一些固定劑的配方及性能介紹

1、一些固定劑的配方及性能介紹固定，就是用某種方法以最快的速度將細(xì)胞殺死并保持組織及細(xì)胞原有的形態(tài)結(jié)構(gòu)及其組成。固定在組織制片中極為重要，因?yàn)闄C(jī)體死后血液循環(huán)停止，細(xì)胞逐漸死亡，如不立即處理，則細(xì)胞內(nèi)的酶（水解酶）會(huì)使蛋白質(zhì)分解為氨基酸滲出細(xì)胞，使細(xì)胞溶解破壞，組織變形，在無冰藏的條件下，更可因其病原微生物的迅速繁殖而腐敗，組織結(jié)構(gòu)破壞，不利于形態(tài)學(xué)的診斷。組織固定的目的為1、迅速防止組織、細(xì)胞死后變化，防止自溶與腐敗，以保持和細(xì)胞與正常生活時(shí)的形態(tài)相似；2、使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等各種成分轉(zhuǎn)變成不溶解物質(zhì)，以保持它原有的結(jié)構(gòu)與生活時(shí)相仿；3、使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來而產(chǎn)生不同的折

2、光率，造成光學(xué)上的差異，以便染色后易于鑒別和觀察；4、固定劑兼有硬化作用，使組織硬化，增加組織硬度，便于制片；5、防止細(xì)胞過度收縮或膨脹而失去其原有的形態(tài)結(jié)構(gòu)；經(jīng)過固定的組織，能對(duì)染料產(chǎn)生不同的親和力而著色清晰，便于辨認(rèn)。為了能夠達(dá)到固定的目的，固定劑必須具備以下的性質(zhì)和條件：1、迅速滲入組織而固定原生質(zhì)，使短期解剖的組織細(xì)胞形態(tài)不至于有較大變化；2、固定液有相當(dāng)?shù)臐B透力，對(duì)組織各部分的滲透力相等，可使組織內(nèi)外完全固定；3、使組織細(xì)胞中不至于因固定引起人為的改變；4、在凝固原生質(zhì)以后，增加細(xì)胞對(duì)于各種穿透的抵抗力，不至于因以后的處理，而使固定后的原生質(zhì)變形；5、盡可能避免使組織膨脹或收縮（不致

3、改變?cè)|(zhì)原來的體積）；6、能使細(xì)胞內(nèi)的成分（蛋白質(zhì)）凝固或沉淀下來；7、增加細(xì)胞內(nèi)含物的折光度，易于鑒別，增加媒染作用和染色作用；8、使細(xì)胞變硬，適于切片，但又不使材料太堅(jiān)硬或松脆；9、使組織充分固定，便于保存。12下面我們介紹中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理分會(huì)推薦的幾種常用固定劑的性能3：1、 4%中性甲醛（10%中性福爾馬林）固定液配方：甲醛（40%）100ml，無水磷酸氫二鈉6.5g，磷酸二氫鈉4.0g，蒸餾水900ml。福爾馬林不能使蛋白質(zhì)及核蛋白凝固，但能保存脂類，可用于高爾基體、線粒體的固定，是糖的保護(hù)劑。對(duì)大多數(shù)抗原物質(zhì)保存較好，對(duì)細(xì)胞膜的通透性有影響，可能使某些大分子抗原失去活性。福爾馬林滲

4、透力強(qiáng)，固定均勻，對(duì)組織收縮較少。2、乙醇-甲醛（酒精-福爾馬林，AF）固定液配方：甲醛（40%）100ml，95%乙醇900ml。酒精可以凝固蛋白質(zhì)，但不能沉淀核蛋白，能溶解大部分脂類。酒精滲透速度快，膠水性強(qiáng)。除了固定作用外，還具有硬化和脫水作用。缺點(diǎn)是滲透力差，能使組織收縮，易揮發(fā)，容易吸收空氣中的水分。酒精是一種還原劑，能被氧化成醋酸，不能與鉻酸、鋨酸及重鉻酸鉀等氧化劑配合成固定劑。AF液兼有脫水作用，對(duì)皮下組織中肥大細(xì)胞固定好。3、Carnoy固定液配方：無水乙醇60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml。醋酸，又稱乙酸、冰醋酸。固定組織常用5%的溶液，能沉淀核蛋白，不能沉淀白蛋白、球蛋

