臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)(1)課件

1、 安岳縣檢驗(yàn)學(xué)會(huì)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn) 安岳縣中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科 袁國(guó)平 第1頁(yè)，共57頁(yè)。分析前的質(zhì)量控制要點(diǎn)有哪些？在選購(gòu)全自動(dòng)生化分析儀時(shí),應(yīng)重點(diǎn)了解哪些基本知識(shí)?如何選擇校準(zhǔn)物質(zhì)?校準(zhǔn)方法?校準(zhǔn)頻率?全自動(dòng)生化分析儀常見(jiàn)的交叉污染的原因?第2頁(yè)，共57頁(yè)。分析前的質(zhì)量控制要點(diǎn)有哪些?第3頁(yè)，共57頁(yè)。生化檢驗(yàn)過(guò)程的三階段I 分析前醫(yī)生接診，開(kāi)檢驗(yàn)申請(qǐng)單患者準(zhǔn)備（生理特征、狀態(tài)）標(biāo)本采集、標(biāo)本運(yùn)送標(biāo)本處理 II 分析中 標(biāo)本檢測(cè) III 分析后結(jié)果審核、報(bào)告發(fā)出對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的正確評(píng)價(jià)和解釋第4頁(yè)，共57頁(yè)。分析前：是指從臨床醫(yī)生開(kāi)出檢驗(yàn)單開(kāi)始，到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)入分析檢驗(yàn)的這一段過(guò)程。包括檢驗(yàn)申請(qǐng)、患者準(zhǔn)備

2、、原始樣品的采集、運(yùn)送和實(shí)驗(yàn)室預(yù)處理等步驟。第5頁(yè)，共57頁(yè)。一、實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)分析前：68.2%分析中：13.3%分析后：18.5% 74%未對(duì)病人造成不良影響19%造成對(duì)病人做進(jìn)一步的檢查6.4%造成對(duì)病人的治療方案修改 Clinical Chemistry 1977,43(8):13481351第6頁(yè)，共57頁(yè)。重要性分析前質(zhì)量管理是一個(gè)最薄弱的環(huán)節(jié)，影響檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量占60%以上從“檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)”的要求來(lái)看，檢驗(yàn)不能只考慮分析階段的質(zhì)量保證，還必須重視和參與分析前的質(zhì)量保證分析前因素對(duì)臨床檢驗(yàn)結(jié)果影響 第3版人民衛(wèi)生出版社第7頁(yè)，共57頁(yè)。第二章 第十五條醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有分析前質(zhì)量保證措施

3、制定患者準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、標(biāo)本儲(chǔ)存、標(biāo)本運(yùn)送、標(biāo)本接收等標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程目的：確保檢驗(yàn)前程序處于受控狀態(tài)衛(wèi)生部文件衛(wèi)生部關(guān)于印發(fā)醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法的通知第8頁(yè)，共57頁(yè)。1、患者準(zhǔn)備控制的要點(diǎn)不可變的生物因素： 年齡、性別、種族等 生理節(jié)律變化（日周期、月周期、妊娠、季節(jié)、海拔）可變的生物因素： 情緒、運(yùn)動(dòng)、飲食、飲酒、藥物其他 如采取標(biāo)本時(shí)：體位、止血帶等第9頁(yè)，共57頁(yè)。1.患者準(zhǔn)備控制的要點(diǎn)作好解釋工作 即向患者說(shuō)明作該項(xiàng)檢驗(yàn)的目的及注意事項(xiàng)，消除在抽血時(shí)的恐懼和緊張。避免飲食、藥物的影響盡力爭(zhēng)取患者的協(xié)助 特別是餐后2h血糖或糖耐量實(shí)驗(yàn)，要告之方法、注意事項(xiàng)。第10頁(yè)，共57頁(yè)。2、

