處理方法第二節(jié)定量分析方法的特點(diǎn)第三節(jié)藥品質(zhì)量

1、第四章 藥物定量分析 與分析方法驗(yàn)證第一節(jié) 定量分析樣品的前處理方法第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證第四節(jié) 生物樣品分析方法的基本要求第一節(jié) 定量分析樣品的前處理方法 不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（一）直接測(cè)定法（二）經(jīng)水解后測(cè)定法 直接回流后測(cè)定法（堿水解）含鹵素 硫酸水解后測(cè)定法含金屬 （三）經(jīng)氧化還原后測(cè)定法富馬酸亞鐵的含量測(cè)定原理Fe2+ + Ce4+ Ce3+ + Fe3+ Fe2+ + e-Fe3+紅色淺藍(lán)色OOCCHOHCCO+Fe2+直接回流后測(cè)定法方法：將含鹵素有機(jī)藥物溶于適當(dāng)溶劑（如乙醇）中，加入氫氧化鈉溶液

2、（或一定量過量的硝酸銀滴定液）后，加熱回流使其水解，將有機(jī)結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)的鹵素離子，然后采用銀量法（Volhard法）測(cè)定。適用范圍：含鹵素有機(jī)藥物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物（如鹵原子和脂肪碳原子相連者）例如：三氯叔丁醇的測(cè)定原 理 三氯叔丁醇在氫氧化鈉溶液中加熱回流水解，氯元素全部轉(zhuǎn)變成氯化鈉，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量過量的硝酸銀滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，過量的硝酸銀，以Fe3+為指示劑，用硫氰酸銨液回滴定。 CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH 回流(CH3)2-CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgN

3、O3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3（淡棕紅色）(Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010-12 )Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ 經(jīng)氧化還原后測(cè)定法方法：將含鹵素有機(jī)藥物在堿性或酸性下，加還原劑（如鋅粉）加熱回流，藥物產(chǎn)生還原裂解反應(yīng)，使有機(jī)結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)的鹵素離子，然后采用銀量法（Fajans法）測(cè)定。適用范圍：本法適用于測(cè)定結(jié)構(gòu)中碘與苯環(huán)直接相連，且一個(gè)苯環(huán)上含多個(gè)碘原子的含鹵素有機(jī)藥物。 例如：泛影酸和碘番酸的測(cè)定泛影酸碘番酸 堿性還原后測(cè)定法 酸性還原后測(cè)定法COOHINHCOCH3IIH3COCHN+

4、11NaOH + Zn回流COONaNH2 H2N+ 3NaI + 2CH3COONa+ 2Na2ZnO2 + H2O經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（一）濕法破壞 （二）干法破壞（三）氧瓶燃燒法濕法破壞硝酸-高氯酸法硝酸-硫酸法硫酸-硫酸鹽法其他濕法 干法破壞方法：灼燒灰化 注意事項(xiàng)：420 適用范圍 氧瓶燃燒法 將有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的欲測(cè)物質(zhì)吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，然后根?jù)欲測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定。特點(diǎn)：簡(jiǎn)便、快速、破壞完全。適用范圍：適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機(jī)藥物的分 析。尤其適用于微量樣品的分析。例如：操 作 燃燒瓶的準(zhǔn)備

5、：用洗液洗凈后，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定加入吸收液，將瓶口用水濕潤(rùn)，小心急速地通入氧氣1min，立即用表面皿覆蓋瓶口。 樣品的準(zhǔn)備：取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。 樣品的燃燒：點(diǎn)燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，俟燃燒完畢（應(yīng)無(wú)黑色碎片），充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗(yàn)。然后按各藥品項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定。第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn) 一 容量分析法 二 光譜分析法 三 色譜分析法容量分析法1 適用范圍2 注意3 計(jì)算（1）滴定度

