MS培養(yǎng)基的作用

1、MS培養(yǎng)基的作用植物組織培養(yǎng)中常用的一種培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基。MS培養(yǎng)基的配制步驟這樣每次使用時(shí)，取其總量的1/20（50 mL）或1/200（5 mL）,加水稀釋，制成培養(yǎng)液?，F(xiàn)將制備培養(yǎng)基母液所需的各類物質(zhì)的量列出，供配制時(shí)使 用。大量元素（母液I ） mg/LNH4NO3 33 000KNO338 000CaCl2 - 2H2O 8 800MgSO4 7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素（母液H ）KI 166H3BO3 1 240MnSO4 4H2O 4 460ZnSO4 7H2O 1 720Na2MoO 4 2H2O 50CuSO4 5H2O 5CoCl2 - 6H2O

2、 5鐵鹽（母液田）FeSO4 7H2O 5 560Na2-EDTA 2H2O 7 460有機(jī)成分（母液IV） IVA肌西I 20 000IVB煙酸100鹽酸叱,哆醇（維生素B6） 100鹽酸硫胺素（維生素B1） 20甘氨酸400以上各種營養(yǎng)成分的用量，除了母液I為 20倍濃縮液外，其余的均為 200倍濃縮液。上述幾種母液都要單獨(dú)配成1 L的貯備液。其中，母液I、母液R及母液IV的配制方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸儲(chǔ)水徹底溶解，然后再將它們混溶，最后定容到1L。母液田的配制方法是 ：將稱好的 FeSO4 7H2O和Na2-EDTA 2H2O分另 放到450 mL蒸儲(chǔ)水中，

3、邊加熱邊不斷攪拌使它們?nèi)芙?，然后將兩種溶液混合，并將pH調(diào)至5?5,最后定容到1 L ,保存在棕色玻璃瓶中。各種母液 配完后，分別用玻璃瓶貯存，并且貼上標(biāo)簽，注明母液號(hào)、配制倍數(shù)、日 期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS培養(yǎng)基中還需要加入：2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D）、-乙酸（NAA）、6-甲基喋吟（6-BA）等植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，并且分別配成母液（0?1 mg/mL）。其配制方法是：分別稱取這3種物質(zhì)各10 mg將2,4-D和NAA用少量（1 mL） 無水乙醇預(yù)溶，將 6-BA用少量（1 mL）的物質(zhì)的量濃度為 0.1 mol/L的NaOH 溶液溶解，溶解過程需要水浴加熱，最后分別定容至

4、100 mL,即得質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的母液。配制培養(yǎng)液 用量筒或移液管從各種母液中分別取出所需的用量：母液I 為 50 mL,母液 H、田、IVA 和IVB 各 5 mL 再取 2, 4-D 5 mL NAA1 mL, 與各種母液一起放入燒杯中。MS培養(yǎng)基配制培養(yǎng)液時(shí)的注意事項(xiàng)配制培養(yǎng)液時(shí)應(yīng)注意：在使用提前配制的母液時(shí)，應(yīng)在量取各種母液之前，輕輕搖動(dòng)盛放 母液的瓶子，如果發(fā)現(xiàn)瓶中有沉淀、懸浮物或被微生物污染，應(yīng)立即淘汰 這種母液，重新進(jìn)行配制；用量筒或移液管量取培養(yǎng)基母液之前，必須用所量取的母液將量筒 或移液管潤洗2次；量取母液時(shí)，最好將各種母液按將要量取的順序?qū)懺诩埳?，量?種，劃

5、掉1種，以免出錯(cuò)。溶化瓊脂用粗天平分別稱取瓊脂9 g、蔗糖30g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入 蒸儲(chǔ)水750 mL,用電爐加熱，邊 加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀。然后再將配好的混合培養(yǎng)液 加入到煮沸的瓊脂中，最后加蒸儲(chǔ)水定容至1 000 mL ,攪拌均勻。需要注意的是，在加熱瓊脂，制備培養(yǎng)基的過程中，操作者千萬不能離開，否則沸騰的瓊脂外溢，就需要重新稱量、制備。止匕外，如果沒有搪瓷量杯，可用大燒杯代替。但要注意大燒杯底的外表面不能沾水，否則加熱時(shí)燒杯容易炸裂，使溶液外溢，造成燙傷。調(diào)pH用滴管吸取物質(zhì)的量濃 度為1 mol/L的NaOH容液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊

