乙肝表面抗原及乙肝兩對(duì)半檢測(cè)課件

1、乙肝表面抗原及乙肝兩對(duì)半檢測(cè)(ppt)（優(yōu)選）乙肝表面抗原及乙肝兩對(duì)半檢測(cè)檢測(cè)的方法及原理檢測(cè)方法及原理膠體金免疫層析法Part 1 膠體金免疫層析法 將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí)待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測(cè)帶上，可通過(guò)肉眼觀察到顯色結(jié)果。檢測(cè)方法及原理膠體金免疫層析法Part 2酶免疫技術(shù) 以酶標(biāo)記的抗體（或抗原）作為主要試劑，將抗原抗體的特異性和酶高效催化反應(yīng)的專

2、一性相結(jié)合的一種免疫檢測(cè)技術(shù)。酶結(jié)合物既保留抗體（或抗原）的免疫學(xué)活性，又保留酶對(duì)底物的催化活性。特點(diǎn)：靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好、試劑穩(wěn)定、方法簡(jiǎn)便易行檢測(cè)方法及原理Part 2兩對(duì)半ELISA檢測(cè)原理 ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分

3、子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。檢測(cè)方法及原理Part 2兩對(duì)半ELISA檢測(cè)原理 1 HBsAg：雙抗體夾心法 正比 單克隆HBsAbHBsAg多克隆HBsAbHRP 2 HBsAb：雙抗原夾心法 正比 HBsAgHBsAbHBsAgHRP 檢測(cè)原理Part 2兩對(duì)半ELISA檢測(cè)原理 3 HBeAg：雙抗體夾心法 正比 單克隆HBeAbHBeAg多克隆HBeAbHRP 4 HBeAb：競(jìng)爭(zhēng)抑制法 反比 多克隆HBeAbHBeAgHBeAbHRP / HBeAb（標(biāo)本） 5 HBcAb：競(jìng)爭(zhēng)抑制法 反比 HBcAgHBcAbHRP / H

4、BcAb（標(biāo)本）檢測(cè)方法及原理Part 3免疫定量分析方法 近年來(lái)，隨著抗病毒藥物的不斷問(wèn)世，以及抗病毒藥物療效與乙肝病毒及其血清標(biāo)志物水平之間關(guān)系的相關(guān)研究不斷深入，單純HBsAg定性檢測(cè)在療效的監(jiān)測(cè)，特別是根據(jù)其早期變化對(duì)遠(yuǎn)期療效進(jìn)行預(yù)測(cè)方面，顯得越來(lái)越難以滿足要求。而且，很多學(xué)者對(duì)一些新藥上市注冊(cè)臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，HBsAg的定量檢測(cè)在抗病毒治療療效的監(jiān)測(cè)方面確有非常重要的意義。因此，HBsAg的定量檢測(cè)就顯得十分重要。檢測(cè)方法及原理Part 3免疫定量分析方法 要想完成HBsAg定量檢測(cè)，必須滿足以下條件： 采用自動(dòng)分析系統(tǒng)， 有可溯源的標(biāo)準(zhǔn)品， 測(cè)定結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品之間有線性關(guān)系

5、。檢測(cè)方法及原理Part 3免疫定量分析方法 化學(xué)發(fā)光技術(shù)是近二十年來(lái)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析技術(shù)。 化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（Chemiluminesent Immunoassay，CLIA）是免疫測(cè)定技術(shù)繼酶免技術(shù)（EIA）、放免技術(shù)（RIA）、熒光免疫技術(shù)（FIA）之后發(fā)展的一項(xiàng)新興測(cè)定技術(shù)。由于這種測(cè)定具備很高的特異性和很小的干擾，因此，如同RIA、FIA等一樣利用免疫反應(yīng)的特異性和化學(xué)發(fā)光本身的信號(hào)特異性形成了目前所說(shuō)的化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（CLIA）技術(shù)。檢測(cè)方法及原理Part 3免疫定量分析方法 原理： 化學(xué)發(fā)光免疫分析儀是通過(guò)檢測(cè)患者血清從而對(duì)人體進(jìn)行免疫分析的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)儀器。將定量的

