色譜定性武漢大學(xué)

1、色譜定性分析色譜的定性分析（1）將已知物直接和未知物對照進(jìn)行定性（2）利用文獻(xiàn)的保留數(shù)據(jù)進(jìn)行定性（3）利用經(jīng)驗(yàn)規(guī)律定性（4）與化學(xué)方法結(jié)合定性（5）與其它儀器連用進(jìn)行定性2022/8/1311 根據(jù)色譜保留值進(jìn)行定性1.1 與已知物對照定性 在一定操作條件下，各組分的保留時間是一定值。2022/8/132 白酒中醇系物色譜示意圖若組分i的保留值與甲醇的保留值相同，即可判斷組分i為甲醇。2022/8/133峰高加入法將已知純樣加入待測組分后，再進(jìn)行一次分析，然后與待測組分原來的色譜圖進(jìn)行比較，若前者的色譜峰增高，則可以認(rèn)為加入的已知純樣與樣品中的某一組分為同一化合物。注意：當(dāng)進(jìn)樣量很低時，如果峰

2、不重合，峰中出現(xiàn)轉(zhuǎn)折，或者半峰寬變寬，則可以肯定試樣中不含與所加已知純物質(zhì)相同的化合物。白酒中醇系物色譜示意圖圖中組分i+甲醇的峰較上圖組分i的峰有轉(zhuǎn)折出現(xiàn)，則可判斷組分i不是甲醇。2022/8/1341.2 其他定性方法 式中A1和C1是常數(shù)，n為分子中的碳原子數(shù)（n3）。該式說明，如果知道某一同系物中兩個或更多組分的調(diào)整保留值，則可根據(jù)上式推知同系物中其它組分的調(diào)整保留值 .當(dāng)沒有待測組分的純標(biāo)準(zhǔn)樣時，可用文獻(xiàn)值定性，或用氣相色譜中的經(jīng)驗(yàn)規(guī)律定性。（l）碳數(shù)規(guī)律-在一定溫度下，同系物的調(diào)整保留時間的對數(shù)與分子中碳，原子數(shù)成線性關(guān)系，即2022/8/135式中A2和C2均為常數(shù)，Tb為組分的

3、沸點(diǎn)（K）。由此可見，根據(jù)同族同數(shù)碳鏈異構(gòu)體中幾個已知組分的調(diào)整保留時間的對數(shù)值，可求得同族中具有相同碳數(shù)的其他異構(gòu)體的調(diào)整保留時間。 （2）沸點(diǎn)規(guī)律 同族具有相同碳數(shù)碳鏈的異構(gòu)體化合物，其調(diào)整保留時間的對數(shù)和它們的沸點(diǎn)呈線性關(guān)系，即2022/8/136(3).根據(jù)保留指數(shù)定性 保留指數(shù)又稱Kovasts指數(shù)，是一種較其他保留數(shù)據(jù)都好的定性參數(shù)，可根據(jù)所用固定相和柱溫直接與文獻(xiàn)值對照，而不需標(biāo)準(zhǔn)樣品。 其它物質(zhì)的保留指數(shù)（IX）是通過選定兩個相鄰的正構(gòu)烷烴，其分別具有Z和Z1個碳原子。被測物質(zhì)X的調(diào)整保留時間應(yīng)在相鄰兩個正構(gòu)烷烴的調(diào)整保留值之間如圖所示： 將正構(gòu)烷烴作為標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定其保留指數(shù)為分

4、子中碳原子個數(shù)乘以100（如正己烷的保留指數(shù)為600）。 2022/8/137保留指數(shù)計(jì)算方法2022/8/138解: 已知n=7例圖19-15為乙酸正丁酯在阿皮松L柱上的流出曲線（柱溫100）。由圖中測得調(diào)整保留距離為：乙酸正丁酯3100mm，正慶烷174Omm，正辛烷3734mm，求乙酸正丁酯的保留指數(shù)。即乙酸正丁酯的保留指數(shù)為7756。在與文獻(xiàn)值對照時，一定要重視文獻(xiàn)值的實(shí)驗(yàn)條件，如固定液、柱溫等。而且要用幾個已知組分進(jìn)行驗(yàn)證。 2022/8/139樣品中的某些化合物與一些特征試劑反應(yīng)，生成相應(yīng)的衍生物。將反應(yīng)前后的色譜圖進(jìn)行比較而定性。(4)與化學(xué)方法結(jié)合定性2022/8/1310色譜