6、（2）百分含量 光譜分析法（一）紫外分光光度法1 特點(diǎn) 2 儀器的校正和檢定3 對(duì)溶劑的要求4 測(cè)定方法（二）熒光分析法1 特點(diǎn)2 含量測(cè)定色譜分析法HPLC1 對(duì)儀器的一般要求2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)3 測(cè)定方法GC法1 對(duì)儀器的一般要求 2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)3 測(cè)定方法第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證 一 驗(yàn)證的目的 二 需驗(yàn)證的情況 三 需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目 四 驗(yàn)證的內(nèi)容 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的目的證明所用/建分析方法滿足檢測(cè)的要求 需驗(yàn)證的情況 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草時(shí) 藥物合成方法變更、制劑的組分變更、原 分析方法進(jìn)行修訂時(shí)驗(yàn)證過程和結(jié)果均需記入藥品標(biāo)準(zhǔn)起草說(shuō)明或修訂說(shuō)明中 采用標(biāo)準(zhǔn)時(shí)需驗(yàn)證的分

7、析項(xiàng)目1 鑒別試驗(yàn)2 雜質(zhì)定量或限度檢查；制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測(cè)定3 原料或制劑中有效成分含量測(cè)定；溶出度、釋放度等功能檢查中溶出量等的測(cè)定 驗(yàn)證的內(nèi)容（一） 準(zhǔn)確度（二） 精密度（三） 專屬性（四） 檢測(cè)限（五） 定量限（六） 線性（七） 范圍（八） 耐用性準(zhǔn)確度 accuracy 1 概念 2 含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度 3 雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度 準(zhǔn)確度 準(zhǔn)確度是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。 測(cè)定回收率（recovery）可采用“回收試驗(yàn)法”或“加樣回收試驗(yàn)法”。 規(guī)定范圍內(nèi)，至少制備高、中、低三個(gè)濃度的樣品各三個(gè)，用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)

8、準(zhǔn)確度。RSD應(yīng)在2%以內(nèi)。 回收試驗(yàn) 空白+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品） 測(cè)定值為M（測(cè)三次） 加樣回收試驗(yàn) 已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品） 測(cè)定值為M（測(cè)三次）精密度 precision 重復(fù)性 中間精密度 重現(xiàn)性精密度 在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。 精密度用偏差（d）與相對(duì)偏差（RD）、標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD、變異系數(shù)CV）表示。 重復(fù)性 在相同條件下，由同一分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度。 在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)。如制備三個(gè)不同濃度的樣品，各測(cè)三次；或把被測(cè)物濃度當(dāng)作100%，至少測(cè)定6次

9、。中間精密度同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間（日期）不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。 考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響。重現(xiàn)性不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。如：建立藥典分析方法時(shí)通過協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果。協(xié)同檢驗(yàn)的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在標(biāo)準(zhǔn)起草說(shuō)明中。 專屬性 specificity 指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在的情況下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。 是該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)相互干擾程度的量度。檢測(cè)限 limit of detection，LOD 1 非儀器分析目視法 2 儀器分析時(shí)的測(cè)定法 （1） 用紫外過分

10、光光度法和熒光分析法時(shí) （2） 用GC法和HPLC 法時(shí)檢測(cè)限 指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或量。 是一種限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，反映方法與儀器的靈敏度和噪音的大小，也表示樣品經(jīng)處理后空白（本底）值的高低。 常用%、ppm、ppb表示。非儀器分析目視法 用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。 信噪比法 把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。 一般以信噪比 S/N=3 或 S/N=2 時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。 用于能顯示基線噪音的分析方法。定量限 1imit of quantitation，LOQ 樣品中被測(cè)

11、物能被定量測(cè)定的最低量，此結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。 常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比 S/N=10時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量來(lái)確定。 也可用儀器所測(cè)空白背景響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差（SD）的10倍為估計(jì)值，再經(jīng)試驗(yàn)確定。 線 性 在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。 范 圍 指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。耐用性 指測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。 是衡量實(shí)驗(yàn)室和工作人員之間在正常情況下實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。第四節(jié) 生物樣品分析方法的基本要求一 常用樣品的種類、采集和貯藏二 生物樣品分析前處理技術(shù)定量分析方法驗(yàn)證 常用樣品的種類、采集和貯藏（一）血樣（血漿、血清、全血）（二）唾液（三）尿液生物樣品分析前處理技術(shù)（一）去除蛋白質(zhì)（二）綴合物的水解（三）分離、純化與濃集（四）化學(xué)衍生化 選擇生物樣品分析前處理技術(shù)需考慮的因素生物樣品的類型：