6、患者血清和辣根過(guò)氧化物（HRP）加入到固相包被有抗體的白色不透明微孔板中，血清中的待測(cè)分子與辣根過(guò)氧化物酶的結(jié)合物和固相載體上的抗體特異性結(jié)合。分離洗滌未反應(yīng)的游離成分。然后，加入魯米諾Luminol發(fā)光底液 ，利用化學(xué)反應(yīng)釋放的自由能激發(fā)中間體，從基態(tài)回到激發(fā)態(tài)，能量以光子的形式釋放。此時(shí)，將微孔板置入分析儀內(nèi)，通過(guò)儀器內(nèi)部的三維傳動(dòng)系統(tǒng)，依次由光子計(jì)數(shù)器讀出各孔的光子數(shù)。樣品中的待測(cè)分子濃度根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品建立的數(shù)學(xué)模型進(jìn)行定量分析。最后，打印數(shù)據(jù)報(bào)告，以輔助臨床診斷。方法步驟 實(shí)驗(yàn)步驟 備注：因各廠家生產(chǎn)試劑操作方法不同，故參見(jiàn)試劑盒說(shuō)明書(shū)結(jié)果判斷及臨床意義一、結(jié)果判斷結(jié)果判斷Part 1膠體

7、金免疫層析法結(jié)果判斷 以艾康生物檢測(cè)試劑盒為例：陽(yáng)性（+）：兩條紅色條帶出現(xiàn)，一條位于測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）。陽(yáng)性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有待測(cè)物質(zhì)。陰性（-）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶，在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)無(wú)紅色條帶出現(xiàn)。陰性結(jié)果表明：標(biāo)本中檢測(cè)不出待測(cè)物質(zhì)。無(wú)效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過(guò)程或試紙條已變質(zhì)損壞。在任何情況下，應(yīng)重新測(cè)試。如果問(wèn)題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號(hào)產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。注意：測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)的紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在規(guī)定的觀察時(shí)間內(nèi)，不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng)判為陽(yáng)性結(jié)果。結(jié)果判斷Part 1膠體

8、金免疫層析法結(jié)果判斷陽(yáng)性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶，在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)無(wú)紅色條帶出現(xiàn)。陽(yáng)性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有待測(cè)抗體。弱陽(yáng)性（+）：質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶，在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)有非常弱的紅色條帶出現(xiàn)。弱陽(yáng)性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有少量待測(cè)抗體。陰性 （-）：兩條紅色條帶出現(xiàn)，一條位于測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）。陰性結(jié)果表明：標(biāo)本中檢測(cè)不出待測(cè)抗體。無(wú)效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過(guò)程或試紙條已變質(zhì)損壞。在任何情況下，應(yīng)重新測(cè)試。如果問(wèn)題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號(hào)產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。結(jié)果判斷Part 2酶免疫技術(shù) 以上?？迫A試劑盒為例：1 HBs

9、Ag： COV=陰性對(duì)照平均OD值+0.1 樣本OD值/COV值1.0為陽(yáng)性 樣本OD值/COV值1.0為陰性2 HBsAb、HBeAg： COV=陰性對(duì)照平均OD值2.1（OD0.05按0.05計(jì)算） 當(dāng)樣本OD值COV值為陽(yáng)性 當(dāng)樣本OD值COV值為陰性結(jié)果判斷Part 2酶免疫技術(shù) 3 HBeAb：COV（陰性對(duì)照平均OD值陽(yáng)性對(duì)照平均OD值）0.5 標(biāo)本OD值COV為陰性，COV為陽(yáng)性4 HBcAb：原倍血清COV陰性對(duì)照平均OD值0.3 1:30稀釋血清COV陰性對(duì)照平均OD值0.5 標(biāo)本OD值COV為陰性，COV為陽(yáng)性二、臨床意義臨床意義 臨床意義 臨床意義 HBsAg的定量檢測(cè)是

10、目前監(jiān)測(cè)和預(yù)測(cè)抗乙肝病毒治療后應(yīng)答的新工具，結(jié)合HBV DNA及乙肝病毒e抗原（HBeAg）的陰轉(zhuǎn)和血清轉(zhuǎn)換，我們能更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)患者的近期和遠(yuǎn)期抗病毒治療的療效。因此，該檢測(cè)已在臨床上得以廣泛開(kāi)展，特別是被用于判定抗病毒治療療效，以及根據(jù)早期下降的速度和幅度來(lái)預(yù)測(cè)遠(yuǎn)期療效及決定療程上。臨床意義 聚乙二醇干擾素（Peg IFN） -2a治療乙肝患者的研究結(jié)果顯示，治療12周時(shí)HBsAg定量20000 IU/ml（約占治療人群的16%）,則治療結(jié)束停藥1年時(shí)的HBeAg血清轉(zhuǎn)換率僅為19%（8/43例）。 臨床意義 此外，研究還發(fā)現(xiàn)，患者治療后HBsAg下降速度和幅度還與其長(zhǎng)期清除率有關(guān)。在治療2

