法：移植前取受體血清與供體細胞進行細胞毒試CDC試驗，檢測受者血清中是否預 存有抗供體細胞的抗體。急性排斥反應原因：供、受者HLA Ag型別不完全一致早期以細胞免疫為主(CTL直接殺傷、活化的Th1 介導的遲發(fā)型超敏反應)晚期體液免疫為主(抗體介導的細胞毒作用，NK) 避免方法：盡可能選擇HLA Ag型別一致的供體慢性排斥反應機理：供、受者HLA Ag型別不完全一致體液免疫為主(W型超敏反應引起的免疫損 傷；特異性Ab活化補體及通過A

26、DCC作用破壞血管內(nèi)皮細胞；急性排斥反應引起的退行性病變等）避免方法：盡可能選擇HLA Ag型別一致的供體移植物抗宿主反應的概念及產(chǎn)生原因。在骨髓移植時，由于移植的骨髓也含有豐富的免疫細胞，且受體處于嚴重的免疫抑制狀態(tài)， 因而對供體骨髓表現(xiàn)免疫無能，以使供者骨髓中的免疫細胞不僅得以生長，而且以受者細胞 衛(wèi)康元產(chǎn)生免疫應答，引起攻擊者的移植物抗宿主反應。產(chǎn)生原因：（1）供、受者HLA Ag型別不完全一致（2）移植物中含有大量的免疫活性細胞，尤其是TLC（3）受體免疫活性細胞處于反應無能狀態(tài)移植前選擇供體應做哪些檢測？（一）交叉配合試驗（P345）預存抗體檢測一檢測測受體血清中有無抗供體細胞的抗體（1）補體依賴的細胞毒試驗（complement dependen