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1、實(shí)驗(yàn)一 細(xì)胞凝集反應(yīng)實(shí)驗(yàn)二細(xì)胞膜的滲透性 1【課前預(yù)習(xí)】1土豆凝集素的本質(zhì)及其使紅細(xì)胞凝集的原理?2在等滲溶液中細(xì)胞一定能維持正常形態(tài)嗎?3預(yù)測(cè)紅細(xì)胞在各種溶液中的溶血速度?2一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 了解細(xì)胞膜的表面結(jié)構(gòu);2了解細(xì)胞糖被的特點(diǎn)和功能,了解植物凝集素的作用3了解細(xì)胞膜的滲透性及各類物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度3二、實(shí)驗(yàn)的原理1. 細(xì)胞凝集反應(yīng)細(xì)胞膜表面的有分支狀糖外被,細(xì)胞間的聯(lián)系、細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化、免疫反應(yīng)、腫瘤的發(fā)生等都和細(xì)胞表面的分支狀糖分子有關(guān)。凝集素(lectin)是一類含糖并能與糖分子專一結(jié)合的蛋白質(zhì),它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。凝集素使細(xì)胞凝集是由于它與細(xì)胞表面的糖分子連接,
2、在細(xì)胞表面間形成“橋”的結(jié)果,加入與凝集素互補(bǔ)的糖可以抑制細(xì)胞的凝集。42. 細(xì)胞膜的滲透性在低滲液中,紅細(xì)胞很快吸水脹裂,稱為溶血。在等滲液中,由于有些溶質(zhì)會(huì)進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)、引起細(xì)胞滲透壓升高,細(xì)胞也會(huì)吸水脹裂,由于各種物質(zhì)透入細(xì)胞的速度不同,溶血的時(shí)間不同5三、實(shí)驗(yàn)用品1. 器材: 顯微鏡、天平、載玻片、滴管、離心管、燒杯、10ml移液管、試管、試管架2. 材料: 土豆塊莖3. 試劑: 鴨血紅細(xì)胞、抗凝血?jiǎng)BS、土豆塊莖、0.85生理鹽水、2雞紅細(xì)胞、PBS緩沖液、Alsever溶液、0.17M氯化鈉、0.17M氯化銨、0.17M醋酸胺、0.17M硝酸鈉、0.17M草酸銨、0.17M硫酸
3、鈉、0.17M葡萄糖、0.17M甘油、0.17M乙醇、0.17M丙酮6四、實(shí)驗(yàn)步驟7(一) 細(xì)胞凝集反應(yīng)1. 2雞血紅細(xì)胞懸液制備新鮮雞血加抗凝劑,生理鹽水洗5次,每次2000r/min,離心5min,按紅細(xì)胞壓積用生理鹽水配成2雞血紅細(xì)胞懸液。2. 土豆凝集素制備 土豆2克,加10ml PBS,浸泡2h。3. 細(xì)胞凝集反應(yīng)土豆凝集素1滴、2雞血紅細(xì)胞液1滴。載玻片上混勻,靜置20min。4. 對(duì)照PBS1滴、2雞血紅細(xì)胞液1滴。8(二)細(xì)胞膜的滲透性1. 低滲溶液試管一支:雞血紅細(xì)胞液1ml;蒸餾水10ml;結(jié)果溶血,溶液變透明。2. 等滲溶液0.17M氯化鈉、0.17M氯化銨、0.17M醋酸胺、0.17M硝酸鈉、0.17M草酸銨、0.17M硫酸鈉、0.17M葡萄糖、0.17M甘油、0.17M乙醇、0.17M丙酮9未溶血溶血10【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】1土豆凝集素能使雞紅細(xì)胞凝集,PBS對(duì)照液中紅細(xì)胞分散均勻11未凝血12凝血132細(xì)胞膜滲透性實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較和分析14【實(shí)驗(yàn)報(bào)告】1簡(jiǎn)圖表示凝集
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