專題五DNA的粗提取與鑒定課件

1、5.1 DNA的粗提取與鑒定墅咨韭鴻兌唁綠精報緝傘立袱模郎畦爐亦踴勘蟹胺古戶銹掣信容獰咕訊芥專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第1頁，共32頁。1.通過嘗試對植物或動物組織中的DNA進(jìn)行粗提取，了解DNA的物理化學(xué)性質(zhì)。2.理解DNA粗提取與鑒定的原理。課題目標(biāo)(B)秸窯崗壇氟哄凰釁納鎢色皖歉淀皆肇近壟瑣禿災(zāi)湯勃寺鍛鑷平刀肖聾賣臆專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第2頁，共32頁。1.提取DNA的方法：（1）DNA的溶解性：【思考1】DNA在氯化鈉溶液中的溶解度有什么特點(diǎn)？對此有什么應(yīng)用？ 【思考2】利用什么原理可以來將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離開？ 一、基礎(chǔ)知識DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃

2、度的NaCl溶液中溶解度不同，利用這一特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。板竹郎海檸餒燴晃鐮吱弊犢停求限瘴害醉潑淚儀榆逗怨柄瀾烴律欺磁雅跪?qū)ｎ}五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第3頁，共32頁。（2）DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性：蛋白酶能水解 ，但對 沒有影響；大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受 的高溫，而DNA在 以上才會變性。 能夠瓦解細(xì)胞膜，但對DNA沒有影響。（3）DNA的鑒定：如何鑒定DNA？沸水浴條件下，DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色堡椒糖鴛袒港擻短晨揚(yáng)觀喂侵圾工鹽叮乾蔗欺崩巧橡停羅謊徘熱駭森

3、逮朽專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第4頁，共32頁。根據(jù)DNA在NaCl溶液中的溶解度曲線圖，思考在什么濃度下，DNA的溶解度最?。?DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何變化的？DNA在NaCl溶液中的溶解度曲線圖在NaCl溶液濃度低于0.14 mol/L時，DNA的溶解度隨NaCl溶液濃度的增加而逐漸降低；在0.14 mol/L時，DNA溶解度最??；當(dāng)NaCl溶液濃度繼續(xù)增加時，DNA的溶解度又逐漸增大。如何通過控制NaCl溶液的濃度使DNA在鹽溶液中溶解或析出？當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 molL時，DNA的溶解度比較大，濃度為 014 molL時，DNA的溶解度最低。利用這一原理，

4、可以使DNA在鹽溶液中溶解或析出。班拷阻藤送帥榔拖齊黍雹堡遜份瑪孝抬計棠韭西龔顴腥基類過叁陜面權(quán)吊專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第5頁，共32頁。樞攪沉媳讕椽嘻凌籬疽井襄驢溫攢襪下礫掏靳抖棍有膏鑿揀藤囊盂隅鞘弘專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第6頁，共32頁。（一）實(shí)驗(yàn)材料的選?。ǘ┢扑榧?xì)胞，獲取含DNA的濾液（三）除去濾液中的雜質(zhì)(純化)（四） DNA的析出與鑒定二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計拽眷面肢讀取律葡黎汞癥號賬枯鈣挨度跟系羌臃晚埔整于昔煥邀懸嬰澆娛專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第7頁，共32頁。（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取從下列材料中選取23種原則：魚卵、豬肝、菜花、香蕉、雞血、哺乳動物的紅細(xì)胞、

5、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但選用DNA含量相對較高的生物組織，成功的可能性更大支箍肉硅爽浩俺項退稿嬌詐諾釣寶截院話迭盧驢柒炊煽非婆擺枯窗信啪謄專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第8頁，共32頁。思考：(1)教材中選取雞血作為實(shí)驗(yàn)材料，有什么優(yōu)點(diǎn)？(2）獲取的雞血可以直接使用嗎？一真核生物，DNA都在染色體上二是因?yàn)殡u血細(xì)胞核大，DNA含量豐富，材料易得；三不要去除細(xì)胞壁，不可以，方法：0.1 g/mL的檸檬酸鈉溶液100 mL，置于500 mL燒杯中，+新鮮的雞血（約180 mL），同時用玻璃棒攪拌，使血液與檸檬酸鈉溶液充分混合，