11、4周HBsAg1500 IU/ml且同時(shí)出現(xiàn)HBeAg血清轉(zhuǎn)換的患者中，有20%可獲得HBsAg清除。因此，HBsAg定量可以用于指導(dǎo)治療。而且，治療結(jié)束時(shí)HBsAg水平越低，停藥后隨訪的HBsAg清除率越高。臨床意義 布魯內(nèi)托（Brunetto）研究顯示，無(wú)論是HBeAg（+）還是HBeAg（-）的慢性乙肝患者，在接受干擾素治療48周后，若其HBsAg定量10 IU/ml（占88%，171/194例），隨訪3年，僅有2%（4/174例）的患者出現(xiàn)HBsAg消失。同樣，治療48周時(shí)HBsAg下降2 log的患者， 隨訪3年，HBsAg消失率高達(dá)42%；下降2 log患者中，僅有3%的HBsAg

12、消失。因此，在治療結(jié)束時(shí)，對(duì)于那些HBV DNA 陰轉(zhuǎn)并出現(xiàn)HBeAg血清轉(zhuǎn)換的患者，如果HBsAg水平下降不明顯，可考慮延長(zhǎng)療程，以進(jìn)一步提高HBeAg血清轉(zhuǎn)換率和HBsAg清除率。臨床意義檢測(cè)模式分析Part 4檢測(cè)結(jié)果模式分析HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAbPreS1AgPreS1Ab簡(jiǎn)要意義乙肝表面抗原乙肝表面抗體乙肝E抗原乙肝E抗體乙肝核心抗體乙肝前S1抗原乙肝前S1抗體HBsAg陽(yáng)性提示乙肝攜帶；HBeAg、pre-S1Ag、陽(yáng)性提示病毒復(fù)制,傳染性強(qiáng)；HBsAb、HBeAb陽(yáng)性提示機(jī)體具備免疫力，趨于恢復(fù)，pre-S1Ab陽(yáng)性提示肝細(xì)胞有阻斷乙肝病毒感染的功能。

13、-沒(méi)有乙肝病毒感染，不具備免疫力。-+-接種疫苗，乙肝恢復(fù)，具備免疫力。-+急性乙肝恢復(fù)或接種進(jìn)口疫苗，具備免疫力。-+-+接種疫苗或少量乙肝病毒感染后恢復(fù)，免疫力強(qiáng)。+-表面抗原攜帶；急性乙肝病毒感染潛伏期后期。+-+-+-急性乙肝早期，病毒復(fù)制，有傳染性。+-+-+-急慢性乙肝，病毒復(fù)制，有傳染性（即大三陽(yáng)）。+-+-+-+急慢性乙肝，恢復(fù)期或治療有效，有傳染性。+-+-急慢性乙肝，傳染性弱或沒(méi)有傳染性。臨床意義HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAbPreS1AgPreS1Ab簡(jiǎn)要意義乙肝表面抗原乙肝表面抗體乙肝E抗原乙肝E抗體乙肝核心抗體乙肝前S1抗原乙肝前S1抗體HBsAg

14、陽(yáng)性提示乙肝攜帶；HBeAg、pre-S1Ag、陽(yáng)性提示病毒復(fù)制,傳染性強(qiáng)；HBsAb、HBeAb陽(yáng)性提示機(jī)體具備免疫力，趨于恢復(fù)，pre-S1Ab陽(yáng)性提示肝細(xì)胞有阻斷乙肝病毒感染的功能。+-+-急慢性乙肝，病毒復(fù)制有傳染性，乙肝E抗原變異。+-+-急慢性乙肝，沒(méi)有傳染性或傳染性弱（即小三陽(yáng)）。+-+-+急慢性乙肝或乙肝治療后恢復(fù)期，傳染性弱。+-+-急慢性乙肝，病毒復(fù)制有傳染性，乙肝E抗原變異。-+-乙肝核心抗隱性攜帶，有乙肝既往有感染史。-+-急性乙肝恢復(fù)期或既往有感染史。-+-+-+乙肝恢復(fù)期或急性乙肝既往有輕度乙肝病毒感染史。+-+-慢乙肝病毒感染攜帶，傳染性弱或沒(méi)有傳染性。+-+-急