5、-結(jié)構(gòu)分析儀器聯(lián)用小型化的臺式色質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS；LC-MS）, 色譜-紅外光譜儀聯(lián)用儀；組分的結(jié)構(gòu)鑒定SampleSample 58901.0 DEG/MINHEWLETTPACKARDHEWLETTPACKARD5972AMass Selective DetectorDCBA ABCDGas Chromatograph (GC)Mass Spectrometer (MS)SeparationIdentificationBACD2022/8/1311氣相色譜與質(zhì)譜（GCMS）聯(lián)用、氣相色譜與Fourier紅外光譜(GCFTIR）聯(lián)用、氣相色譜與原子發(fā)射光譜（GCAES）聯(lián)用等。 氣相色

6、譜/質(zhì)譜聯(lián)用2022/8/13122022/8/1313氣相色譜/傅立葉紅外光譜儀聯(lián)用2022/8/1314色譜定量分析 色譜定量分析是根據(jù)檢測器對溶質(zhì)產(chǎn)生的響應(yīng)信號與溶質(zhì)的量成正比的原理，通過色譜圖上的面積或峰高，計(jì)算樣品中溶質(zhì)的含量。峰面積的測量 （1）峰高（h）乘半峰寬（Y 1/2）法：近似將色譜峰當(dāng)作等腰三角形 A = 1.064 hY1/2（2）峰高乘平均峰寬法：當(dāng)峰形不對稱時，可在峰高0.15和0.85處分別測定峰寬，由下式計(jì)算峰面積： A = h（Y 0.15 + Y 0.85 ）/ 2 2022/8/1315（3）峰高乘保留時間法：在一定操作條件下，同系物的半峰寬與保留時間成正

7、比，對于難于測量半峰寬的窄峰、重疊峰（未完全重疊），可用此法測定峰面積： A = hbtR （4）自動積分和微機(jī)處理法2022/8/1316定量方法1 標(biāo)準(zhǔn)校正法(外標(biāo)法)-標(biāo)準(zhǔn)曲線法試樣中各組分質(zhì)量與其色譜峰面積成正比，即： m i = fi Ai 比例系數(shù)f i -單位面積對應(yīng)的物質(zhì)量 f i =m i / Ai 定量校正因子與檢測器響應(yīng)值成倒數(shù)關(guān)系： f i = 1 / Si 2022/8/1317以標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜峰面積作圖，得到一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，再在標(biāo)準(zhǔn)曲線上根據(jù)待測樣品的峰面積查出待測組分的濃度。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖特點(diǎn)： 外標(biāo)法準(zhǔn)確性較高， 操作條件變化對結(jié)果準(zhǔn)確性影響較大。 對進(jìn)樣量的準(zhǔn)確

8、性控制要求較高，適用于大批量試樣的快速分析。2022/8/13182 內(nèi)標(biāo)法 選擇一個內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，以固定的濃度加入標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液中，以抵消實(shí)驗(yàn)條件和進(jìn)樣量變化帶來的誤差。試樣配制：準(zhǔn)確稱取一定量的試樣W，加入一定量內(nèi)標(biāo)物mS, 計(jì)算式：2022/8/1319相對校正因子f i ：即組分的絕對校正因子與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的絕對校正因子之比。2022/8/1320內(nèi)標(biāo)法特點(diǎn)(a) 內(nèi)標(biāo)法的準(zhǔn)確性較高，操作條件和進(jìn)樣量的稍許變動對定量結(jié)果的影響不大。(b) 每個試樣的分析，都要進(jìn)行兩次稱量，不適合大批量試樣的快速分析。(c) 若將內(nèi)標(biāo)法中的試樣取樣量和內(nèi)標(biāo)物加入量固定，則：內(nèi)標(biāo)法的缺點(diǎn)：在試樣中增加了一個內(nèi)標(biāo)物，這常常給分離帶來一定的困難。2022/8/13213 峰面積歸一化法 特點(diǎn)及要求： 歸一化法簡便、準(zhǔn)確；進(jìn)樣量的準(zhǔn)確性和操作條件的變動對測定結(jié)果影響不大；僅適用于試樣中所有組分全出峰的情況。適合于對多組分試樣中各組分含量的分析。 缺點(diǎn)：經(jīng)過色譜分離后，樣品中所有的組分都要能產(chǎn)生可測量的峰2022/8/1322各種定量方法的比較 方 法 項(xiàng) 目歸一化法內(nèi)標(biāo)法外標(biāo)法計(jì)算公式由工作曲線直接查得稱重配樣不需要需要不需要進(jìn)樣量不需準(zhǔn)確不需準(zhǔn)確需準(zhǔn)確操作條件穩(wěn)定性一次分析過程中條件需穩(wěn)定一次分析過程中條件需穩(wěn)定全部過程中條件需