6、以免血液凝結(jié)。 羔袁毀賤抓媳美瓦啦莫吟郝稈窄慶卒典談仰遲區(qū)束邪巢登稻匆臣勒躁拾靜專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第9頁，共32頁。伶邏芝徘蔚婿繃苗瀉侖涂甄臘蔭比膜鑷駐卡橙刁慰肉虧囚撿畝齋秀宏糞玖專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第10頁，共32頁。1.必修一學(xué)習(xí)的質(zhì)壁分離，你還記得方法和原理嗎?2.雞血細(xì)胞溶液： （二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液加入一定量的蒸餾水，同時用玻璃棒沿同一個方向攪拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA。過濾后收集濾液。方法：一般510 mL的雞血細(xì)胞液加入20 mL蒸餾水?dāng)嚢? min。釋放出來的大量DNA和RNA往往與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，應(yīng)用紗布進(jìn)行過濾，除去一些

7、顆粒較大的雜質(zhì)。涕闊臼懼伐買琴點(diǎn)哮函崔幕罪灌鴨顧那蕊換飄呢釋桅懦圃骯看功含賜封怎專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第11頁，共32頁。小景捉老粳裳駐涅餞春畸簿墩票訂疹碎疏堂父笛踴棋捕缺瘡擒閏柵吧投己專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第12頁，共32頁。思考：（1）可以用濾紙嗎？（2）此步驟獲得濾液的成分有哪些？DNA在哪里。不可以，孔徑太小。需要用到紗布，除去一些顆粒較大的雜質(zhì)，獲得含有DNA的濾液。釋放出來的大量DNA和RNA往往與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，應(yīng)進(jìn)行過濾，除去一些顆粒較大的雜質(zhì)。DNA在濾液里。嵌逞服抬葛巨茫擾租傈塊周餅參瑞瘡且蓬秦廉屁描聾市卞朝慈詭核貿(mào)盞侶專題五DNA的粗提取與鑒定教

8、學(xué)課件第13頁，共32頁。想一想：洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？洗滌劑離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，利于DNA釋放食 鹽NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中（3）對于動物細(xì)胞我們可以利用細(xì)胞的滲透壓來破碎細(xì)胞，但是很多情況下，人們不得不面對植物材料，那么我們是不是還可以通過加入一定量的蒸餾水來漲破細(xì)胞呢？通過研磨來破碎植物細(xì)胞的細(xì)胞壁。在研磨的過程中，一般還會加入洗滌劑和食鹽。跪忙光奇犬酞瘧揪陽間裳倒溢苔湛滿匹督執(zhí)岡舞諺岡得盆烤唆射頭肝孜匣專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第14頁，共32頁。經(jīng)研磨可破碎細(xì)胞壁，使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放。若研磨不充分，會使提取的DNA量變少，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用

9、二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。想一想：研磨的目的是什么，如果研磨不充分，會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？相面攢碎專海胃旨祁蛙名墻虞餅定漂灑隕亡澇碗勵久殷沸繡遷殿巢液氫撒專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第15頁，共32頁。1. DNA的溶解性2. DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性（三）除去濾液中的雜質(zhì)碎盼唉拒疏陣嗣苯攘挪窄亨浪其租乒終彩稗就胯束甄蹦孵虞鬃秸尿艙冪滲專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第16頁，共32頁。（1）溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA在濃度較高的NaCl溶液中核蛋白容易解聚，游離出的DNA溶解在溶液中。方法：在溶液中加入兩倍體積的濃度為2 mol/L的NaCl溶液，攪拌1 min。注意應(yīng)沿一個方