6、攪拌，并隨 時(shí)用精密的pH試紙（5.47.0）測培養(yǎng)基的pH, 一直到培養(yǎng)基的 pH為5.8 為止（培養(yǎng)基的pH必須嚴(yán)格控制在 5.8）。培養(yǎng)基的分裝 溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該 趁熱分裝。分裝時(shí)，先將培養(yǎng)基倒入燒杯中，然后將燒杯中的培養(yǎng)基倒入 錐形瓶（50 mL或100 mL）中。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。錐形瓶中培養(yǎng)基的量約為錐形瓶容量的1/51/4。每1 000 mL培養(yǎng)基，可分裝2530瓶。培養(yǎng)基分裝完畢后，應(yīng)及時(shí)封蓋瓶口。用2塊硫酸紙（每塊大小約為9 cmX9 cm）中間夾1層薄牛皮紙封蓋瓶口，并用線繩捆扎。最后在錐 形瓶外壁貼上標(biāo)簽。高壓滅菌培養(yǎng)基的高壓滅菌 步驟高壓滅菌培養(yǎng)基的高壓

7、滅菌包括以下幾個(gè)步驟。第一，碼放錐形瓶。將裝有培養(yǎng)基的錐形瓶直立于金屬小筐中，再放 入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)。如果沒有金屬小筐，可以在兩層錐形瓶之間放一塊 玻璃板隔開。第二，放置其他需要滅菌的物品。將其他需要滅菌的物品也放入高壓 蒸氣滅菌鍋內(nèi)，如裝有蒸儲(chǔ)水的錐形瓶、帶螺口蓋的玻璃瓶、燒杯、廣口 瓶（以上物品都要用牛皮紙封口），用牛皮紙包裹的培養(yǎng)皿、剪刀、解剖刀、銀子、濾紙、鉛筆等。第三，滅菌。待需要滅菌的物品碼放完畢，蓋上鍋蓋。在98 kPa、121.3 C下，滅菌20 min。滅菌后取出錐形瓶，讓其中的培養(yǎng)基自然冷卻凝固。最 好放置1 d后再使用。囹開放分類：植物組織培養(yǎng)中常用的一種培養(yǎng)基是MS培

8、養(yǎng)基。MS培養(yǎng)基的配制包括以下步驟。培養(yǎng)基母液的配制和保存培養(yǎng)基母液的配制和保存培養(yǎng)基母液的配制和保存培養(yǎng)基母液的配制 和保存MS培養(yǎng)基含有近30種營養(yǎng)成分，為了避免每次配制培養(yǎng)基都要對(duì)這幾十種成分進(jìn) 行稱量，可將培養(yǎng)基中的各種成分，按原量的20倍或200倍分別稱量，配成濃縮液，這種濃縮液叫做培養(yǎng)基母液。這樣每次使用時(shí)，取其總量的 1/20（50 mL）或1/200（5 mL）,加水稀釋，制成培養(yǎng)液?，F(xiàn)將制備培養(yǎng)基母液所需的各類物質(zhì)的量列出，供配制時(shí)使用。大量元 TOC o 1-5 h z 素大量元素大量元素大量元素（母液母液母液母液I I I I ）mg/LNH4NO333 000KNO33

