《藥物分析》第6章：藥物含量測定方法課件

1、第6章藥物的含量測定方法第1頁，共39頁。 化學分析法 重量分析容量分析含量測定儀器分析法效價測定（生物學法）紫外高效液相色譜法氣相色譜法第2頁，共39頁。 第1節(jié)容量分析法（滴定法）1.滴定分析：是將一種已知準確濃度的標準溶液滴加到被溶液中，直到化學反應完全為止，根據標準溶液的濃度和體積求得被測組份含量的一種方法。在進行滴定分析時：一方面要會配制滴定劑溶液并能準確測定其濃度另一方面要準確測量滴定過程中所消耗滴定劑的體積第3頁，共39頁。滴定：將滴定液從滴定管滴加到被測物質溶液中的過程化學計量點 ：滴加的標準溶液與待測物質按照一定的化學反應式定量反應完全之點 滴定終點 ：在滴定過程中，指示劑正

2、好發(fā)生顏色變化的轉變點。指示劑：能夠指示終點變化的試劑。滴定誤差：滴定終點與化學計量點不一定恰好符合，它們之間存在著很小的差別，由此引起測定結果的誤差稱為滴定誤差。（6）標準溶液 已知準確濃度的溶液（mol/L）第4頁，共39頁。2.滴定液的配制和標定基準物質：能用來直接配制標準溶液的化學試劑滴定度：每毫升標準溶液相當于被測物質的質量（g或mg），以符號T表示直接法（不需標定）間接法（標定）：先將其配制成近似于所需濃度的溶液，然后利用基準物質或另一種標準溶液來確定其準確濃度。第5頁，共39頁。標定：用基準物質或標準溶液準確測定滴定液濃度的過程。校正因子（F）：表示滴定液準確濃度與標示濃度的比值

3、。其范圍應在1.050.95之間，超出該范圍應加入適當的溶質或溶劑予以調整，并重新標定。第6頁，共39頁。標定注意事項 ：a.操作中所用的天平、滴定管、容量瓶和移液管均應校正合格的。b.標定工作應在室溫（1030）下進行，并記錄標定時的溫度。c.根據滴定液的消耗量選用適宜的滴定管，盛裝滴定液前，先用少量滴定液淋洗三次，盛裝滴定液后，應用小燒杯蓋住管口。d.標定中的空白試驗，是指在不加供試品或以等量溶劑代替供試液的情況下，按同法滴定所得的結果。e.標定工作應由初標者和復標者在相同條件下各做3份平行試驗，3份平行試驗結果的相對標準偏差（RSD）不得大于0.1%；初標者的平均值和復標者的平均值的相對

4、標準偏差（RSD）也不得大于0.1%；最后結果按初、復標二者的平均值計算，取4位有效數字。f.配制后的滴定液按藥典規(guī)定的貯藏條件儲存，并在瓶外貼上標簽，注明滴定液名稱、標示濃度、真實濃度或F值、配制和標定日期、標定時的溫度、配制者、標定者、復標者等。g.當滴定液標定時間過長（一般不超過3個月）、或標定與使用時的溫度超過10時，應加溫度補償值或重新進行標定，。h.當滴定液出現(xiàn)渾濁或其他異常情況時，不得使用。倒出剩余的滴定液不得再倒回原瓶，避免污染。第7頁，共39頁。3.滴定的分類按反應方式分類：直接滴定法：滴定液與被測物質直接反應間接滴定法：包括剩余滴定和置換滴定 含量%=含量%=第8頁，共39

5、頁。按反應類型分：酸堿滴定：在水溶液中以酸堿中和反應來測定物質含量的方法配位（絡合）滴定法：以形成穩(wěn)定配合物的配位反應為基礎的滴定分析法。 用于金屬離子的測定采用金屬指示劑（如鉻黑T），如EDTA（乙二胺四醋酸二鈉）氧化還原滴定法： 碘量法：如碘滴定液、硫代硫酸鈉滴定液、淀粉指示劑鈰量法：以硫酸鈰Ce（S04）2作為滴定液 、鄰二氮菲作指示劑 亞硝酸鈉滴定法：溴量法 ：Na2S2O3滴定液 、Br2滴定液 第9頁，共39頁。沉淀滴定法：以沉淀反應為基礎，多以硝酸銀為滴定液，也稱銀量法。按所用指示劑的不同分為鉻酸鉀指示劑法鐵銨礬指示劑法吸附指示劑法非水滴定法：在非水溶劑（有機溶劑與不含水的無機溶