5、白，不能保存糖，也不能固定脂質(zhì)，可使染色體保存較好。其穿透力強(qiáng)，滲透快。其缺點(diǎn)是使組織膨脹，特別對(duì)膠原纖維及纖維蛋白，高濃度的醋酸易破壞線粒體和高爾基體。Carnoy液能固定胞漿和胞核，尤其適宜于染色體等。常用于糧原及尼氏體的固定，對(duì)顯示DNA、RNA的效果好。固定液可防止乙醇的硬化及收縮作用，增加滲透力，特別適合外膜致密不易透入的組織。4、Zenker固定液配方：升汞5.0g，重鉻酸鉀2.5g，硫酸鈉1.0g，蒸餾水100ml。升汞（HgCl2），能使蛋白質(zhì)及核酸沉淀，對(duì)脂類及多糖無固定作用，也不破壞脂類及多糖。其滲透速度快，穿透力較弱，對(duì)組織收縮較小。組織固定后染色質(zhì)強(qiáng)烈與堿性染料結(jié)合，胞

6、質(zhì)內(nèi)的結(jié)構(gòu)也能被酸性或堿性染料著色。重鉻酸鉀是強(qiáng)氧化劑，和合固定材料的濃度為1-3%，本身不能沉淀蛋白質(zhì)，但可使蛋白質(zhì)產(chǎn)生沉淀，未酸化的雖不能沉淀蛋白質(zhì)，但可使蛋白質(zhì)變?yōu)椴蝗苄?，保持與生活狀態(tài)相仿，能固定類脂體，所以可以固定高爾基體、線粒體、脂肪，能溶解染色體，所以對(duì)核染色不良。酸化的使胞質(zhì)及胞核沉淀呈網(wǎng)狀，保存染色體，破壞線粒體。Zenker固定液能使細(xì)胞核和細(xì)胞漿染色較為清晰。對(duì)細(xì)胞質(zhì)固定好，顯示某些細(xì)胞質(zhì)內(nèi)特殊顆粒有獨(dú)特優(yōu)越性，對(duì)胰島和垂體前葉各種細(xì)胞的顯示效果好，對(duì)骨髓等造血器官的固定效果好，紅細(xì)胞可得到良好保存，對(duì)心肌的閏盤保存也有良好效果。 5、Bouin固定液配方：飽和苦味酸水溶

7、液（約1.22%）75ml，甲醛（40%）25ml，冰醋酸5ml?？辔端徇m合固定材料的濃度為飽和水溶液，能沉淀蛋白，對(duì)脂類無作用，不能固定多糖，滲透力弱，對(duì)組織收縮明顯，不使組織硬化，固定組織容易著色。Bouin固定液滲透力強(qiáng)，對(duì)組織固定均勻且收縮小，染色效果好，核著色鮮明，但細(xì)胞質(zhì)著色差。用于固定大多數(shù)器官和組織，適用于結(jié)締組織染色。6、B5（醋酸鈉-升汞-甲醛）固定液：無水醋酸鈉 1.25g，升汞6.0g，蒸餾水90ml，使用前加入甲醛10ml。此液臨時(shí)配制，適于固定胰腺組織，對(duì)鑒別胰島細(xì)胞較好。7、丙酮固定液丙酮能使蛋白質(zhì)沉淀，對(duì)多糖無固定作用，對(duì)核固定欠佳，滲透力強(qiáng)，使組織劇烈收縮。易

8、揮發(fā)，易燃。廣泛用于酶組織化學(xué)方法中各種酸的固定。在工作及實(shí)驗(yàn)中我們也可能用與下面一些固定液4：1、 Altmann液 配方：5%重鉻酸鉀水溶液10ml，2%鋨酸水溶液10ml。用于固定線粒體，脂肪和白細(xì)胞。2、 Aoyama液 配方：氯化鎘1g，甲醛15ml，蒸餾水85ml。適宜于固定高爾基復(fù)合體。3、 Champy液 配方：3%重鉻酸鉀70ml，1%鉻酸70ml，2%鋨酸40ml。用于固定線粒體和高爾基復(fù)合體。4、 Dafano液 配方：硝酸鈷1g，甲醛15ml，蒸餾水100ml。用于固定高爾基復(fù)合體。5、 ECD-G液 配方：0.05mol/L PB 500ml，0.01mol/L PB

9、S 500ml，Tris14g，濃鹽酸少許，ECD10g，25%戊二酫 3.5ml。對(duì)蛋白質(zhì)的固定有良好作用，用于培養(yǎng)細(xì)胞免疫細(xì)胞免疫電鏡的良好固定液。6、 Flemming液 配方：強(qiáng)渡：1%鉻酸水溶液75ml，2%鋨酸水溶液20ml，冰醋酸5ml。弱本1%鉻酸水溶液25ml，1%冰醋酸（用前加入）10ml，蒸餾水60ml。適宜于高爾基復(fù)合體和線粒體的固定，強(qiáng)液用于固定脂肪組織。7、 Goldsmith液 配方：1%鉻酸水溶液15ml，2%重鉻酸水溶液4ml，冰醋酸1ml。對(duì)鳥類胚胎固定佳。8、 Heidenhain液 配方：升汞4.5g，氯化鈉0.5g，蒸餾水80ml，三氯醋酸2g，冰酸酸