9、8 000CaCl2 - 2H2O8 800MgSO4 - 7H2O7 400KH2PO43 400微量元素微量元素微量元素微量元素（母液母液母液母液n n n n ）KI166H3BO31 240MnSO4 - 4H2O4 460ZnSO4 - 7H2O1 720Na2MoO4 - 2H2O50CuSO4 - 5H2O5CoCl2 - 6H2O5鐵鹽鐵鹽鐵鹽鐵鹽（母液母液母液母液nunmni）FeSO4 - 7H2O5 560Na2-EDTA - 2H2O7 460有機(jī)成分有機(jī)成分有機(jī)成分有機(jī)成分(母液母液母液母液IVIVIVIV)WA肌醇20 000WB煙酸100鹽酸吡哆醇(維生素B6)1

10、00鹽酸硫胺素(維生素B1)100甘氨酸400以上各種營養(yǎng)成分的用量，除了母液I為 20倍濃縮液外，其余的均為200倍濃縮液。上述幾種母液都要單獨(dú)配成1 L的貯備液。其中，母液I、母液H及母液IV的配制方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢后， 分別用少量的蒸餾水徹底溶解， 然后再將它們混溶， 最 后定容到1 L。 母液出的配制方法是：將稱好的FeSO4 - 7H2O和Na2-EDTA 2H2O分另1J放到 450 mL 蒸餾水中，邊加熱邊不斷攪拌使它們?nèi)芙?，然后將兩種溶液混合，并將pH 調(diào)至 5.5，最后定容到1 L ，保存在棕色玻璃瓶中。 各種母液配完后，分別用玻璃瓶貯存，并且貼上標(biāo)簽，注明

11、母液號(hào)、配制倍數(shù)、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS 培養(yǎng)基中還需要加入 2， 4-二氯苯氧乙酸(2 ， 4-D) 、 萘乙酸 (NAA) 、 6 芐基嘌呤 (6BA)等植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，并且分別配成母液(0.1 mg/mL) 。其配制方法是：分別稱取這3 種物質(zhì)各 10 mg， 將 2， 4-D 和 NAA 用少量 (1 mL) 無水乙醇預(yù)溶， 將 6BA 用少量 (1 mL) 的物質(zhì)的 量濃度為 0.1 mol/L 的 NaOH 溶液溶解，溶解過程需要水浴加熱，最后分別定容至100 mL ，即得質(zhì)量濃度為 0.1 mg/mL 的母液。 配制培養(yǎng)液配制培養(yǎng)液配制培養(yǎng)液配制培養(yǎng)液用量筒或移液管

12、從各種母液中分別取出所需的用量：母液I為 50 mL,母液H、出、A A和IVB各 5 mLo再取2, 4-D 5 mL、NAA 1 mL ,與各種母液一起放入燒杯中。配制培養(yǎng)液時(shí)應(yīng)注意：在使用提前配制的母液時(shí)，應(yīng)在量取各種母液之前，輕輕搖 動(dòng)盛放母液的瓶子，如果發(fā)現(xiàn)瓶中有沉淀、懸浮物或被微生物污染，應(yīng)立即淘汰這種母液， 重新進(jìn)行配制； 用量筒或移液管量取培養(yǎng)基母液之前， 必須用所量取的母液將量筒或移液 管潤洗2次；量取母液時(shí)，最好將各種母液按將要量取的順序?qū)懺诩埳?，量?種，劃掉1種，以免出錯(cuò)。溶化瓊脂溶化瓊脂溶化瓊脂溶化瓊脂用粗天平分別稱取瓊脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪

13、瓷量杯中，再加入蒸儲(chǔ)水750 mL ,用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌， 直到液體呈半透明狀。 然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂中， 最后加蒸 餾水定容至1 000 mL ，攪拌均勻。 需要注意的是，在加熱瓊脂、制備培養(yǎng)基的過程中，操作者千萬不能離開，否則沸騰的瓊脂外溢，就需要重新稱量、制備。此外，如果沒有搪瓷量 杯，可用大燒杯代替。但要注意大燒杯底的外表面不能沾水， 否則加熱時(shí)燒杯容易炸裂，使 溶液外溢，造成燙傷。調(diào) pH 用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為 1 mol/L 的 NaOH 溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨時(shí)用精密的pH試紙(5 47 0)測培養(yǎng)基的pH, 一直到培

