鄭州市動(dòng)物園東北虎細(xì)小病毒病的診斷

1、幼齡貓科動(dòng)物犬細(xì)小病的李同義，450008鄭州市動(dòng)物園 鄭州摘要：細(xì)小病是常見的傳染病，可以多種肉食動(dòng)物，特別是幼齡動(dòng)物高，率高。犬科病的技術(shù)已經(jīng)很成熟，通過(guò)臨診檢查、試劑盒檢測(cè)、病理解剖學(xué)檢查和 PCR 檢測(cè)即可確動(dòng)物細(xì)小診。貓科動(dòng)物（東北虎、非洲獅）細(xì)小稱為貓瘟熱，較常見，而貓科動(dòng)物犬細(xì)小的目前分析和 PCR 檢測(cè)，尚未見。對(duì)動(dòng)物園幼東北虎、幼非洲獅犬細(xì)小病例發(fā)病情況進(jìn)行全面確診為犬細(xì)小病。：貓科動(dòng)物；犬細(xì)?。籔CRThe young feline animal diagnosis of canine parvodiseaseTong-yi Li, Jian-tang Wang, Chao

2、-jun Li , CZhengzhou zoo Zhengzhou 450008-pu PeiAbstract:Parvodisease is the common infectious disease, can infect a variety of predators, espelly highincidence of young animals, high mortality. Canine parvodisease diagnosis technology is already very mature,through clinical examination, detection k

3、it, pathological anatomy examination and PCR detection can be diagnosed.Cats (Siberian tiger, African lion) infection parvosaid to feline panleukopenia, more common, and cats ofcanine parvoinfection has not been reported. The young tiger, young African lion in zoo infected canineparvodisease.illness

4、 of comprehensive diagnosisysis and PCR detection, diagnosed with canine parvoKey words: feline; canine small; diagnosis; PCR肉食動(dòng)物細(xì)小屬于細(xì)小科細(xì)小屬，可以多種動(dòng)物，臨以幼齡動(dòng)物的發(fā)燒、性腸炎、脫水、白細(xì)胞減少和心肌炎等癥狀為主要特征。在我國(guó)，無(wú)論是家養(yǎng)動(dòng)物還是野生動(dòng)物均有細(xì)小病的流行，對(duì)我國(guó)犬科、貓科和鼬科等家養(yǎng)、圈養(yǎng)、野生和經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的危害十分嚴(yán)重1。近年來(lái)，隨著的接種，家養(yǎng)寵物尤其是犬貓的細(xì)小病得到良好的控制，而非家養(yǎng)的可動(dòng)物該疾病也時(shí)有發(fā)生。目前，臨對(duì)于犬貓細(xì)小

5、病的主要通過(guò)臨診檢查和試劑盒檢測(cè)，野生動(dòng)物細(xì)小病沒(méi)有的試劑盒檢測(cè)。文章對(duì)動(dòng)物園貓科野生動(dòng)物犬細(xì)小病的過(guò)程進(jìn)行論述。1 臨床資料2014 年 2 月動(dòng)物園診治幾只發(fā)病東北虎、非洲獅，5-10 月齡，開始表現(xiàn)為精神沉郁，厭食，病初表現(xiàn)發(fā)熱，軟便或輕微，鼻鏡干燥；結(jié)膜前期、后期蒼白；初期嘔和劇烈腹瀉。起吐物為肉塊，之后為粘液狀（圖 1）及黃綠色液體，隨后發(fā)展成為頻繁初糞便帶果凍狀粘液，后糞便呈番茄醬色或咖啡色甚至血便（圖 2），味腥臭，排便次數(shù)不定，有里急后重的癥狀。血便后病虎表現(xiàn)為眼球下陷，全身無(wú)力，體重明顯下降，后期出現(xiàn)噴射狀腹瀉，帶有特別難聞的腥臭味。迅速消瘦、脫水，眼窩塌陷，毛細(xì)再充盈時(shí)間延