4、血液標(biāo)本的采集第11頁(yè)，共57頁(yè)。采 血 順 序 血培養(yǎng)凝血像肝功免疫急診生化 血常規(guī)血沉 根據(jù)CLSI H3-A5文件第12頁(yè)，共57頁(yè)。 最佳采樣時(shí)間的選擇晨起空腹時(shí)或者禁食12h 能減少晝夜節(jié)律帶來(lái)的影響 患者處于平靜狀態(tài)，減少由于運(yùn)動(dòng)帶來(lái)的影響 減少飲食的影響 易于與正常參考范圍作比較檢出陽(yáng)性率最高的時(shí)間：如血培養(yǎng)對(duì)診斷最有價(jià)值的時(shí)間：如餐后2h血糖第13頁(yè)，共57頁(yè)。采集部位靜脈穿刺 采血部位:常選擇肘靜脈或頸靜脈 應(yīng)該在非水腫,非炎癥部位采血 同時(shí)不能在任何輸液的“下游”采血 電解質(zhì)(鈉、鉀、氯結(jié)果錯(cuò)誤） 葡萄糖（葡萄糖濃度升高） 輸血（血紅蛋白結(jié)果錯(cuò)誤）第14頁(yè)，共57頁(yè)?；颊咦R(shí)

5、別 標(biāo)本采集前應(yīng)核實(shí)患者身份 口頭確認(rèn)、腕帶掃描 問(wèn)題：確認(rèn)患者姓名是由護(hù)士發(fā)問(wèn)還是患者自報(bào)名字？ ？第15頁(yè)，共57頁(yè)。避免溶血顯性溶血：當(dāng)血紅素等于或者大于300mg/L時(shí) 能肉眼觀察到。非顯性溶血：肉眼觀察不到的溶血。第16頁(yè)，共57頁(yè)。溶血標(biāo)本 項(xiàng) 目 紅細(xì)胞/血漿 溶血標(biāo)本/正常標(biāo)本 氯 0.50 1.05 鉀 22.7 1.91 磷 0.78 -2.64 鈣 0.10 0.96 ALT 6.7 2.2 AST 40.0 3.59 LDH 180.0 8.04 CK 100 14.08 Cr 1.63 1.94 UA 0.55 0.50 Glu 0.82 0.91 BUN 0.82

6、1.14第17頁(yè)，共57頁(yè)?？鼓齽┑倪x擇及影響EDTA、NaF、草酸鹽等不能用于鈣離子測(cè)定含有K、Na離子的抗凝劑不能用于測(cè)定K、Na離子標(biāo)本的抗凝草酸鹽、氟化物不能用于酶法測(cè)定 草酸鹽可抑制Amy、Acp、LDH的活性 氟化物可激活尿素酶、淀粉酶等凝血因子檢測(cè)用枸櫞酸鈉抗凝優(yōu)于草酸鹽第18頁(yè)，共57頁(yè)。3、標(biāo)本的唯一標(biāo)志性標(biāo)本容器的標(biāo)簽上至少應(yīng)注明下列內(nèi)容： 患者姓名及病歷號(hào) 送檢科別及病床號(hào) 送檢標(biāo)本名稱及量 檢驗(yàn)項(xiàng)目 采集標(biāo)本的時(shí)間 唯一條碼號(hào) 防止張冠李戴第19頁(yè)，共57頁(yè)。4、標(biāo)本的拒收下列情況可拒收（各臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有規(guī)定） 溶血、脂血嚴(yán)重者（視病情而定） 抗凝血中有凝塊；該抗凝未加

7、抗凝劑者 血量不足（如血沉、PT等） 不應(yīng)接觸空氣的接觸了空氣 標(biāo)本采集與送檢時(shí)間間隔過(guò)長(zhǎng)者 該加防腐劑未加防腐劑者 用錯(cuò)真空采血管者 唯一性標(biāo)識(shí)錯(cuò)誤或不清楚者第20頁(yè)，共57頁(yè)。案例分析檢測(cè)項(xiàng)目 結(jié)果 參考范圍 單位 鉀 23.7 3.5-5.5 mmol/L ALP -2 40-120 U/L 鈣 0.30 2.10-2.60 mmol/L其他項(xiàng)目正常第21頁(yè)，共57頁(yè)。原因護(hù)士采血用的真空管拿錯(cuò),用的EDTA-K3采的生化標(biāo)本，然后倒進(jìn)生化用管中。真空管含鉀；血漿中的鈣離子被熬合。 不二過(guò)，不諉過(guò)第22頁(yè)，共57頁(yè)。 在選購(gòu)全自動(dòng)生化分析儀的時(shí)候， 應(yīng)重點(diǎn)了解哪些基本知識(shí)？第23頁(yè)，共5

