肝組織中核酸的分離和核酸組分的鑒定

1、肝組織中核酸的分離和核酸組分的鑒定原理動(dòng)物肝組織中的核蛋白可用水提取，用酚破壞核酸與蛋白質(zhì)之間的結(jié)合鍵，再用乙醛抽提除去蛋白質(zhì)及其雜質(zhì)，最后用乙醇沉淀核酸。核酸（DNA和RNA）可被酸水解成磷酸、有機(jī)堿（喋吟堿和喀咤堿）以及戊糖（核糖和脫氧核糖）。它們分別可用下列方法鑒定：.磷酸的鑒定：磷酸能與鋁酸試劑作用生成磷鋁酸，后者在還原劑氨基泰酚磺酸鈉的作用下還原成藍(lán)色的鋁藍(lán)。H3PO4+12H2MoO4磷酸 鋁酸* H3P04 12MoO3 12H20磷鋁酸6H+H3P04 12Mo0 3 12H2O *H3PC4 6Mo03 3Mo05 12H2O+3H2O磷鋁酸還原劑鋁藍(lán).喋吟堿的鑒定：喋吟堿能

2、與苦味酸作用形成針狀結(jié)晶。3,5,-二羥甲苯，orcinol）.核糖的鑒定：核糖與強(qiáng)酸共熱生成糠醛，后者與苔黑酚（反應(yīng)，縮合成綠色化合物。HO CC 0H濃硫酸+3H200H0H糠醛糠醛3,5-二羥甲苯4.脫氧核糖的鑒定脫氧核糖在強(qiáng)酸中加熱可生成3-羥基-丫 -酮基戊醛，后者與二苯胺作用生成藍(lán)色化合物。 2.CH21CHO I CH2 |強(qiáng)酸 TOC o 1-5 h z CHOH+ICHOHC=OIICH2OHCH2OH脫氧核糖贅基-酮基戊醛H+ 藍(lán)色化合物CHO I CH2 I CH2 I C=O Ch20H莘胺-羥基-酮基戊醛試劑（一）90%苯酚溶液。（二）乙醛。（三）95%乙醇。（四）5

3、%硫酸（五）鋁酸試劑鋁酸俊5g溶于100ml蒸儲(chǔ)水中，再加入濃硫酸 15ml,冷卻后加蒸儲(chǔ)水至1000ml o冷處保存（一個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定）。（六）氨基泰酚磺酸鈉溶液1,2,4-氨基泰酚磺酸鈉0.5g溶于195ml 15%亞硫酸氫鈉與5ml 20%亞硫酸鈉溶液中，加塞振搖助溶。貯存于棕色瓶中，冰箱保存（可用 4周）用時(shí)取 上清液。（七）飽和苦味酸溶液苦味酸約1.3g溶于100ml蒸儲(chǔ)水中，靜置過(guò)夜。臨用前取上清液。（八）Bial試劑 苔黑酚1.5g加入濃鹽酸500ml中，再加10%氯化高鐵2030滴。臨用 前配制，冰箱保存。（九）二苯胺試劑取二苯胺1g溶于100ml冰醋酸中，加入濃硫酸 2.75ml

4、,臨用前配制，貯于棕色瓶中。主要器材（一）離心機(jī)（二）沸水?。ㄈ┭欣彶僮鞑襟E（一）肝組織中核酸的提?。喊匆韵铝鞒滩僮?批叫（約1g,置研缽中）加少量?jī)羯逞心ブ梁隣? r加蒸儲(chǔ)水3ml,研磨3minI F加90%t酚5ml,研磨10 min （移入玻璃小試管）1 r離心 5min 3 3000r/min ,）上層液 （移至塑料小試管）下層液加乙醛2ml,試管口覆蓋聚乙烯膜、用拇指將管口按住，用力振搖1-2 min （或用玻棒攪拌）離心 5min （3000r/min ）上清液中層液卜層液|（全部移至塑料小試管）加95成酉I 2ml （用玻棒攪拌約 2 min ）離心 3min （3000r/m

5、in ）上清液叵|加 5%H2SO4ml（二）核酸水解：（移至玻璃大試管）置沸水浴 15min核酸水解液（三）核酸組分的鑒定核酸水解液用流水冷卻后進(jìn)行定性鑒定。磷酸的鑒定：試管 2支、稱號(hào)，按表5操作：表5試劑（滴）測(cè)定管對(duì)照管核酸水解液10一5%硫酸一10鋁酸試劑55氨基泰酚磺酸鈉溶液44搖勻，置沸水浴中 23分鐘，觀察兩管顏色變化。2.喋吟堿的鑒定：試管 1支，加入飽和苦味酸約 2ml,再加入核酸水解液 46滴，搖 勻，靜止室溫中，觀察有無(wú)針狀結(jié)晶出現(xiàn)。核糖的鑒定：試管 2支、稱號(hào)，按表6操作：表6試劑（滴）測(cè)定管對(duì)照管核酸水解液6一5%酸一6Bial試劑99搖勻，置沸水浴中5分鐘后觀察兩管顏色變化。脫氧核糖的鑒定：試管2支、標(biāo)號(hào)，按表 7操作：表7試劑（滴）測(cè)定管對(duì)照管核酸水解液20一5%酸一20一苯胺試劑4040搖勻，置沸水浴中15分鐘后觀察兩管顏色變化。結(jié)果記錄上述各管實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并加以解釋。注意事項(xiàng).用新鮮肝組織（可取自小鼠、兔和豬等）制備肝勻漿時(shí)，必須充分研磨肝組織。.苯酚有腐蝕性，切勿與皮膚接觸，注意安全。.該實(shí)驗(yàn)為