6、長(zhǎng)。被毛凌亂，皮膚無(wú)彈性，四肢發(fā)涼，精神高度沉郁，休克，于腹瀉后 3-5 天左右從病初癥狀輕微到嚴(yán)重一般超過(guò) 2 天，整個(gè)病程一般不超過(guò)二周。有的出現(xiàn)呼吸。，走路搖擺，甚至站立。圖 1 粘液狀物圖 2 血便2方法2.1 臨診檢查部分患病動(dòng)物體溫升高 40以上，嚴(yán)重者體溫低于正常值。心區(qū)聽診有心內(nèi)性雜音，有的肺部聽診有溫進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)?；疾』⒀?1ml 至真空肝素抗凝管中，混勻后用血常規(guī)分析儀2.2 犬細(xì)小CPV 試劑盒快速法將試劑盒取出平放，用棉簽取患病虎直腸糞便放入配套稀釋液中，充分混勻后用吸管吸取上清液，加 2-3 滴至板條一端加樣，可見有紫色條帶向試紙窗口另一端移動(dòng)，5min左右判定結(jié)果

7、。反應(yīng)槽內(nèi)只出現(xiàn) C 線出現(xiàn)為2.3 病理解剖學(xué)檢查，C 線、T 線均出現(xiàn)為陽(yáng)性。眼觀病變尸體消瘦，皮膚缺乏彈性，可視黏膜蒼白，嚴(yán)重脫水,剖檢可見心肌松軟，顏色變淡，肺充血、；膽囊充盈，肝質(zhì)脆易碎；腹腔積液，漿膜面有素性滲出物；胃底部有性炎癥，呈深紅色；小腸中段腸管擴(kuò)張，腸內(nèi)容物水樣并混有血液，腸黏膜嚴(yán)重脫落、呈暗紅色，空腸、回腸黏膜面充血、，腸內(nèi)容物為淡紅色枯液；直腸內(nèi)膜也較多；腸系膜淋病料 PCR 檢測(cè)病料處理腫大、充血、，切面。采取東北虎全血，4 3000r/min 離心 5min 收集，4保存?zhèn)溆?。東北虎糞便加入 PBS 緩沖液充分研磨，反復(fù)凍融 3 次，4 12000r/min 離心

8、 10min 收集上清液。2.4.2 主要試劑DNA 提取試劑盒、MarkerDL2000、2Taq P公司。2.4.3 主要儀器ix 酶、蛋白酶 K、瓊脂糖凝膠購(gòu)自 TakaraPCR 儀（Thermo）、凝膠成像系統(tǒng)（ProteinSimple）、電泳儀（DYCZ-28A）。2.4.4 PCR 方法應(yīng)用 Primremier 5.0，參照 Genb中登錄的 CPV VP2 蛋白（GenB引物由登錄號(hào)：M38246）設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，擴(kuò)增 CPV VP2部分片段 630 bp，生工生物工程技術(shù)服務(wù)。上游引物：5-ACCGTTACTGACATTCGCT -3，下游引物：5-GTTAAAGTC

9、ACCCA-3。取 100L 臨床樣品，按 DNA 提取試劑盒提取總 DNA 做為 PCR 反應(yīng)模板。在 20L 反應(yīng)體系中，各組分含量為：上下游引物各 20mol/L，模板 2L，2Taq Pix 酶 10 L，ddH2O補(bǔ)足 20L，擴(kuò)增參數(shù)為 94 5 min； 95 10 s、58 10 s、72 30 s，循環(huán) 35 次，同時(shí)做對(duì)照。PCR 產(chǎn)物經(jīng) 1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。3結(jié)果3.1 臨床結(jié)果此次發(fā)病呈性，且出現(xiàn)高燒、血便，高度懷疑為傳染性疾病?；疾?dòng)物多死于脫水、電解質(zhì)紊亂、酸個(gè)/mm3），淋巴細(xì)胞增多。和心肌炎。血液結(jié)果顯示白細(xì)胞顯著減少（4 0008 0003.2 犬細(xì)小