6、劑）中進行滴定分析的方法。 非水堿量法：是以冰醋酸為溶劑，高氯酸為滴定液，甲紫微指示劑，測定弱堿性藥物及其鹽類 非水酸量法：是在堿性溶液中，以甲醇鈉為滴定液，麝香草酚藍為指示劑，二甲基甲酰胺等為溶劑，滴定弱酸性藥物 第10頁，共39頁。 第2節(jié) 分光光度法分光光度法: 是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內的吸光度或發(fā)光強度，對該物質進行定性和定量分析的方法。光是電磁波,常用的波長范圍為：(1)200400nm-紫外光區(qū)；(2)400760nm-可見光區(qū)；(3)7602500nm（12800cm-14000cm-1）-近紅外光區(qū)（4）2.525m（按波數計為4000cm-1400cm-

7、1）-紅外光區(qū)。 第11頁，共39頁。 紫外-可見分光光度法 物質吸收紫外和可見光區(qū)的電磁波產生的吸收光譜 進行定性和定量分析的方法 1.基本原理：朗伯比耳定律 A為吸收度； T為透光率； L為液層厚度，單位為cm ； E為吸收系數，常用的是百分吸收系數()，其物理意義為當溶液濃度為1(g/ml)，液層厚度為1cm時的吸收度值； C為100ml溶液中所含被測物質的量g（按干燥品或無水物計算） 第12頁，共39頁。2.儀器的基本結構光源：200400nm為紫外光區(qū)（氘燈）、400850nm為可見光區(qū) （鎢燈）3.儀器的校正和檢定（1）波長的準確度 （2）吸收度的準確度 （3）雜散光的檢查 光源單

8、色器吸收池檢測器數據記錄處理第13頁，共39頁。4.吸光度的測定 中國藥典2010版對吸光度的測定做了以下要求：（1）溶劑： （2）空白試驗校正： （3）測定波長的檢查 （4）供試品溶液的濃度：應考慮使吸光度在0.30.7范圍內 （5）狹縫寬度的選擇 第14頁，共39頁。5.應用（1）鑒別和檢查：比較吸收光譜的特征參數、吸光度比值、吸收光譜的一致性（2）含量測定：a.對照品比較法： b.吸收系數法 ：c.標準曲線法：借助電腦的Excel電子表格計算 含量%=第15頁，共39頁。6.注意事項（1）空白溶液與供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。如有渾濁，應預先過濾，并棄去初濾液。（2）測定時，除另有規(guī)

9、定外，應以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池。（3）在測定時或改測其它檢品時，應用待測溶液沖洗吸收池34次，用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨損），放入樣品室每次方向應一致。（4）取吸收池時，應拿毛玻璃兩面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。使用完后及時用測定溶劑沖凈，再用純化水沖凈，用干凈綢布或擦鏡紙擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防塵保存。若吸收池內外壁沾污，用脫脂棉纏在細玻璃棒上蘸上乙醇，輕輕擦試，再用純化水沖凈。（5）務必注意經常保持硅膠的干燥，目的是保護光學元件和光電放大器系統(tǒng)不致受潮損壞而影響儀器的正常工作。（6）儀器經過搬動請及時

10、檢查并糾正波長精度，并應經常校準波長精度。第16頁，共39頁。第3節(jié) 色譜分析法色譜法的分離過程：是被分離組分在互不相溶的兩相間分配平衡的過程，由于混合物中各組分的分配系數不同，或被吸附劑吸附能力的不同，則被流動相攜帶移動的速度也不同，達到分離的目的。液相色譜法：以液體為流動相氣相色譜法：以氣體為流動相第17頁，共39頁。一、高效液相色譜法高效液相色譜法：采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱將待測組分進行分離測定的色譜方法。 化學鍵合相色譜：最廣泛的將固定相的官能團鍵合在載體上，形成的固定相 ，一般屬于分配色譜法，不易流失 第18頁，共39頁。（一）基本概念：1.色譜圖：信號-時

