Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、標(biāo)題Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1.目的描述Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。2.適用范圍化驗(yàn)室3.責(zé)任者化驗(yàn)員應(yīng)嚴(yán)格遵照該操作規(guī)程,QC主管負(fù)責(zé)監(jiān)督本規(guī)程的實(shí)施。4.定義HPLCHighPerformanceLiquidChromatography,高效液相色譜儀。5.安全注意事項(xiàng)有機(jī)溶媒有害健康，各溶劑瓶口應(yīng)封嚴(yán)。注意檢查廢液桶中廢液應(yīng)避光，防止廢液桶滿外溢。6.規(guī)程WatersHPLC的組成：貯液器輸液泵自動(dòng)進(jìn)樣器分離柱（柱溫箱）紫外檢測(cè)器控制及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（Millennium32化學(xué)工作站）。HPLC系統(tǒng)的打開及關(guān)閉順序6.2.1打開順序標(biāo)題Waters高效液相色譜儀

2、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程對(duì)于分體式：請(qǐng)按泵、進(jìn)樣器、柱溫箱、檢測(cè)器的順序打開開關(guān)，待各部分分別顯示初始化完畢后，最后打開Millennium32化學(xué)工作站。泵與色譜工作站的連接：對(duì)于510泵，因?yàn)榇吮门c色譜工作站是單向聯(lián)系，如要使泵在Remote狀態(tài)下由工作站控制，首先要在泵的鍵盤上按Menu鍵，待顯示屏切換至Mode狀態(tài)下，其狀態(tài)是Loca，按Edit/Enter鍵，在Local的L前有閃動(dòng)的光標(biāo)顯示，按人鍵，Local轉(zhuǎn)換成Rem，再按Edit/Enter鍵，此命令已輸入進(jìn)去,最后按Stop/Run鍵，使泵處于Run狀態(tài)這時(shí)泵和工作站的連接即告成功。泵的任何動(dòng)作都可由工作站來控制。還應(yīng)注意這一步工作在

3、每次開機(jī)時(shí)都要進(jìn)行。對(duì)于Alliance2690系統(tǒng)：先打開Alliance2690主機(jī)、檢測(cè)器電源開關(guān)，待初始化完畢后，再進(jìn)入Millennium32化學(xué)工作站。對(duì)于流動(dòng)相的要求：對(duì)于液體試劑應(yīng)盡量采用色譜純?cè)噭粚?duì)于所用到的固體試劑應(yīng)采用分析純?cè)噭?；?duì)于水，應(yīng)采用經(jīng)純水機(jī)處理過的超純水；流動(dòng)相在使用前一定要經(jīng)0.45卩m的濾膜（濾膜分為水相膜與有機(jī)相膜，確保使用正確的濾膜，參見附表）過濾、超聲真空脫氣方可使用，嚴(yán)禁含鹽的流動(dòng)相未經(jīng)過濾直接使用。應(yīng)養(yǎng)成良好操作習(xí)慣：規(guī)范操作，樹立保護(hù)HPLC整套系統(tǒng)的概念，尤其對(duì)于輸液泵、色譜柱、檢測(cè)器，在使用后應(yīng)及時(shí)沖洗，以免污染而使其壽命縮短或損壞，尤其

4、如操作者使用了含鹽的流動(dòng)相，更應(yīng)注意清洗的步驟：首先用脫過氣的純水在流速為lml/min左右沖洗3060分鐘，再用含50%以上甲醇或乙腈的水溶液以相同的流速?zèng)_洗2030分鐘左右。標(biāo)題Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程如要卸下柱子，在經(jīng)過上述沖洗過程之后，再經(jīng)純甲醇或乙腈以1ml/min的流速?zèng)_洗2030分鐘，柱子卸下后應(yīng)馬上擰緊柱堵。流速的變化應(yīng)采用階梯式遞增或遞減的方式，啟動(dòng)泵時(shí)，應(yīng)在2分鐘之內(nèi)由小流速慢慢增大到所需的流速，泵關(guān)閉時(shí)亦然（流速遞減）。切忌流速的驟變。關(guān)閉順序首先退出Millennium32化學(xué)工作站，再關(guān)閉系統(tǒng)的其他部分。Millennium32化學(xué)工作站Millenni