10、用犬細(xì)小劑盒檢測(cè)為CPV、貓瘟熱、弓形蟲試劑盒快速結(jié)果CPV 試劑盒檢測(cè)發(fā)病動(dòng)物的糞便，結(jié)果為弱陽(yáng)性（如圖 3-1）；貓瘟熱試（圖 3-2）；弓形蟲試劑盒檢測(cè)為（圖 3-3）。圖 3-1 CPV 試劑盒圖 3-2 FPV-Ag圖 3-3 Toxopl.Ab結(jié)果結(jié)果結(jié)果3.3 病理解剖學(xué)檢查結(jié)果眼觀病變尸體消瘦，皮膚缺乏彈性，可視黏膜蒼白，嚴(yán)重脫水,剖檢可見心肌松軟，顏色變淡（圖 4-1），肺充血、（圖 4-2）；膽囊充盈，肝質(zhì)脆易碎；腹腔積液，漿膜面有素性滲出物（圖 4-3）；胃底部有性炎癥，呈深紅色；小腸中段腸管擴(kuò)張，腸內(nèi)容物水樣并混有血液，腸黏膜嚴(yán)重脫落、呈暗紅色，空腸、回腸黏膜面充血、，

11、腸內(nèi)容，切面物為淡紅色枯液；直腸內(nèi)膜也較多（圖 4-4）；腸系膜淋。腫大、充血、圖 4-1 心肌松軟、顏色變淡圖 4-2 肺充血、圖 4-3 腹腔積液、圖 4-4 腸道充血、素性滲出物3.4 PCR 檢測(cè)結(jié)果利用設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增 ，經(jīng) 1.0 %瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果顯示，從糞便和中擴(kuò)增均出約 630 bp 的片段(圖 5)。圖 5 CPV VP2綜合發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢病變及。的 PCR 擴(kuò)增檢測(cè)方法將該病例確診為貓科動(dòng)物犬細(xì)小分析細(xì)小犬細(xì)小同屬于細(xì)小流行特點(diǎn)（Canines parvo,CPV）和貓細(xì)小（Feline parvo,FPV）科細(xì)小屬，無(wú)囊膜單鏈 DNA，許多

12、研究證實(shí)，兩者之間具有共同的抗原組成，能發(fā)生交叉性學(xué)反應(yīng)。迄今為止，CPV 只有一個(gè)抗原型，即 CPV-2，并有新亞型 CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c 出現(xiàn)2-5。CPV 除能科動(dòng)物，新亞型還能貓、豹、熊、虎等動(dòng)物6，此為國(guó)外犬外，還能，國(guó)內(nèi)野生貓科動(dòng)物是全身性的，狐貍、狼等犬FPV野生貓科動(dòng)物的較多，而 CPV此次病倒證實(shí)了 CPV 也可不是腸腔到達(dá)腸黏膜，主要家貓已有7，目前未見野生貓科動(dòng)物。細(xì)小CPV 的，通過(guò)血流而兩種類型的細(xì)胞：腸上皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞，導(dǎo)致腸腺上皮細(xì)胞脫落，出現(xiàn)腸道癥狀和心肌炎癥狀。同時(shí)可引起淋巴壞死，破壞骨髓增殖細(xì)胞，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞減少8-10。4.2

13、 細(xì)小的臨床確診目前已經(jīng)建立的細(xì)小檢測(cè)方法有很多種，如血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗(yàn)、電鏡、分離（VI）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）等方法11，就臨床而言，犬用細(xì)?。z體金）快速測(cè)試條測(cè)試操作簡(jiǎn)便快速，結(jié)果易于分析判定，但是卻沒(méi)有針對(duì)虎、獅等野生動(dòng)物的快速測(cè)試條。本次從動(dòng)物園東北虎、非洲試劑盒檢測(cè)，測(cè)試線不十分明獅臨床表現(xiàn)癥狀嚴(yán)重疑似細(xì)小病，使用犬 CPV 快速顯，表現(xiàn)弱陽(yáng)性。為進(jìn)一步確診，采用 PCR 檢測(cè)，顯示為強(qiáng)陽(yáng)性，PCR 具有較好的特異性，靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于試劑盒4.3 致病性觀察本次貓科動(dòng)物發(fā)病方法，為該疾病的提供最有力的。均在 5-10 月齡，相鄰的

