DNS法測定發(fā)酵液中總糖含量

1、DNS法測定發(fā)酵液中總糖含量3,5二硝基水楊酸與還原糖共熱后被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)，還原糖的量和反應(yīng)液的顏色強(qiáng)度呈現(xiàn)比例關(guān)系，利用比色法可測知樣品的含糖量。DNS試劑的配方（3,5-二硝基水楊酸試劑）：稱取酒石酸鉀鈉18.2g，溶于50ml蒸餾水中，加熱（不超過50C）,于熱溶液中依次加入3,5-二硝基水楊酸0.63g,NaOH2.1g（先配成溶液），苯酚0.5g,無水亞硫酸鈉0.5g,攪拌至溶解完全，冷卻后用蒸餾水定容至100ml,貯于棕色瓶中,室溫保存。0.1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取100mg分析純的葡萄糖（預(yù)先在105C干燥至恒重），用少量蒸餾水溶解后定容至100ml,

2、冰箱保存?zhèn)溆谩Ｗ⒁馐马?xiàng)：在配制的過程中,如果操作不合理,會(huì)出現(xiàn)溶液變黑,或者有雞蛋花一樣的絮狀沉淀出現(xiàn)。稱取DNS（具體重量，按照你的配方來，下同），加水溶解，水浴45C；3逐步加入氫氧化鈉溶液，同時(shí)不斷攪拌，直到溶液清澈透明；（a.藥品中的氫氧化鈉要配制成溶液；直接加顆粒，可能產(chǎn)生雞蛋花；b.加入氫氧化鈉溶液時(shí),溶液的溫度會(huì)上升，所以要慢慢加，不停地?cái)嚢?，同時(shí)溶液的溫度不能超過48度；溫度高了，溶液顏色變黑。）逐步加入四水酒石酸鉀鈉、苯酚和無水亞硫酸鈉；（順序最好不要更改?。├^續(xù)45度水浴，同時(shí)補(bǔ)水，不斷攪拌，直到加入的物質(zhì)完全溶解；（一定要有耐心地?cái)嚢瑁。┩Ｖ辜訜?，冷卻至室溫，用水定容。儲

3、存在棕色瓶中，避光保存。室溫下存放7天后使用。有效期為6個(gè)月。（時(shí)間不忙的話，最好按照時(shí)間來操作，時(shí)間緊迫了，時(shí)間提前個(gè)幾天，推后幾天，也可以用的）操作方法】一、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制管號112345678數(shù)量項(xiàng)目含糖總量管號112345678數(shù)量項(xiàng)目含糖總量(mg)00.20.40.60.81.01.21.41.60.1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(ml)00.20.40.60.81.01.21.41.6蒸餾水(ml)2.01.81.61.41.21.00.80.60.4DNS試劑(ml)1.51.51.51.51.51.51.51.51.5取9支大試管，分別按下表順序加入各種試劑：均在沸水浴中加熱5min

4、立即用液動(dòng)冷水冷卻力口熱冷卻-蒸餾水(ml)光密度(d520)21.521.521.521.521.521.521.521.521.5將上述各管溶液混勻后，用72型分光光度計(jì)(520nm)進(jìn)行比色測定，用空白管溶液調(diào)零點(diǎn)，記錄光密度值。以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，光密度值為縱坐標(biāo)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。二、樣品中含糖量的測定取7支大試管，分別按下表加入各種試劑：管號空白123456數(shù)量項(xiàng)目樣品量(ml)01.01.01.01.01.01.0蒸餾水(ml)2.01.01.01.01.01.01.0DNS試劑(ml)1.51.51.51.51.51.51.5加熱均在沸水浴中加熱5min冷卻立即用液動(dòng)冷水冷卻蒸餾水(ml)21.521.521.521.521.521.521.5光密度(d520)將各管