5、um32色譜管理系統(tǒng)是集數(shù)據(jù)采集、處理、HPLC系統(tǒng)的控制、結(jié)果的管理、報(bào)告的打印為一體的綜合系統(tǒng)。下面就著重介紹該系統(tǒng)的基本操作知識(shí)。Millennium32化學(xué)工作站的進(jìn)入打開化學(xué)工作站，系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)入ProgramManager界面，雙擊Millennium肖像，這時(shí)進(jìn)入Millennium界面，雙擊SessionManager圖標(biāo)，系統(tǒng)將自動(dòng)初始化，以使工作站和HPLC整套系統(tǒng)進(jìn)行聯(lián)接。初始化后，按系統(tǒng)要求鍵入你的UserName和Password，這時(shí)你已進(jìn)入該系統(tǒng)。Project的進(jìn)入和建立Project的進(jìn)入：在SessionManager窗口下，擊Project肖像（或從View

6、中選擇Projects）,在其中有已建好的Project，雙擊你所需的Project肖像，再進(jìn)行你想做的工作。Project的建立從File中選擇New，即顯示NewProject的畫面。標(biāo)題Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程在ProjectName中輸入你的Project名稱。在InitiallzeProject項(xiàng)目中選擇Copy中的filterandfields或Methods。在FromProject中選擇要拷貝的現(xiàn)存Project。選擇Tablespacesize。選OK，存貯并退出。當(dāng)Millennium軟件在建立一個(gè)新的Project時(shí)，在屏幕上及時(shí)顯示出完成建立新Projec

7、t的百分比。當(dāng)達(dá)到100%時(shí)，在SessionManager畫面即出現(xiàn)一個(gè)新的Project肖像。收集數(shù)據(jù)的一般過程使用Millennuium32收集數(shù)據(jù)的一般過程如下：在Project窗口內(nèi)建立收集數(shù)據(jù)所需儀器的儀器方法；建立包括此儀器方法的方法組；使用此方法組收集數(shù)據(jù)。本部分包括：建立儀器方法，建立方法組，收集樣品。建立/修改儀器方法從SessoinManager窗口，打開所需的Project。選擇Method按鈕，現(xiàn)存的方法的肖像即出現(xiàn)在屏幕上。從命令菜單中選擇File，然后選擇其中的NewInstrumentMethod，即出現(xiàn)SystemOpen對(duì)話框。在目錄中選擇收集數(shù)據(jù)需要使用的

8、色譜硬件系統(tǒng)的名稱，如：System_1。按OK，這時(shí)InstrumentMethod窗口即顯示出來。標(biāo)題Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程窗口的上部分是該系統(tǒng)的所有儀器的肖像。用鼠標(biāo)器將需要設(shè)定儀器參數(shù)的儀器部件激活，然后在儀器肖像上雙擊兩下，即出現(xiàn)InstrumentDialogBox畫面。對(duì)各個(gè)部件設(shè)置操作條件，或通過輸入新的參數(shù)來更改以前的參數(shù)。例如：定義泵參數(shù)，先雙擊SIM/PCM的肖像。填寫泵參數(shù)，按OK。當(dāng)所有參數(shù)設(shè)置完成后，按OK。即回到InstrumentMethod窗口。選File中的SaveAs存貯儀器方法文件，如有需要，起一文件名，按OK。選擇File中的Exit，

9、即回到Project窗口。新的儀器方法肖像即出現(xiàn)在此窗口下。建立方法組(MethodSet)儀器方法編好后，必須存于一方法組中，才能在QuickSetControl中調(diào)用。在Project窗口下選方法肖像。選File中的NewMethodSet，即顯示出MethodSet對(duì)話框。在此畫面的InstrumentMetho一欄，選擇已確定的儀器方法。其他項(xiàng)目可空著不填。然后選File，SaveAs。輸入方法組名后，按OK。選File，Exit。即退回到Project窗口。新設(shè)置的方法組肖像即出現(xiàn)在此窗口下。收集樣品：完成以上各步驟后，即可收集樣品。在Project窗口下選擇QuickSetCont

10、rol肖像。出現(xiàn)SystemOpen對(duì)話框。標(biāo)題Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程選擇建立儀器方法時(shí)確定的色譜硬件系統(tǒng),按OK。Control窗口。即出現(xiàn)QuickSet在此窗口下的SampleLoadingTable中用鼠標(biāo)器按第一行，這時(shí)Millennium軟件會(huì)自動(dòng)填充各項(xiàng)初始參數(shù)。通過輸入新值可更改表中的各項(xiàng)參數(shù)，表中的瓶號(hào)（對(duì)于高效液相色譜儀的進(jìn)樣表，除另有規(guī)定外，按括號(hào)法安排進(jìn)樣順序。即第一針為標(biāo)準(zhǔn)品1作為系統(tǒng)適用性共進(jìn)6針，要求RSD不大于2%,隨后為標(biāo)準(zhǔn)品2,進(jìn)樣次數(shù)為2針，然后為樣品1到樣品3，各進(jìn)2針。樣品3后為標(biāo)準(zhǔn)品1，依次類推,直到將所有樣品都安排在進(jìn)樣表中）進(jìn)樣次