14、成年動(dòng)物未見發(fā)病，說(shuō)明犬細(xì)小感染貓科動(dòng)物幼齡動(dòng)物敏感性強(qiáng)，而成年動(dòng)物未見發(fā)病癥狀，是否帶毒未做檢測(cè)（采樣原因）。幼年發(fā)病動(dòng)物從率看，首次發(fā)病率約 50%。1 年后，再次有發(fā)病動(dòng)物癥狀有所減輕，病程縮短，率明顯下降，因此次發(fā)病僅一只動(dòng)物，經(jīng)治療很快痊愈。4.4 幼年貓科動(dòng)物犬細(xì)小病的預(yù)防野生動(dòng)物東北虎、非洲獅屬于保護(hù)動(dòng)物，數(shù)量較少，近年來(lái)頻有貓科野生動(dòng)物細(xì)小，危性，首(FPV)的12-14，因其特殊的生活習(xí)性不宜采取預(yù)防措施，進(jìn)行及時(shí)治療較害極大，亟待引起重視。本次動(dòng)物園貓科動(dòng)物發(fā)病(為 CPV 而非 FPV)即呈次發(fā)病率極高，約為 50%，且病獸的物、唾液、糞便和尿液中含毒量最高，病獸不斷向外

15、排毒而其他健康動(dòng)物及易感的野生貓科動(dòng)物。犬細(xì)小很難徹底清除，對(duì)患病動(dòng)物進(jìn)行并對(duì)其居住環(huán)境進(jìn)行全面有效，來(lái)預(yù)防健康動(dòng)物的是非常有必要的。臨犬細(xì)小犬貓細(xì)小病可以對(duì)犬貓細(xì)小起到良好的控制作用，對(duì)野生貓科動(dòng)物病尚未用過(guò)，是否有效有待考究。參考文獻(xiàn)：1楊,夏咸柱. 肉食獸細(xì)小研究概述A. 中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)外科學(xué)分會(huì)、中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)小動(dòng)物醫(yī)學(xué)分會(huì).獸醫(yī)外科學(xué)第 13 次學(xué)術(shù)研討會(huì)、小動(dòng)物醫(yī)學(xué)第 1次學(xué)術(shù)研討會(huì)暨奶牛疾病第 3 次學(xué)術(shù)會(huì)小動(dòng)物醫(yī)學(xué)分會(huì):,2006:7.集C.中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)外科學(xué)分會(huì)、中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2345,. 犬細(xì)小VP2的遺傳變異分析J.學(xué)報(bào),2009,06:452-459.

16、,. 犬細(xì)小,. 犬細(xì)小:從到進(jìn)化J. 微生物學(xué)報(bào),2011,07:869-875.的分離鑒定、序列分析及VP2的融合表達(dá)D.中國(guó)農(nóng)業(yè),2008.,郭冬春,. 虎源細(xì)小的分離鑒定及其VP2分析J. 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2015,09:721-724.6Decaro N, Desario C, Addie D D, Mar la V ,Vieira M J, Elia G, Zicola A, Davis C ,Thompson G, Thiry E,Truyen U,Buonavoglia C. 2007. The study molecular13(8):1222-1224.demiology of canine parvo, Europe. Emerg Infect Dis,78910，師志海.貓瘟熱的與防治J. 獸醫(yī)導(dǎo)刊,2007,02:55-56.，. 犬細(xì)小病的病理學(xué)觀察J. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2009,08:125-128