11、間曲線2.基線：無樣品時，用流動相沖洗檢測出的流出曲線，一般平行于時間軸3.噪聲：基線信號的波動4.漂移：基線隨時間的變化5.色譜峰：6.拖尾因子：衡量色譜峰的對稱性，應為0.95-1.057.峰寬：8.半峰寬9.標準偏差10.峰面積11.保留時間12.理論塔板數（柱效）：表示色譜柱的分離效率第19頁，共39頁。（二）基本原理 待分離物質在兩相間進行分配時，在固定相中溶解度較小的組分，在色譜柱中向前遷移速度較快；在固定相中溶解度較大的組分，在色譜柱中向前遷移速度較慢，從而達到分離的目的。 依固定相與流動相極性的不同，分為正相色譜和反相色譜1.正相色譜法 流動相極性小于固定相一般用極性物質作固定

12、相，非極性溶劑(如苯、正己烷等)作流動相，主要用于分離極性化合物，極性小的組分先流出，極性大的組分后流出。2.反相色譜法 流動相極性大于固定相一般用非極性物質作固定相，極性溶劑(如水、甲醇、己腈等)作流動相，主要用于分離非極性或弱極性化合物，極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。第20頁，共39頁。（三）固定相和流動相1.固定相 常用化學鍵合相，分極性和非極性鍵合相，如十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18或ODS）和辛基硅烷鍵合硅膠（C8）為最常用的非極性鍵合相，用于反相色譜法； 氨基和氰基硅烷鍵合相為常用的極性鍵合相，用于正相色譜法。2.流動相 有機溶劑+水混合一般為色譜純試劑，經0.45um的微

13、孔濾膜過濾，需脫氣處理 第21頁，共39頁。（四）儀器的基本結構 第22頁，共39頁。日本島津液相色譜儀第23頁，共39頁。1.色譜柱柱管-不銹鋼，填充硅膠和化學鍵合固定相 內徑4.6mm長15cm、20cm和25cm的三種，如安捷倫色譜柱、迪馬色譜柱、迪馬鉆石柱等。 第24頁，共39頁。色譜柱的維護1.最好使用預柱保護分析柱；2.大多數反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是27.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍；3.避免流動相組成及極性的劇烈變化；4.樣品要采用0.22或0.45m濾膜過濾，流動相采用0.45m濾膜過濾并脫氣；5.每次做完分析，要進行沖洗：分析用流動相中若無酸、堿、鹽類物質，建議用90甲

14、醇沖洗3060min；如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，要先用10甲醇沖洗1小時左右，再梯度走到90甲醇沖洗3060min（若用多元泵）。若長時間不用該色譜柱，要沖洗好后，用純甲醇或乙腈封存；6.若流動相中用到離子對試劑，更應該好好沖洗，且該色譜柱最好作為專用，不能再做其它物質分析用；7.普通C18柱盡量避免在40以上的溫度下分析；8.壓力升高是需要更換預柱的信號。第25頁，共39頁。2.檢測器常用紫外檢測器其次有二極管陣列檢測器(DAD)熒光檢測器示差折光檢測器蒸發(fā)光散射檢側器電化學檢測器和質譜檢測器等 第26頁，共39頁。（五） 系統(tǒng)適用性試驗定義：指用規(guī)定的對照品對色譜系統(tǒng)進行試驗

15、，應符合要求。包括理論板數分離度重復性拖尾因子等第27頁，共39頁。1.理論板數(N) ： 說明分離過程，色譜柱的塔板數越多，柱效越高 2.分離度(R)：應大于1.5 3.重復性：相對標準偏差應不大于2.0% 4.拖尾因子(T) ：符合規(guī)定第28頁，共39頁。 （六）在雜質檢查和含量測定中的應用 1.內標法2.外標法 第29頁，共39頁。進樣操作第30頁，共39頁。3.加校正因子的主成分自身對照法（測定雜質含量）4.不加校正因子的主成分自身對照法（無雜質對照品）5.面積歸一化法（只能用于粗略考察供試品中的雜質含量 ）第31頁，共39頁。二、氣相色譜法1.分離原理注入進樣口的樣品經加熱氣化后，被載氣帶入色譜柱，由于其分配系數的不同進行分離，各組分先后進入檢測器，信號記錄儀、積分儀和數據處理系統(tǒng)記錄色譜信號。分配系數小的組分先流出，分配系數大的組分后流出。第32頁，共39頁。2.色譜儀的基本結構由載氣源、進樣器、色譜柱、柱溫箱、檢測器和數據處理系統(tǒng)組成 第33頁，共39頁。1.載氣（流動相）： 如氦、氮和氫等 2.進樣器 ：直接進樣或頂空進樣 微量注射器第34頁，共39頁。3. 固定相和載體 色譜柱為填充柱或毛