10、向攪拌，使DNA充分溶解。（2） DNA的析出 加蒸餾水降低NaCl溶液濃度，使DNA析出。方法：實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該緩慢貼壁加入蒸餾水，并輕輕地沿一個方向不停地均勻攪拌，以利于DNA分子的附著和纏繞。同時應(yīng)注意控制加水量，使NaCl溶液的終濃度為0.10.2 mol/L。加水過程一般分三次進(jìn)行，當(dāng)總加水量為300 mL左右時，DNA已基本析出。加水太多、溶液過稀，會使DNA分子又重新溶解。用34層紗布對DNA稀釋液進(jìn)行過濾，濾去蛋白質(zhì)，收集DNA的黏稠物。如果采用離心法，效果更好。用4 000 r/min轉(zhuǎn)速的離心機(jī)，離心15 min，除去上清液(含有蛋白質(zhì))，留下的沉淀物中含有DNA。此時注意觀察D

11、NA黏稠物的顏色。俄訓(xùn)跨過瘍甸碴褪美掐蛛攻峨羞娟明粉寸羽瘍窄藉娘習(xí)恢漲世寄齊操兆喪專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第17頁，共32頁。（3）將DNA黏稠物再溶解， 繼續(xù)用2 mol/L的NaCl溶液20 mL溶解DNA黏稠物，仍舊沿一個方向不停攪拌3 min，使DNA充分溶解，以免損失。用34層紗布進(jìn)行過濾（或離心），濾去雜質(zhì)，收集含有DNA的濾液。 思考：為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)?用高濃度的鹽溶液溶解DNA，去除在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去在鹽溶液中的雜質(zhì)。因此通過反復(fù)的溶解與析出DNA，就能去除與DNA溶解度不同的雜質(zhì)。敬鞘塔戚娩詫卵趴宗倦雪厚

12、間藩戲悅幕炯郝眉敖贈煌馭規(guī)燃革負(fù)珍代興腋專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第18頁，共32頁。2mol/L廂講陡曹錠嫌犢邱蝎絢紹多博居褂掄賃地靛浴它淡側(cè)躥倒躲軟勸呸處右口專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第19頁，共32頁。過濾取紗布上的濾物紗布過濾再次溶解DNA2mol/LNaCl溶液痛闡秒釁還瀾撼法莢賣晰卑匯飄錘防犬胺魚胺蔗蔭昨屁浩優(yōu)沃請餓孰慣互專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第20頁，共32頁。思考：方案二與方案三的原理有什么不同？方案二利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離 波誰幅焚糯蜘潮賭

13、低憶眷痞貧昌鋇昂快霄股涌負(fù)藝刃塔突設(shè)現(xiàn)爍能棄掖憑專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第21頁，共32頁。（四） DNA的析出與鑒定向?yàn)V液中貼壁緩慢加入50mL預(yù)冷的體積份數(shù)為95%乙醇，并用玻璃棒朝一個方向緩慢、均勻地攪拌，溶液中會出現(xiàn)DNA絲狀物。1、DNA的初步純化莫鯉接妻啦遭戚昭委線吼埔為秸伯證廢欄眨妻瞻計端核估氖曾蛇鵬扯浮群專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第22頁，共32頁。思考：為什么加入預(yù)冷的酒精？預(yù)冷的乙醇溶液具有以下優(yōu)點(diǎn)。1.抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解2.降低分子運(yùn)動，易于形成沉淀析出3.低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷裂 2. DNA的鑒定：二苯胺法 在沸水浴的

14、條件下，DNA遇二苯胺變藍(lán)。溶解：在物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5mL，放入絲狀物，用玻璃棒攪拌，使之溶解。顯色：加入4mL的二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min。設(shè)置對照組：在5mL體積的2mol/L的NaCl溶液中加入4mL的二苯胺試劑，置于沸水中加熱5min。 羔嘶抗典竊末癥隸濃硅歉妙從摳淫漫逃訣星任跌販藏夾芬?guī)X朱望蛤訛矣逸專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第23頁，共32頁。加冷酒精使DNA析出（純化）冷酒精DNA的鑒定粕既畔柄廊慨域飲川斂剪殖洋勃琴句痔絞縫瞪嗣兩改散西尚癌籮錨青柳絹專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第24頁，共32頁。方法步驟 加入物質(zhì) 目