15、性乙肝趨于恢復(fù)，乙肝攜帶，病毒復(fù)制有傳染性。-+-提示乙肝病毒早期感染，有傳染性，建意檢測(cè)HBV-DNA。臨床意義 一、何謂PreS1Ag？ PreS1Ag是乙型肝炎病毒基因組前S1區(qū)編碼的前蛋白，具有很強(qiáng)的免疫原性，是病毒表面抗原(HBsAg)的組成成分。它只存在于具有傳染性的完整的乙肝病毒顆粒上，是黏附和侵襲人體肝細(xì)胞的主要因子。 臨床意義 二、檢測(cè)PreS1Ag的意義 1. PreS1Ag的檢測(cè)能夠彌補(bǔ)乙肝五項(xiàng)檢測(cè)的不足 PreS1Ag出現(xiàn)在急性乙肝感染的最早期，在轉(zhuǎn)氨酶升高前，即可查出，是早期診斷乙肝病毒感染的標(biāo)志。 急性乙肝PreS1Ag轉(zhuǎn)陰越早，預(yù)后越好，提示病毒清除和病情好轉(zhuǎn)。反

16、之，PreS1Ag持續(xù)陽(yáng)性，則提示將發(fā)展成慢性肝炎。 抗HBe()慢性乙肝約占慢肝的30%50%，檢測(cè)PreS1Ag()，提示病毒在機(jī)體內(nèi)繼續(xù)復(fù)制，具有傳染性，患者容易演變?yōu)楦斡不蚋伟?。加查PreS1Ag，彌補(bǔ)了因HBeAg的缺失造成的診治困難。 在乙肝無(wú)癥狀攜帶者中，有一定比例HBeAb()者，如果PreS1Ag()可反映出病毒并沒(méi)有被清除，在體內(nèi)復(fù)制仍然活躍，肝臟存在潛在的病理?yè)p傷。 抗病毒治療，檢測(cè)PreS1Ag可作為治療前的患者篩查(適應(yīng)癥)和治療后的療效判斷。 臨床意義 2. PreS1Ag檢測(cè)能夠加強(qiáng)HBVDNA檢測(cè)的作用 因病毒基因變異的影響，個(gè)別病毒變異株感染的患者HBVDN

17、A檢測(cè)為陰性，PreS1Ag的檢測(cè)可以防止漏檢，并提示可能存在病毒變異?ài)E象。 PreS1Ag是免疫測(cè)定技術(shù)，具有快速、直接、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。PreS1Ag的檢測(cè)與HBVDNA檢測(cè)在乙肝的診斷方面相互補(bǔ)充和加強(qiáng)，就像HBVDNA不能替代乙肝五項(xiàng)的檢測(cè)一樣，同樣HBVDNA不能替代PreS1Ag的檢測(cè)。臨床意義 三、何謂PreS1Ab？ 是HBV的中和抗體，能阻止HBV侵入肝細(xì)胞，抗-PreS1Ab在急性期和恢復(fù)早期出現(xiàn)，預(yù)示病毒正在或已被清除，疾病預(yù)后良好。乙型肝炎病毒 前S1抗體 可作為急性乙型肝炎臨床預(yù)后早期診斷的血清學(xué)指標(biāo)。 臨床意義 四、PreS1Ab意義： 1前S1抗體是急性 HBV 感染

18、最早期出現(xiàn)的抗體比 HBsAb 和抗 HBcIgM 出現(xiàn)早，起到了臨床預(yù)后早期診斷的作用。前S1抗體出現(xiàn)提示預(yù)后良好。前S1抗體參與病毒的清除，前S1抗原/抗體的反轉(zhuǎn)預(yù)示疾病將進(jìn)入恢復(fù)期，急性乙型肝炎患者前S1抗原陰轉(zhuǎn)越早，前S1抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)越早預(yù)后越好。 2對(duì)慢性乙型肝炎患者長(zhǎng)期動(dòng)態(tài)、隨訪 出現(xiàn)血清前S1抗體陽(yáng)性者，HBVDNA陰轉(zhuǎn)率顯著增高或 HBVDNA 含量顯著下降，預(yù)示疾病恢復(fù)良好。 3乙型肝炎病毒 前S1抗體 可作為臨床抗病毒療效疾病預(yù)后的血清學(xué)指標(biāo)。 4總之，乙型肝炎患者前S1抗體出現(xiàn)與否，與病程的進(jìn)展以及預(yù)后有較密切的關(guān)聯(lián)。前S1抗體的檢測(cè)對(duì)乙肝的診斷及治療有較為重要的臨床意義。 三、注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 1 標(biāo)本采集與處理的影響標(biāo)本收集后應(yīng)盡快分離出血清或血漿以避免溶血。檢測(cè)時(shí)應(yīng)盡量使用新鮮的標(biāo)本