8、7頁(yè)。一、自動(dòng)生化分析儀簡(jiǎn)介概念：是將臨床化學(xué)分析過(guò)程中的加樣過(guò)程中的加樣、加試劑、混合、孵育反應(yīng)、檢測(cè)、結(jié)果計(jì)算、打印及實(shí)驗(yàn)后清洗等步驟進(jìn)行自動(dòng)化操作的儀器具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、標(biāo)準(zhǔn)化、微量等特點(diǎn)第24頁(yè)，共57頁(yè)。自動(dòng)生化分析儀分類(lèi)按反應(yīng)裝置的結(jié)構(gòu)： 連續(xù)流動(dòng)式、離心式、分立式、干片式按自動(dòng)化程度 全自動(dòng)型、半自動(dòng)型按同時(shí)可測(cè)項(xiàng)目 單通道、多通道按儀器的復(fù)雜程度及功能 小型、中型、大型第25頁(yè)，共57頁(yè)。生化分析儀的常用技術(shù)光譜分析技術(shù) a.免疫比濁法 b.紫外可見(jiàn)分光光度法 終點(diǎn)分析法、連續(xù)監(jiān)測(cè)法 c.反射光度法第26頁(yè)，共57頁(yè)。紫外可見(jiàn)分光光度法概念： 是利用某些物質(zhì)的分子吸收

9、200-800nm光譜區(qū)的輻射來(lái)進(jìn)行分析測(cè)定的方法?？梢?jiàn)紫外光的范圍： 紫外光的范圍：200400nm 可見(jiàn)光的范圍：400760nm第27頁(yè)，共57頁(yè)。光吸收的基本定律：朗伯比爾定律定義：當(dāng)一束平行單色光垂直同過(guò)某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時(shí)，其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度C及吸收層厚度b成正比。用途：化學(xué)法及酶學(xué)終點(diǎn)法的測(cè)定。 A= -logT=Kb c A：為吸光度 K：摩爾吸光系數(shù) b: 液層厚度（光徑） c: 吸收物質(zhì)的濃度第28頁(yè)，共57頁(yè)。透射比濁法在光源的光路方向上測(cè)量透射光強(qiáng)度與 人射光強(qiáng)度的比值和膠體溶液中質(zhì)點(diǎn)間 的關(guān)系稱為透射比濁法第29頁(yè)，共57頁(yè)。比色分析：反應(yīng)類(lèi)型直接測(cè)量：

10、 具有特征性的吸收峰，不經(jīng)任何反應(yīng)直接在指定波長(zhǎng)測(cè)量單一反應(yīng)： 待測(cè)反應(yīng)本身有特征性吸收峰的底物或產(chǎn)物量的變化偶聯(lián)反應(yīng)： 底物或產(chǎn)物無(wú)特征性吸收峰，需經(jīng)過(guò)其他反應(yīng)生成有特征性吸收峰測(cè)量的化合物。這種反應(yīng)稱為指示反應(yīng)第30頁(yè)，共57頁(yè)。比色分析：干擾因素溶血：血紅蛋白及其它內(nèi)容物的釋放黃疸：影響光度測(cè)量脂血：干擾光度測(cè)量，污損管路第31頁(yè)，共57頁(yè)。二、指示反應(yīng)及波長(zhǎng)常見(jiàn)的指示反應(yīng) 脫氫酶系統(tǒng)（ALT、AST、LDH、CK） NADH或NADPH作底物或產(chǎn)物用340nm/405nm 硝基苯衍生物系統(tǒng)（ALP、GGT、AMY） 硝基苯衍生物的用405/476nm 過(guò)氧化物酶系統(tǒng)（GIU、UA、CH