10、4ml，甲醛20ml。對(duì)含較厚角質(zhì)層的組織固定較好，如皮膚，蛔蟲、昆蟲幼蟲等。9、 Houseby液 配方：甲醛10ml，蒸餾水90ml，對(duì)苯二酚7g。對(duì)細(xì)胞質(zhì)的微細(xì)結(jié)構(gòu)保存好。10、 Kanovsky液 配方：25%戊二醉醛10ml，40%甲醛5ml，0.2mol/L二甲胂酸鈉緩沖液49ml，無水氯化鈉50mg，蒸餾水33.5ml。適用于免疫電鏡標(biāo)本的固定，對(duì)細(xì)胞抗原性和細(xì)胞微結(jié)構(gòu)的保存比用戊二酫好。11、 Maximow液 配方：重鉻酸鉀2.5g，升汞5g，蒸餾水100ml，中性甲醛10ml。此液用甲酫代替Zenker液中的冰醋酸，對(duì)細(xì)胞質(zhì)固定好，也可用于造血器官等組織的固定。12、 Me

11、thacarn液 配方：甲醇60ml，氯仿10ml，醋酸10ml。適用于某些癌基因蛋白質(zhì)產(chǎn)物和一些抗原的固定，如P53，PCNA的固定。13、 Romeis液 配方：升汞飽和水溶液50ml，5%三氯醋酸水溶液40ml，甲醛10ml(用時(shí)加入)。可作為一般固定液應(yīng)用，也可用于其他固定液固定后的再固定。有利于Heidenhain錢蘇木精染色，有后媒染作用。14、 Rossman 配方：無水乙醇苦味酸飽和液90ml，甲醛10ml。對(duì)糖原固定好。15、 Verhoeff液 配方：甲醛水溶液10ml，95%酒精48ml，蒸餾水36ml，苦味酸1g。用于固定眼球。16、 4%對(duì)苯醌 配方：對(duì)苯醌4g，0.

12、05mol/L PBS 100ml。對(duì)抗原保存好，但對(duì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)有影響，一般應(yīng)與醛類固定液混合使用。17、 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸緩沖液（pH7.3）配方：多聚甲醛40g，0.1mol/L磷酸緩沖液1000ml。該固定劑較適于光鏡免疫細(xì)胞化學(xué)研究，最好是動(dòng)物經(jīng)灌注固定取材后，繼續(xù)浸泡固定224h。另外，該固定劑較為溫和，適于組織標(biāo)本的較長期保存。18、 PLP液（過碘酸鹽-賴氨酸-多聚甲醛固定液配方：過碘酸鈉，賴氨酸鹽酸鹽（或鹽酸賴氨酸），多聚甲醛，蒸餾水。配制方法：（1）貯存液A（0.1mol/L賴氨酸-0.5mol/l Na3PO4,pH7.4）：稱取賴氨酸鹽酸鹽1.82

13、7g溶于50ml蒸餾水中，得0.2mol/L的賴氨酸鹽酸鹽溶液，然后加入Na2HPO4至0.1mol/L，將pH調(diào)至7.4，補(bǔ)足0.1mol/L的PB至100ml，使賴氨酸濃度也為0.1mol/L,4冰箱保存，最好兩周內(nèi)使用。此溶液的滲透濃度為300mOs mmol/L/kg。（2）貯存液B（8%多聚甲醛溶液）：稱8g多聚甲醛加入100ml蒸餾水中，配成8%多聚甲醛液（方法見前）。過濾后4冰箱保存。（3）臨用前，以3份A液與1份B液混合，再加入結(jié)晶過碘酸鈉（NaIO4），使NaIO4終濃度為2%。由于AB兩液混合，pH從約7.5降至6.2，故固定時(shí)不需再調(diào)pH值。固定時(shí)間為618h。該固定劑較適于富含糖類的組織，對(duì)超微結(jié)構(gòu)及許多抗原的抗原性保存較好。其機(jī)制是借助于過碘酸氧化組織中的糖類形成醛基，通過賴氨酸的雙價(jià)氨基與醛基結(jié)合，從而與糖形成交聯(lián)。由于組織抗原絕大多數(shù)都是由蛋白質(zhì)和糖兩部分構(gòu)成，抗原決定簇位于蛋白部分，故該固定劑有選擇性地使糖類固定，這樣既穩(wěn)定了抗原，又不影響其在組織中的位置關(guān)系。19、 甲醛-醋酸鈉（鈣）-升汞液 配方：甲醛10ml，醋酸鈉或醋酸鈣2g，升汞6g，蒸餾水90ml。用于固定胰腺組織，對(duì)鑒別胰島細(xì)胞效果好。20、 甲醛-鈣液 配方：甲醛10ml，無水氯化鈣1g，蒸餾水9