免疫實(shí)驗(yàn)報(bào)告2

1、陳子朋2015臨五雯班20152025-1226+沉淀反應(yīng)一雙向擴(kuò)散【實(shí)驗(yàn)原理】在一定條件下，抗原能與相應(yīng)的抗體相互作用，發(fā)生免疫沉淀反應(yīng)。免疫擴(kuò)散就是使抗原與抗體在瓊脂糖凝膠中自由擴(kuò)散而相遇，從而形成抗原抗體復(fù)合物，由于此復(fù)合物分子量增大并產(chǎn)生聚集，不再繼續(xù)擴(kuò)散而形成肉眼可見的帶狀或線狀沉淀帶。利用瓊脂糖凝膠作為擴(kuò)散介質(zhì)是因?yàn)橐欢舛鹊沫傊悄z，其內(nèi)部為多孔網(wǎng)狀。而且孔徑很大，可以允許大分子物質(zhì)（分子量自十幾萬(wàn)到幾百萬(wàn)以上）自由通過。因?yàn)榇蠖鄶?shù)抗原和抗體的分子量都在20萬(wàn)以上，所以它們?cè)诃傊悄z中幾乎可以自由擴(kuò)散。而且瓊脂糖凝膠又具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性含水量大、透明度好、來(lái)源方便、處理容易

2、等優(yōu)點(diǎn)，因此是免疫沉淀檢測(cè)技術(shù)中最理想的擴(kuò)散介質(zhì)。雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)是定性實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定時(shí)將加熱溶化的瓊脂或瓊脂糖澆至玻片上，等瓊脂凝固后，打多個(gè)小孔，將抗原和抗體分別加入小孔內(nèi)，使抗原和抗體在瓊脂板上相互擴(kuò)散。當(dāng)二個(gè)擴(kuò)散圈相遇，如抗原和抗體呈特異性的結(jié)合且比例適當(dāng)時(shí)，將會(huì)形成抗原抗體復(fù)合物的沉淀，該沉淀可在瓊脂中呈現(xiàn)一條不透明的白色沉淀線。如果抗原與抗體無(wú)關(guān)，就不會(huì)出現(xiàn)沉淀線，因此可以通過該試驗(yàn)，用特異性抗體鑒定抗原。n雙向掠脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ綀DAgarmatrixAntibodyAntigen實(shí)驗(yàn)方法】制備瓊脂玻片：將已加熱溶化的1%瓊脂5mL，迅速傾入潔凈干燥的載玻片上，打孔：在凝固的瓊脂糖

3、膠上用打孔器或吸嘴按左圖所示打梅花孔(孔徑約3mm，孔距4mm)，用針頭小心挑去瓊脂。為便于識(shí)別加樣方向或區(qū)分不同的組，可在瓊脂糖膠邊緣打上小孔或切角標(biāo)記。打孔完畢，將載玻片在酒精燈火焰上方過幾遍，可防止漏液。室溫自然冷卻凝固。加樣：在中央孔加抗體，上下孔加抗原1(Ag1)，左右孔加抗原2(Ag2)，每孔約10“L。溫育：將瓊脂糖膠置于濕盒(飯盒墊上紗布，加蒸餾水潤(rùn)濕)中，37C溫育12-24h。結(jié)果觀察：觀察抗原抗體產(chǎn)生的白色沉淀線。免疫血清的滴度以一定抗原濃度下出現(xiàn)白色沉淀線的最高稀釋度來(lái)表示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果】由本實(shí)驗(yàn)可以說明以人Ab與羊抗人IgG免疫血清相關(guān)，在瓊脂糖凝膠中自由擴(kuò)散而相遇，從而

4、形成抗原抗體復(fù)合物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示上下部分的抗原Ag1可以與人抗體結(jié)合，形成沉淀線，而左右部分的Ag2不能與人抗原Ab結(jié)合。這符合試驗(yàn)原理，證明試驗(yàn)操作成功。但從圖片亦可看出上方的左邊未見沉淀線，可能是加樣時(shí)未加好，亦或是打孔時(shí)與其他孔深度相差較大。巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)原理】巨噬細(xì)胞(macrophage,M)是單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的主要細(xì)胞，局域活躍的吞噬功能。吞噬細(xì)胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明顯增強(qiáng)。在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生后，再給小鼠腹腔注射雞血紅細(xì)胞，30min后處死小鼠，取出腹腔液，以冷亞甲藍(lán)染色，顯微鏡下計(jì)數(shù)吞噬紅細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，及觀察吞噬細(xì)胞內(nèi)雞紅細(xì)胞的數(shù)目，以判斷吞噬細(xì)胞的殺傷能力，由此間接地測(cè)定機(jī)體的非特異性免疫水平。原理圖示:鏡下觀寮%涂片，染色腹腔江射雞紅細(xì)胞3天30minV1巨噬細(xì)胞吞噬功能【實(shí)驗(yàn)方法】本實(shí)驗(yàn)采取體內(nèi)法實(shí)驗(yàn)前3d,小鼠腹腔注射6%無(wú)菌淀粉液1ml,誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞滲出至腹腔中。實(shí)驗(yàn)時(shí)，每只小鼠注射雞紅細(xì)胞1ml,輕柔腹部，使其在腹腔中分布均勻，利于吞噬。30min后，將小鼠拉頸處死，固定，打開腹腔暴露腸管，用載玻片輕擦腹腔，使腹腔液均勻涂于載玻片過，再滴一滴0.03%冷亞甲藍(lán)溶液，蓋上蓋玻片。(4)高倍鏡下進(jìn)行觀察，計(jì)數(shù)。【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】實(shí)驗(yàn)結(jié)果如上圖所示吞噬后的巨噬細(xì)胞【