11、O/HDL/LDL） Trinder反應(yīng)多用520/600nm,550/660nm第32頁(yè)，共57頁(yè)。三、生化分析的檢測(cè)方法 終點(diǎn)分析法：一點(diǎn)終點(diǎn)法，兩點(diǎn)終點(diǎn)分析法 固定時(shí)間法 連續(xù)監(jiān)測(cè)法：兩點(diǎn)速率法，多點(diǎn)速率法第33頁(yè)，共57頁(yè)。1、終點(diǎn)法一點(diǎn)終點(diǎn)法：當(dāng)待測(cè)物質(zhì)與試劑的反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)，測(cè)定吸光度，計(jì)算待測(cè)物的濃度優(yōu)點(diǎn)：吸光度穩(wěn)定，對(duì)溫度、時(shí)間和顯色劑用量要求不高不足：反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)測(cè)定項(xiàng)目：TP、Alb、Mg第34頁(yè)，共57頁(yè)。1、終點(diǎn)法兩點(diǎn)終點(diǎn)法： 在被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)或指示反應(yīng)尚未開(kāi)始時(shí)，選擇第一個(gè)吸光度，在反應(yīng)到達(dá)平衡時(shí)選擇第二個(gè)吸光度，此兩點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算結(jié)果。能減少溶血、黃疸和脂濁等造成

12、的干擾測(cè)定項(xiàng)目：TP、Alb、Mg第35頁(yè)，共57頁(yè)。2、固定時(shí)間法指在時(shí)間吸光度曲線上取尚在反應(yīng)中的兩點(diǎn)間的差值來(lái)計(jì)算結(jié)果。此兩點(diǎn)即不是反應(yīng)的起點(diǎn)也不是終點(diǎn)。該分析方法有助于解決某些反應(yīng)的非特異性問(wèn)題測(cè)定項(xiàng)目：Crea苦味酸法第36頁(yè)，共57頁(yè)。3、動(dòng)力法（連續(xù)監(jiān)測(cè)法）動(dòng)力學(xué)法：在零級(jí)反應(yīng)期連續(xù)測(cè)定酶促反應(yīng)過(guò)程中的底物或產(chǎn)物量的變化，求出酶反應(yīng)初速度，間接計(jì)算出酶活力濃度主要用于酶活性及其代謝產(chǎn)物的測(cè)定測(cè)定結(jié)果較終點(diǎn)法準(zhǔn)確不需要終止反應(yīng)第37頁(yè)，共57頁(yè)。四、自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu) 樣品及運(yùn)送系統(tǒng) 試劑系統(tǒng) 檢測(cè)系統(tǒng) 清洗及管路系統(tǒng) 微機(jī)管理系統(tǒng)第38頁(yè)，共57頁(yè)。如何選擇校準(zhǔn)物質(zhì)？校準(zhǔn)方法？

13、校準(zhǔn)頻率？第39頁(yè)，共57頁(yè)。校準(zhǔn)的定義校準(zhǔn)是一個(gè)測(cè)試和調(diào)整儀器、試劑或檢測(cè)系統(tǒng)以提供 檢驗(yàn)反應(yīng)和所測(cè)物質(zhì)之間的已知關(guān)系的過(guò)程校準(zhǔn)決定在規(guī)定范圍內(nèi)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性第40頁(yè)，共57頁(yè)。校準(zhǔn)物質(zhì)的選擇傳統(tǒng)的臨床檢驗(yàn)，要使檢驗(yàn)結(jié)果可靠或有依據(jù)，往往有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品為了克服純標(biāo)準(zhǔn)液和患者樣品間的基體差異，20年前開(kāi)始引用具有與患者樣品基質(zhì)相似的校準(zhǔn)品替代標(biāo)準(zhǔn)品，用于日常工作 什么是校準(zhǔn)品？第41頁(yè)，共57頁(yè)。校準(zhǔn)物質(zhì)的選擇SFDA批準(zhǔn)生產(chǎn)和注冊(cè)登記的儀器、試劑和檢測(cè)系統(tǒng) 實(shí)驗(yàn)室使用制造商規(guī)定的校準(zhǔn)品當(dāng)使用SFDA未審批的方法時(shí) 選擇合適的（配套的）標(biāo)準(zhǔn)品/校準(zhǔn)品 如有可能，校準(zhǔn)品應(yīng)能溯源到參考方法