11、數(shù),進(jìn)樣體積,運(yùn)行時(shí)間等項(xiàng)目對(duì)自動(dòng)進(jìn)樣器有控制作用。在MethodSetReport一列中選擇在前面剛剛建立的方法組。在運(yùn)行方式（mode）中選RunOnly。選擇進(jìn)樣方式：菜單mode下選單個(gè)樣品或樣品組進(jìn)樣。將SampleLoadingTable中第一行點(diǎn)黑。擊SetupInstrument鈕，啟動(dòng)系統(tǒng)。系統(tǒng)啟動(dòng)后可擊baselinemonitor圖標(biāo)，即可觀察基線。待基線平穩(wěn)后,擊綠燈或樣品盤肖像準(zhǔn)備進(jìn)樣。出現(xiàn)Injectorwait提示信息,隨即進(jìn)樣。在樣品測(cè)試過程中,系統(tǒng)會(huì)在QuickSet窗口下顯示瓶號(hào)和進(jìn)樣次數(shù)及運(yùn)行時(shí)間。并可在此窗口下觀察檢測(cè)器的輸出情況。屏幕上顯示的檢測(cè)器輸出

12、是自動(dòng)滿量程方式（即自動(dòng)按最大信號(hào)滿格輸出）。當(dāng)收集完色譜數(shù)據(jù)后,選擇File,Exit。退出QuickSet窗口。樣品收集完成后，Millennuiun32會(huì)自動(dòng)存貯收集的數(shù)據(jù)。標(biāo)題Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程建立數(shù)據(jù)處理的方法在Millennuium32中，完成不同的任務(wù)需編輯不同的方法，如儀器方法（收集數(shù)據(jù)），處理方法（定性定量分析），報(bào)告方法（打印實(shí)驗(yàn)報(bào)告）等。本部分包括：*重新調(diào)出色譜峰進(jìn)行觀察。*譜圖積分及確定積分表中的參數(shù)。*輸入組分表資料。*存貯數(shù)據(jù)處理方法。調(diào)閱色譜圖進(jìn)入在其中收集樣品的Project，在此窗口下選Channel肖像。在ChannelViewTabl

13、e中選擇欲進(jìn)行色譜分析的文件行并使其變黑。在Tools下選擇Review肖像，這時(shí)在ReviewData窗口下即顯示出你調(diào)入的色譜圖。選File，NewMethod。在NewMethod對(duì)話框中指定數(shù)據(jù)處理的類型，如LC，選OK。色譜圖的積分選View，IntegrationTable。在屏幕下部即出現(xiàn)IntegrationEventTable。在PeakWidth，MinimumArea，MinimumHeight方框中輸入適宜的數(shù)值。按Integration按鈕，觀察積分情況，并適當(dāng)進(jìn)行積分參數(shù)的調(diào)整。標(biāo)題Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程輸入組分資料選View，ComponentTa

14、ble。即可見到空的組分表。選Options，F(xiàn)illTableFromResult，即可自動(dòng)填充積分完畢的色譜圖的組分表。也可用手動(dòng)方式修改表中的參數(shù)。按Calibration/Quantitate后，選View，ResultTable。即可看到積分的結(jié)果。存貯數(shù)據(jù)處理方法在ReviewData窗口下，選File，SaveMethod。在ProcessingMethodSaveAs對(duì)話框的窗口下輸入數(shù)據(jù)處理方法名稱。按OK，貯存ProcessingMethod。在組分表的上方可看到新的ProcessingMethod的名稱。選File，Exit。即可退出ReviewData窗口，回到Proj

15、ect窗口。6.3.5重新觀察色譜結(jié)果進(jìn)入你所需的Project窗口。擊ResultView肖像。在ResultViewTable中選擇你想觀察的色譜數(shù)據(jù)。擊Review肖像，你所選擇的第一個(gè)色譜數(shù)據(jù)的譜圖將在ReviewData窗口下，其結(jié)果將顯示在ResultTable中的第一行。按NextCh/Inj的方框即可看到下一針進(jìn)樣的有關(guān)資料。選File，Exit。即可回到Project窗口。報(bào)告方法的編輯及試驗(yàn)報(bào)告的打印標(biāo)題Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程啟動(dòng)報(bào)告出版系統(tǒng)進(jìn)入“PROJECT”窗口。在Views下按一下方法肖像。選擇File，NewReportMethod。這時(shí)即可編輯新