15、的 1.制備雞血細(xì)胞液 檸檬酸鈉溶液 2.提取雞血細(xì)胞細(xì)胞核物質(zhì) 20 m1蒸餾水 3.溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA 2 mo1 L 的 NaCl 溶液 40 mL 4.析出含DNA的黏稠物 蒸餾水 5.濾取含DNA的黏稠物 6.將DNA的黏稠物再溶解 2 molL的NaCl溶液20 mL 7.過濾含DNA的NaCl溶液 8.提取含有雜質(zhì)較少的DNA 冷卻的95的酒精50 mL A:(1)向試管中加入2molL的NaCl溶液5mL (2)加入DNA (3)4 mL二苯胺試劑 9.DNA的鑒定 B:(1)向試管中加入 2molL 的NaCl溶液5mL (2)4 mL二苯胺試劑 策飛那謂筑銘螺咨梗潔逐舔總

16、蜘柑卒百乖返拿讀啤茄革喘燎輕業(yè)志琉拎誠專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第25頁，共32頁。加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固加速血細(xì)胞破裂 溶解DNA 使2mol/L的NaCl溶液稀釋至0.14mol/L使得DNA最大限度地釋出 使含DNA的黏稠物被留在紗布上使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中除去含DNA的濾液中的雜質(zhì)提取DNA A出現(xiàn)藍(lán)色 B無變化玻茶任邢櫥鎳毫紐羚安蔬韶繕鴉敖丈鋪?zhàn)g純妻禽賦悲哀別謹(jǐn)侗牌刻幢試秒專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第26頁，共32頁。真題練習(xí)（2012.18）下列關(guān)于“DNA粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)”的敘述，正確的是A洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜并增加DNA在NaCl溶液

17、中的溶解度B將DNA絲狀物放入二苯胺試劑中沸水浴后冷卻變藍(lán)C常溫下菜花勻漿中有些酶類會影響DNA的提取D用玻棒緩慢攪拌濾液會導(dǎo)致DNA獲得量減少逞殼恃公媽容卜斡輥覽倪磅信貼歸榮燦滌隔燕瘓即琺獄竄塞狄瞪夢群薪意專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第27頁，共32頁。（2011.19）在利用雞血進(jìn)行“DNA的粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)中，相關(guān)敘述正確的是A用蒸餾水將NaCl溶液濃度調(diào)至0.14 mol/L，濾去析出物B調(diào)節(jié)NaCl溶液濃度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分雜質(zhì)C將絲狀物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺試劑即呈藍(lán)色D用菜花替代雞血作為實(shí)驗(yàn)材料，其實(shí)驗(yàn)操作步驟相同擔(dān)且車攪辨渤筋啼

18、面眼哆略冷變蛔尹淋舶拿郁脊耘饅赤昔圍酶奈疲茨汾餐專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第28頁，共32頁。觀察你提取的DNA顏色，如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多；二苯胺鑒定出現(xiàn)藍(lán)色說明實(shí)驗(yàn)基本成功，如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能所提取的DNA含量低，或是實(shí)驗(yàn)操作中出現(xiàn)錯誤，需要重新制備三、課題成果評價（一）是否提取出了DNA（二）用不同的實(shí)驗(yàn)材料和方法絡(luò)楞墅壬夠菇奴槍直睫鐐纖鍵蹄娛潔粥魯抽摯敏契埠形腔跺抉糊助淚忽磐專題五DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件第29頁，共32頁。（2010.32）(7分)某生物興趣小組開展DNA粗提取的相關(guān)探究活動。具體步驟如下：材料處理：稱取新鮮的花菜、辣椒和蒜黃各2份每份l0 g。剪碎后分成兩組，一組置于20、另一組置于一20條件下保存24 h。DNA粗提?。旱谝徊剑簩⑸鲜霾牧戏謩e放人研缽中，各加入l5 mL研磨液，充分研磨。