14、或參考物質(zhì)第42頁(yè)，共57頁(yè)。校準(zhǔn)頻率根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目方法和試劑的穩(wěn)定性不同而定 每日校準(zhǔn) CO2 ISE 每周校準(zhǔn) 試劑不穩(wěn)定的特殊項(xiàng)目 每月校準(zhǔn) 大部分生化項(xiàng)目（21天左右） 每?jī)稍滦?zhǔn) 特殊項(xiàng)目 所有項(xiàng)目至少每六個(gè)月校準(zhǔn)一次第43頁(yè)，共57頁(yè)。如有下列情況發(fā)生時(shí)，必須進(jìn)行校準(zhǔn)改變?cè)噭┑姆N類(lèi)，或者批號(hào)改變儀器或者檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行了一次大的預(yù)防性維護(hù)不或者更換了重要部件質(zhì)控反映出異常的趨勢(shì)或偏移，或者超出了實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的接受限，采取一般性糾正措施后，不能識(shí)別和糾正問(wèn)題時(shí)第44頁(yè)，共57頁(yè)。校準(zhǔn)方法 K因數(shù)法（一點(diǎn)線形法）兩點(diǎn)線性多點(diǎn)線性（非線性法）第45頁(yè)，共57頁(yè)。1、K因數(shù)法（一點(diǎn)法）由空白液的標(biāo)

15、準(zhǔn)（C1）和通過(guò)公式計(jì)算得出的K因數(shù)制成的曲線K因數(shù)法測(cè)定C1（試劑空白）的吸光度時(shí)，先輸入K值再計(jì)算濃度值： CX=（AXB）+C1分析項(xiàng)目：適用各種酶活性的測(cè)定第46頁(yè)，共57頁(yè)。2、兩點(diǎn)線性法由空白液和含有一定濃度標(biāo)準(zhǔn)液的標(biāo)準(zhǔn)（2）的兩點(diǎn)吸光度繪制的曲線此法適用所有的分析方法包括1點(diǎn)法、2點(diǎn)速率法和速率法分析項(xiàng)目：TP、ALB、TC、TG、Urea、Crea等第47頁(yè)，共57頁(yè)。3、非線性法可以使用36種濃度標(biāo)準(zhǔn)物，在選定波長(zhǎng)測(cè)定出各自的吸光度，利用濃度和吸光度之間的關(guān)系繪制成非線性標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定（C1Cn標(biāo)準(zhǔn)液）的吸光度BAn。儀器采用Logit-Log進(jìn)行擬合式的計(jì)算出曲線各常數(shù)分析項(xiàng)

16、目：常為免疫項(xiàng)目，CRP、ASO、RF等第48頁(yè)，共57頁(yè)。全自動(dòng)生化分析儀常見(jiàn)交叉污染的原因？第49頁(yè)，共57頁(yè)。比色分析：交叉污染測(cè)試項(xiàng)目A 試劑針，比色杯等試劑和樣品成分殘留干擾下一個(gè)測(cè)試項(xiàng)目B第50頁(yè)，共57頁(yè)。交叉污染的原因多項(xiàng)目，多樣本處理 處理能力的提高（高速化） 共有化樣本針試劑針比色杯攪拌棒交叉污染第51頁(yè)，共57頁(yè)。交叉污染的原因 不正確的清洗方法或清洗能力下降 （日常維護(hù)欠缺，儀器老化） 生化儀內(nèi)污垢的積聚 測(cè)試順序安排不當(dāng)?shù)?2頁(yè)，共57頁(yè)。試劑攜帶交叉污染 Amy試劑 鈣 ALP試劑 鎂、鈣 鎂試劑 鐵 含磷酸鹽的緩沖液 磷 膽固醇試劑 膽汁酸 過(guò)氧化物酶反應(yīng)系統(tǒng)的項(xiàng)目不能排列在一起，有交叉污染第53頁(yè)，共57頁(yè)。消除交叉污染的方法 測(cè)試順序的合理設(shè)置 試劑組成 測(cè)試原理