16、的報(bào)告方法。在報(bào)告排版窗口中，右邊為一張模擬的白紙，左上方的列表為排版時(shí)可放置在右邊紙上的項(xiàng)目。如圖譜，積分表，樣品信息，儀器方法等，左下方為報(bào)告頭標(biāo)和腳標(biāo)（如土。選擇Individual為每個(gè)結(jié)果有一個(gè)報(bào)告，選SummaryofResultSetsAll方式為打一個(gè)集中的報(bào)告。按0K。設(shè)計(jì)報(bào)告格式按一下ChromatogramGroups肖像。在ChromatogramGroups列表中選擇Auto-scaledChromatogram。并在報(bào)告頁面上按一下，用鼠標(biāo)器將此圖形放在畫面合適的位置上。用鼠標(biāo)器將箭頭放在畫面的邊緣，當(dāng)箭頭變成雙箭頭時(shí)將圖形放大或縮小。選擇Format，Landsc

17、ape?？蓪D譜垂直放置。按一下MethodGroup肖像，從MethodGroup的列表中選擇InstrumentMethod，并在報(bào)告頁面上的合適處按一下。這時(shí)InstrumentMethod方框?qū)⒊霈F(xiàn)在報(bào)告頁面上。按一下TableGroups肖像，在TableGroups，并在報(bào)告格式上的合適位置上按一下。選擇Format，PageSize?？筛淖儓?bào)告尺寸的大小。標(biāo)題Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程選擇Customize,Header。即出現(xiàn)Header窗口。在此窗口下選擇Generalinformation肖像。在GeneralinformationField列表中按一下Date

18、。這時(shí)在FieldName的方框中即出現(xiàn)Date方框。可用鼠標(biāo)器將此方框移動(dòng)到合適的位置?？捎梦淖?，箭頭，方框等工具在Header窗口下增加你感興趣的內(nèi)容。選File，Save。輸入Header的名稱（如：My_Header，按OK，返回到Header窗口。選File，Exit。即回到ReportPublisher窗口。在Customize，F(xiàn)ooter。即出現(xiàn)Footer窗口。按一下Generalinformation肖像，在GeneralinformationField列表中按一下PageNumber的方框。將此方框放在報(bào)告頁面的注腳位置上。選File，Save。輸入Footer的名稱（如

19、：My_Footer），按OK，返回到Footer窗口。選File，Exit?；氐絉eportPublish窗口。在Footer列表中選剛編好的腳標(biāo)。存儲(chǔ)報(bào)告方法選File，Save。輸入此報(bào)告的方法名（如：My_Report），按OK,返回到ReportPublisher窗口。選File，Exit。即回到PROJECT窗口。在此窗口下即可看到My_Report報(bào)告方法的肖像。標(biāo)題Waters高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程報(bào)告格式預(yù)覽：報(bào)告格式設(shè)計(jì)好后，在打印之前，可在此預(yù)先看到打印效果，如需修改可隨時(shí)切換到報(bào)告出版窗口，邊看邊修改，直到滿意為止。在PROJECT窗口下，選Result肖像，即出現(xiàn)

20、ResultViewTable表。在此表上選擇需要報(bào)告的結(jié)果文件，使其變黑。按一下Preview肖像,即出現(xiàn)ReportMethodSelection窗口。從目錄上選擇剛才已建立好的報(bào)告方法，按OK。這時(shí)即出現(xiàn)剛才所選結(jié)果的報(bào)告。在上畫面上按NextPage或PrevPage即可看到報(bào)告的下一頁或上一頁。按方法編輯肖像即可對(duì)當(dāng)前方法進(jìn)行編輯。按打印肖像，即可將此報(bào)告打印出來。選擇File，Exit。即可退出報(bào)告畫面，回到“PROJECT”窗口。批量進(jìn)樣結(jié)果的處理及打印報(bào)告當(dāng)已有確定的處理方法后，可用此方法處理數(shù)據(jù)。在ChannelViewTable表中選擇你要的樣品行并將其按黑。在Tools下?lián)鬚rocessandReport肖像。這時(shí)即出現(xiàn)ProcessandReportOptions對(duì)話框。在處理方法一欄中選擇UseSpecifiedProsessingmethod并指定處理方法，把Print選擇框的叉扇掉。按OK。這