14、養(yǎng)基的pH為 5 8 為止 (培養(yǎng)基的pH 必須嚴(yán)格控制在5 8)。 培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的分裝 溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。分裝時(shí)，先將培養(yǎng)基倒入燒杯中，然后將燒杯中的培養(yǎng)基倒入錐形瓶(50 mL 或 100 mL) 中。 注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。 錐形瓶中培養(yǎng)基的量約為錐形瓶容量的1/51/4。每1 000 mL培養(yǎng)基，可分裝 2530瓶。培養(yǎng)基分裝完畢后，應(yīng)及時(shí)封蓋瓶口。用2塊硫酸紙(每塊大小約為9 cm X 9 cm)中間夾 1 層薄牛皮紙封蓋瓶口，并用線繩捆扎。最后在錐形瓶外壁貼上標(biāo)簽。 高壓滅菌高壓滅 菌高壓滅菌高壓滅菌 培養(yǎng)基的高壓滅菌包括以下幾個(gè)步

15、驟。 第一， 碼放錐形瓶。 將裝有培 養(yǎng)基的錐形瓶直立于金屬小筐中， 再放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)。 如果沒有金屬小筐， 可以在兩 層錐形瓶之間放一塊玻璃板隔開。 第二，放置其他需要滅菌的物品。將其他需要滅菌的物品也放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)，如裝有蒸儲(chǔ)水的錐形瓶、帶螺口蓋的玻璃瓶、燒杯、廣口瓶（以 上物品都要用牛皮紙封口 ），用牛皮紙包裹的培養(yǎng)皿、剪刀、解剖刀、鐐子、濾紙、鉛筆等。第三，滅菌。待需要滅菌的物品碼放完畢，蓋上鍋蓋。在98 kPa、121.3 C下，滅菌20 min。滅菌后取出錐形瓶，讓其中的培養(yǎng)基自然冷卻凝固。最好放置 1d后再使用一付液配制與保存配制培養(yǎng)基時(shí)如果每次配制都變按彳;楊成分表

16、依次稱量既費(fèi)時(shí) 又增加r名次稱常誤差：h r提高tu二方養(yǎng)基的.作效率 一般將常用的某本培養(yǎng) 基配制成10200倍 甚至1000倍的濃縮貯備液即時(shí)液口母液貯存丁冰箱中 使用時(shí)將它們按一定的比例言行稀釋混介 可多次使用 并在配制較多數(shù)量的培養(yǎng)基時(shí) 海低工 作展度也娓高試驗(yàn)的精度二基本培養(yǎng)基的母液有四種人量元素液縮20倍 微量元素濃縮100倍 鐵鹽 濃縮200倍除蔗糖之外的有機(jī)物質(zhì) 濃縮100倍1大量元素 配制大量元素母液時(shí)要分別稱量分別溶解 至定容忖按.表1中的序號(hào)依次加入容量瓶中以I防也則I，淀、.閨人加片劑加中貼好標(biāo)然可依好記出廣葉：際保存或成入詆知內(nèi)保存。表1大量元素母液配1L20倍的母液

17、序號(hào) 成分 配方用 量/ mg.L-1稱取量 /mg 配 1mL 培養(yǎng)基吸取量 /mL 1 NH4NO3 1650 3300050 2 KNO3 1900 38000 3KH2PO4 170 3400 4 MgSO4.7H2O 370 7400 5 無水 CaCl2 440 66442 微量元素母液 在配制微量元素母液時(shí)也，應(yīng)分刈詬I :和外馴溶科 定一涔寸不分先后次次丁憶點(diǎn)!n人潘UM中定容 表2股下公出現(xiàn)下淀工象、.倒入磨口試劑M中 M好杯答刈做好家；可常溫保存或放入冰箱內(nèi)保有存。表2微量元素母液（配制1L100倍母液）成分 配方用量/（mg.L-1） 稱取量/mg 配制 1L 培養(yǎng)基吸取量/mL KI 083 8310MnSO4.H2O 223 1690 H3BO3 62 620 ZnSO4